Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Imunologia
0 visualizações • 5:45 min. • July 8th, 2025
As células T reguladoras, ou Tregs, são uma subpopulação especializada de células T que exerce efeitos imunossupressores para mediar a homeostase do sistema imunológico. Tregs expressam os marcadores de superfície celular CD4, CD25 e Neuropilin 1, Nrp1, e os fatores de transcrição nuclear forkhead box P3, Foxp3 e Helios.
Para isolar Tregs de linfonodos de drenagem pancreática de camundongos, ou PDLNs, coloque uma malha de metal sobre um tubo cônico. Coloque os PDLNs na malha e triture o tecido para dissociá-lo mecanicamente. Adicione um meio adequado sobre a malha, lavando as células no tubo.
Centrifugue, removendo células mortas e detritos celulares. Ressuspenda as células viáveis no meio. Passe as células por uma tampa de filtro de células encaixada em um tubo de fundo redondo para obter uma suspensão homogênea de célula única, eliminando quaisquer aglomerados de células restantes.
Adicione anticorpos anti-CD4, anti-CD25 e anti-Nrp1 conjugados com fluorocromo. Os anticorpos anti-CD4 e anti-CD25 ligam-se aos seus respectivos antígenos de superfície celular em Tregs. Simultaneamente, o anti-Nrp1 se liga aos receptores Nrp1.
Trate as células com um tampão de fixação de permeabilizaç
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