Monitorando o córtex cerebral com uma matriz de vários eletrodos em resposta a agentes indutores de convulsões

Comece com uma fatia do cérebro contendo o córtex cingulado anterior, ou ACC, e as regiões do tálamo.

Usando uma âncora, prenda a fatia do cérebro a um conjunto de vários eletrodos ou câmara MEA, um dispositivo elétrico de medição de sinal perfundido com líquido cefalorraquidiano artificial oxigenado.

Posicione a estimulação transcraniana por corrente contínua ou eletrodos tDCS com um próximo ao ACC e o outro colocado distal ao ACC para fornecer corrente contínua ao corte do cérebro.

Registre sinais de linha de base e forneça corrente elétrica para a fatia por meio de ETCC.

Ajuste o comprimento do eletrodo e a corrente tDCS para obter sinais de qualidade.

Usando um eletrodo estimulante, forneça pulsos de corrente ao tálamo, que induz convulsões artificiais estimulando o ACC.

Ajuste a corrente para estimular a via tálamo-cíngulo, que conecta o tálamo ao ACC, para obter uma resposta ideal do ACC.

Registre-o através do MEA.

Infundir drogas indutoras de convulsões na câmara MEA

Usando eletrodos estimulantes, forneça pulsos elétricos à via tálamo-cingulado e registre a resposta do ACC induzida por drogas.

Confirme a colocação de uma sonda MEA no sistema multicanal. Use um tubo para guiar o ACSF para dentro da câmara MEA e o outro tubo para guiar o ACSF para fora da câmara. Perfundir continuamente a preparação com ACSF oxigenado quente a 30 graus Celsius. Usando um cotonete úmido, transfira uma fatia de cérebro para o MEA.

Mova cuidadosamente a fatia do cérebro para orientar o ACC acima dos eletrodos. Em seguida, estabilize a fatia do cérebro com uma âncora de fatia para garantir uma boa conexão elétrica entre a fatia e os eletrodos. Em seguida, coloque o eletrodo do ânodo proximal ao ACC e o eletrodo catódico distal ao ACC. Registre a intensidade do campo pelas duas orientações de campo do MEA. Em seguida, forneça as correntes elétricas usando um estimulador.

Ajuste a distância entre os dois eletrodos de cloreto de prata para cerca de 1,5 a 2 centímetros e ajuste a força da corrente do estimulador para tornar o DCS entre 0,5 e 2 miliamperes. Neste procedimento, coloque um eletrodo de tungstênio em MT e forneça pulsos do estimulador para a região talâmica da fatia. Em seguida, use várias intensidades de corrente para determinar o limite que provoca uma resposta ACC.

Mova o eletrodo de tungstênio ao longo da via tálamo-cingulado para obter o perfil de resposta ideal. Registre de 10 a 20 respostas do ACC e use o software para calcular automaticamente a média de todas as respostas do ACC evocadas pela estimulação vazia.

Para induzir atividade semelhante a uma convulsão, adicione 250 micromolares para AP e 5 micromolares bicuculinos à solução de perfusão e continue a perfundir a fatia por 2 a 3 horas. Mantenha a bomba a uma taxa de perfusão relativamente rápida, o que pode ajudar a evitar o acúmulo de um gradiente de pH. Em seguida, coloque o eletrodo de tungstênio em MT e forneça estimulação elétrica para obter um perfil de resposta ACC. Registre de 10 a 20 varreduras e calcule a média das respostas. Depois, substitua a solução de perfusão por ACSF fresco para lavar os medicamentos.