18 de novembro de 2012
Este protocolo descreve a manutenção regular e cuidados para manter as condições ideais para a criação de peixes-zebra. O vídeo ilustra o protocolo para a manutenção do sistema, regular da habitação, alimentação, reprodução e criação de larvas de peixe-zebra.
Este protocolo descreve os cuidados e a manutenção regulares de um laboratório de peixe-zebra. Devido ao crescente interesse na pesquisa com peixe-zebra, a necessidade de estabelecer e manter uma instalação de criação de peixe-zebra também está aumentando. Embora exista literatura disponível sobre a manutenção de um laboratório de peixe-zebra, falta um protocolo em vídeo conciso.
Este vídeo explica a manutenção do sistema, alimentação, reprodução e criação de larvas de peixe-zebra. Olá, sou ABH da Escola de Ciências Médicas da Universidade. Olá, sou Manchi da Instituição Thee.
Hoje vamos mostrar os cuidados e a manutenção regulares de um laboratório de peixe-zebra. O peixe-zebra está se tornando popular em pesquisas genéticas, farmacológicas e comportamentais. Devido à sua alta facilidade de manutenção e desenvolvimento rápido, é altamente suscetível à modulação genética e adequado para triagem de alta produtividade de fármacos.
Esta parte do código fornece ideias sobre a criação de peixes-zebra para usuários desses peixes e pesquisadores que estão considerando o estabelecimento de uma nova instalação para peixes. Então, vamos começar. Várias empresas fornecem sistemas para peixes, mas utilizamos sistemas da Aquatic Habitats.
Em nosso laboratório, os peixes-zebra são mantidos a uma temperatura de 26 a 28,5 graus Celsius e em um ciclo claro-escuro de 14 para 10. Os peixes-zebra são mantidos em um sistema de circulação, que filtra e areja continuamente a água do sistema. Para manter a qualidade da água necessária para um ambiente aquático saudável, o sistema utiliza um conjunto de filtros de diferentes tipos em nosso sistema.
Água dos tanques passa por uma almofada de filtro, filtro em cartucho, filtro biológico, filtro de carvão ativado e filtro UV antes de ser recirculada de volta ao tanque. Água desslorada ou envelhecida é utilizada no sistema de peixe-zebra. A água pode ser desslorada por envelhecimento de, pelo menos, 48 horas.
Verifique diariamente o pH da água do sistema e mantenha-o entre 6,8 e 7,5. Utilizando bicarbonato de sódio, os aquários devem ser limpos regularmente. Para limpar um aquário, feche o fluxo de água para esse tanque, drene a água em excesso inclinando o tanque para trás e remova o tanque cuidadosamente do sistema.
Prepare um tanque limpo e preencha-o com água do sistema. Transfira cuidadosamente os peixes para este tanque usando uma rede. Feche a tampa e substitua a etiqueta com o nome do tanque com cuidado.
Coloque o tanque no sistema. Recoloque o tubo dentro do tanque e ligue o suprimento de água. Descontamine a rede para peixes e o tanque com etanol 70%.
Enxágue com água e deixe secar. Antes de reutilizar, os filtros do sistema de circulação devem ser verificados e substituídos regularmente para garantir seu funcionamento adequado.
O disco do filtro de 120 mícrons é verificado e reposicionado em direção ao fluxo de água todos os dias antes de ser substituído. O filtro de cartucho deve ser trocado semanalmente. Para trocar o filtro de cartucho, remova-o com uma chave inglesa ou com as mãos.
Coloque uma folha de plástico ou uma toalha embaixo para evitar derramamento de água. Insira um novo recipiente, filtro e recoloque a unidade no sistema. Aperte cuidadosamente com as mãos e com uma chave inglesa.
Se necessário, o filtro de carvão deve ser trocado a cada duas semanas. Para trocar o filtro de carvão, remova-o cuidadosamente. Com uma chave nas mãos, descarte o carvão ativado do filtro e substitua-o por carvão ativado novo.
Recoloque o suporte de carvão e insira-o novamente na unidade de filtro. Encaixe a unidade de filtro de volta no sistema. Ligue o sistema e verifique se a água está fluindo em direção ao filtro.
O filtro biológico deve ser limpo a cada seis meses. Para substituir o filtro biológico, remova o filtro do sistema. Libere a pressão do filtro pressionando o botão de liberação de pressão.
Desrosqueie o filtro e remova a tampa. Despeje o conteúdo em um recipiente peneira para separar o Cy Oex da água. Se o Cy Oex estiver muito sujo, substitua-o.
Encha o filtro com o novo citoplasma axonal. Encha a unidade com água do sistema. Feche a tampa do filtro, recoloque a unidade e ligue-a.
Os filtros UV são utilizados para controlar contaminantes biológicos e devem ser substituídos a cada nove a dez meses. Peixes-zebra podem ser alimentados com ração seca ou alimentos vivos, como camarões de salmoura; ovos de camarão de salmoura estão disponíveis em lojas de animais locais e podem ser eclodidos em laboratório seguindo os simples passos descritos aqui. Dissolva sal marinho vermelho em água do sistema para obter uma solução de 30 a 35 gramas por litro.
Encha o incubador de artêmias com água salgada e adicione os ovos de camarão na concentração de 1,2 colheres de sopa por litro. Aire o incubador vigorosamente com uma bomba de ar e deixe os ovos de artêmia eclodirem por cerca de 48 horas. Remova o tubo de ar e deixe a cultura decantar por quatro a cinco minutos.
Os camarões de salmoura fertilizados acumulam-se no fundo do incubador; utilizando a torneira na base do incubador, descarte o primeiro fluxo, que contém ovos não fertilizados. Em seguida, colete os camarões de salmoura fertilizados. Separe os camarões de salmoura da água salgada.
Usando uma rede de coleta de camarão-aranha. Enxágue os camarões-aranha em um recipiente usando água do sistema; os camarões-aranha ficam presentes em alta concentração no fundo do recipiente e agora estão prontos para alimentar os peixes-zebra. Alimente os peixes com os camarões-aranha utilizando uma pipeta ou conta-gotas.
A quantidade de alimento distribuída depende do tamanho da população de tanques individuais. Após a injeção de alimento na água, os peixes famintos nadam para capturar os artêmias, o que é importante para o exercício regular deles. A alimentação com ração seca pode ser realizada utilizando habitats aquáticos, um dispensador de ração para peixes, ou com uma colher simples.
Os peixes-zebra iniciam a reprodução no início da luminosidade. Os ovos podem ser obtidos por meio de reprodução coletiva ou acasalamento aos pares. Embora a reprodução coletiva seja mais eficiente em termos de mão de obra e seja utilizada na coleta regular de embriões, o acasalamento aos pares é preferido quando genes ou mutações devem ser analisados na reprodução em tanque; monte o reprodutor no tanque e introduza-o lentamente dentro de um tanque.
Após o início da iluminação, deixe o conjunto de reprodução no tanque por cerca de 15 minutos para permitir que os peixes acasalem antes de remover o reprodutor do tanque e coletar os ovos. A reprodução em pares é montada no final da tarde, montando o tanque de reprodução e preenchendo-o com água do sistema. Transfira uma fêmea e um macho para lados opostos do tanque.
As fêmeas podem ser diferenciadas dos machos devido à barriga maior. Remova o divisor na manhã seguinte. Logo após o início da luz, deixe os peixes acasalarem sem perturbação por 20 minutos ou até que um número suficiente de embriões seja depositado no fundo do tanque.
Após o acasalamento, devolva os peixes aos seus tanques. Colete os ovos com uma peneira. Lave os embriões cuidadosamente.
Com água do sistema. Transfira os embriões para uma placa de Petri lavando o funil com meio para embriões. Os embriões podem ser observados sob um microscópio.
Os embriões não fertilizados devem ser separados dos embriões fertilizados utilizando uma agulha e uma pipeta. Após a separação dos ovos fertilizados dos não fertilizados, eles são mantidos em uma incubadora a aproximadamente 28,5 graus Celsius por 72 horas, até que as larvas eclodem. Agora as larvas saíram dos CORs e estão nadando livremente.
As larvas precisam ser alimentadas a partir de cinco dias após a fertilização e mantidas em água parada por alguns dias antes de serem transferidas para o sistema. Transfira cuidadosamente as larvas para um tanque contendo uma baffle de tamanho pequeno, com cerca de 300 a 400 mícrons. Após 14 dias, os tanques com larvas podem ser colocados no sistema e receber um fluxo pequeno de água em circulação.
Devem ser usados defletores de tamanhos diferentes dependendo do tamanho das larvas e dos peixes adultos. Geralmente, leva três meses para que os embriões se desenvolvam em adultos sexualmente maduros. Obrigado por assistir ao menu e boa sorte em seus experimentos.
Este protocolo descreve a manutenção e os cuidados regulares necessários para uma criação ideal de peixes-zebra. Inclui procedimentos detalhados para manutenção do sistema, acomodação, alimentação, reprodução e criação de larvas de peixe-zebra.
O estabelecimento de protocolos robustos de manejo de peixe-zebra favorece modelos pré-clínicos confiáveis para pesquisas farmacológicas e genéticas. Práticas padronizadas de alojamento, alimentação e reprodução reduzem a variabilidade biológica e melhoram a reprodutibilidade dos dados em fluxos de trabalho de descoberta precoce. Isso permite triagem fenotípica consistente e validação de alvos em sistemas relevantes para doenças.
A criação de peixe-zebra integra-se ao continuum de descoberta, desde a validação inicial de alvos até a identificação de compostos líderes e caracterização pré-clínica, ao fornecer uma plataforma biológica estável e escalonável.