Modelo de ratos de sangue-cérebro Rompimento de barreira para permitir alvejado Neurovascular Therapeutics

O objetivo geral deste procedimento é romper a barreira hematoencefálica. Isso é feito colocando primeiro o animal em anestesia IV com uma via aérea endotraqueal. Em seguida, a bifurcação da artéria carótida comum é exposta.

Em seguida, um cateter é inserido na artéria carótida externa. Finalmente, o manitol é administrado. Em última análise, podem ser obtidos resultados que mostram a ruptura da barreira hematoencefálica por meio do extravasamento do corante azul de Evan.

A principal vantagem dessa técnica sobre os métodos existentes de terapia intra-arterial é que ela permite que drogas entrem no cérebro, que normalmente não atravessam a barreira hematoencefálica em condições fisiológicas. Isso tem implicações no campo da neurociência porque nos permite testar novas terapias que têm pouca capacidade de atravessar a barreira hematoencefálica. As implicações dessa técnica se estendem à neuro-oncologia, pois muitos agentes quimioterápicos não atravessam a barreira hematoencefálica.

Bem, embora esse método nos forneça informações sobre a nova oncologia, ele também pode nos fornecer informações sobre outros distúrbios neurológicos tratados por medicamentos com baixa permeabilidade à barreira hematoencefálica. Esperamos que a demonstração visual deste método permita que pesquisadores e familiarizados com a cirurgia animal usem essa técnica em seus laboratórios. Para começar, prepare uma solução de manitol a 25% e verifique se não há cristais.

Se houver cristais, dissolva-os colocando o frasco em banho-maria a 80 graus Celsius e agite. Registre periodicamente a massa do animal e prepare duas seringas de 12 cc de propofol para serem administradas a uma taxa de 0,1 mililitros por minuto. Depois de anestesiar o animal em uma câmara de indução, coloque-o em uma toalha descartável e raspe o pescoço e a parte interna das coxas.

Coloque o animal de volta na câmara de indução por três minutos. Para se preparar para a intubação para intubar o rato, comece preparando um tubo endotraqueal com um cateter intravenoso. O tubo deve ser grande o suficiente para permitir um fluxo de ar adequado, mas pequeno o suficiente para caber na traqueia sem causar danos.

Para fazer uma caneta, puxe a agulha para fora do cateter de plástico e quebre a agulha com cuidado. Aproximadamente um centímetro de sua ponta afiada, coloque a agulha de volta no cateter. Em seguida, pendure o rato pelos dentes em uma superfície angular, acenda uma luz diretamente contra o pescoço do animal alinhado entre as orelhas.

Em seguida, insira uma pequena espátula na orofaringe. Aproximadamente três centímetros. Levante enquanto puxa suavemente a língua para fora da boca.

Visualize a abertura da traqueia como um pequeno orifício que abre e fecha. A cada respiração, insira suavemente o cateter no orifício, certificando-se de não forçá-lo na cartilagem da traqueia sensível. Defina o ventilador para um litro por minuto e 60 BPM e, em seguida, éde flúor para 2%Em seguida, conecte o cateter ao ventilador e prenda o tubo na superfície operacional.

Verifique se o animal está anestesiado beliscando o dedo do pé. Proteja a rota prendendo todos os quatro membros da cauda na superfície operacional. Esfregue os locais raspados do pescoço e da virilha com sabonete de clorexidina três vezes.

Em seguida, esfregue com clorexidina. Enxágüe três vezes. Conecte uma seringa de propofol a um conjunto de extensão IV e monte a seringa na bomba de infusão.

Em seguida, usando um bisturi, corte a pele da coxa raspada sem cortar o músculo. Em seguida, use uma pinça para abrir a incisão e localizar a veia femoral e puxe o tecido sobre a artéria para expor o vaso. Insira um cateter IV veterinário de monoejeção 26 G na veia.

Uma vez que a agulha perfure a parede da veia, será mais fácil empurrar. Retraia a agulha e empurre o cateter para dentro do vaso por três a cinco minutos. Após iniciar a infusão de propofol, troque o gás anestésico para uma mistura de 50% O2 e 50% N dois O e desligue o isof flúor.

Para expor a bifurcação da artéria carótida comum, comece usando uma lâmina de bisturi para fazer uma incisão na linha média do pescoço. Corte a fácia superficial ao longo da linha média para alcançar o músculo hióide esternal sobre a traqueia. Afaste o tecido lateralmente para visualizar um grupo de três músculos, o hióide esternal, o di gástrico e a mastóide esternal que formaram o triângulo carotídeo do rato com uma pinça ou tesoura.

Separe a fáscia entre os músculos do triângulo carotídeo para expor a artéria carótida. Use cautério bipolar para dividir os vasos menores junto com gaze e cotonetes Para controlar o sangramento, use afastadores para manter os músculos separados com uma pinça. Mova o tecido para fora da carótida e encontre a bifurcação.

Exponha a artéria occipital logo distal à bifurcação. Cauterize-o entre uma pinça e use um eletrocautério para separá-lo com uma pinça. Exponha totalmente a bifurcação carotídea e o máximo possível da artéria carótida externa ou ECA.

Exponha a artéria tireóidea superior ramificando-se da ECA distal à artéria occipital. Cauterize-o entre as pinças e separe-o para cateterizar o ECA. Coloque dois pedaços de quatro oh seda embaixo dele.

Use um hemostático e pegue um pedaço de sutura e retraia a ECA com a outra sutura. Amarre-o com o nó do cirurgião o mais cranial possível, distal à bifurcação e proximal à ligadura permanente. Amarre frouxamente o nó de outro cirurgião para relaxar a artéria.

Irrigue-o com lidocaína a 1%, encha o cateter com solução salina heparinizada. Em seguida, coloque um clipe de vaso temporário em um ângulo o mais próximo possível da bifurcação. Em seguida, deslize o nó solto em direção ao clipe usando uma microtesoura.

Faça um pequeno corte no ECA logo próximo à ligadura. Se o clipe e a ligadura estiverem seguros, não deve haver sangramento usando uma pinça. Para controlar as paredes da ECA, alimente a extremidade chanfrada do cateter no vaso com o nó do cirurgião solto.

Prenda o cateter. Amarre a artéria ao redor do cateter, remova o clipe e use um cotonete para limpar a área. Avance o cateter cerca de um milímetro distal à bifurcação.

Use uma pinça para segurar a artéria proximal ao nó para garantir que o vaso esteja imobilizado. Para administrar manitol. Encha um conjunto de extensão IV de oito polegadas e uma seringa de seis mililitros com manitol sem criar bolhas de ar.

Armazene-o a 37 graus Celsius para visualizar a ruptura da barreira hematoencefálica, ou o BBBD administre dois miligramas por quilograma de 2% de Evans Blue através de um novo local IV na perna contralateral à infusão de propofol. Conecte o conjunto de extensão a um filtro de cinco mícrons e encha-o com minol para remover bolhas de ar. Em seguida, prenda-o à torneira de parada sem criar bolhas.

Administre manitol a 0,09 mililitros por segundo Por 25 segundos, observe o manitol atingir o equilíbrio com o fluxo na carótida comum em um ponto próximo à artéria carótida interna, deve parecer pulsar com a frequência cardíaca do rato. Certifique-se de que o manitol não flua em direção ao coração, o que indica que o fluxo superou a pressão arterial do rato e pode causar complicações graves. A ruptura da barreira hematoencefálica em um lado do cérebro permite que o azul de Evan entre e manche o hemisfério interrompido de azul, enquanto o hemisfério não disruptivo permanece inalterado.

Aqui está um exemplo de um cérebro sem ruptura da barreira hematoencefálica ou BBBD, e aqui está um exemplo de um cérebro corado de azul após BBBD osmótico, observe que o hemisfério direito está corado e que um pouco de azul é inserido no hemisfério esquerdo perto da fissura longitudinal medial como resultado da mistura do fluxo sanguíneo no círculo de Willis. Essa técnica abre caminho para os pesquisadores explorarem terapias que não cruzam a barreira hematoencefálica em um modelo de rato. Depois de assistir a este vídeo, você deve ser capaz de romper a barreira cerebral borrada cateterizando a artéria carótida e infundindo uma solução de manitol diretamente no cérebro.