Induzir miointimais Hiperplasia Versus aterosclerose em camundongos: uma introdução de dois modelos válidos

O objetivo geral do experimento a seguir é introduzir dois modelos animais válidos que levam ao estreitamento da aorta por meio de diferentes mecanismos. O primeiro modelo é o cateterismo com balão da aorta para criar o desenvolvimento de hiperplasia miointimal. Primeiro, a aorta abdominal infrarrenal é exposta e pinçada.

Em seguida, a aorta é aberta com uma incisão transversal e o cateter balão é introduzido. O endotélio da aorta é então desnudado com o cateter inflado e a cirurgia é concluída. O segundo modelo é uma manipulação dietética de camundongos APOE nulos transgênicos para criar placas ateroscleróticas.

Esses camundongos são alojados em condições padrão e alimentados com uma dieta ocidental rica em lipídios por quatro a seis meses. Em última análise, a análise histológica da hiperplasia miointimal induzida cirurgicamente e do modelo de restrição dietética mostra que elas resultam em estreitamento luminal diferente. Hoje mostraremos dois modelos diferentes para induzir o estreitamento luminal: o modelo de camundongo usando um cateter de balão para induzir lesão do vaso e o modelo de esclerose arterial.

Usando camundongos transgênicos na dieta ocidental, O modelo de cateter de balão pode ajudar a responder a perguntas-chave no campo da estenose. O modelo de camundongo mutante E superior homozigoto transgênico é usado para estudar a fisiopatologia da aterosclerose. Para o modelo de hiperplasia intimal, obtenha camundongos C 57 pretos seis J que pesam cerca de 25 gramas.

Mantenha-os em condições normais com uma dieta normal. Depois de anestesiar o camundongo com 2% de flúor, apare os pelos abdominais, forneça carprofeno por injeção subcutânea para analgesia. Em seguida, alternativamente, desinfete a pele com iodo Provo e etanol 80% em dois ciclos.

Agora verifique se há ausência de reflexos usando uma pitada no dedo do pé. Comece a cirurgia separando a pele e o músculo ao longo da alba linear. Em seguida, enrole os intestinos em uma luva umedecida com solução salina e, em seguida, limpe atentamente o tecido adiposo, cobrindo a aorta abdominal.

Agora exponha a aorta infrarrenal até sua bifurcação. Tomando cuidado para não ferir nenhum navio ramificado. Agora clamp a aorta.

Primeiro, coloque uma pinça microcirúrgica na aorta infrarrenal proximal para interromper o fluxo sanguíneo. Em segundo lugar, aplique uma segunda pinça distal ao lado da bifurcação aórtica. Quando o fluxo sanguíneo for interrompido, faça uma pequena incisão na aorta perto da pinça proximal.

Insira o cateter em direção à pinça distal da aorta para fazer uma lesão endotelial. Desnude a aorta inflando o balão do cateter com cuidado e puxando lentamente o cateter na direção da pinça proximal. Repita isso, manobre duas vezes para um total de três insuflações da aorta.

Agora remova o cateter e feche a incisão aórtica usando suturas contínuas de 10 au prolina. Com as suturas no lugar, abra cuidadosamente o grampo distal se houver sangramento no local da autotomia AOR. Feche o grampo novamente, localize o sangramento e pare com pontos interrompidos adicionais.

Quando não houver sangramento, abra lentamente a pinça proximal. Um pulso aórtico deve ser visível distal à incisão. Agora organize os intestinos em C dois.

Em seguida, feche a parede abdominal começando com a camada muscular usando seis suturas de corrida de prolina OTT. Em seguida, feche a pele com cinco suturas OTT e transfira o mouse de volta para sua gaiola. Nos primeiros três dias de pós-operatório, forneça metrazol à água potável para controle da dor.

Monitore o animal durante toda a sua recuperação, que leva cerca de 28 dias. Para o modelo de aterosclerose, obtenha camundongos com deficiência de A POE com quatro semanas de idade. Alojar esses camundongos em condições padrão com uma dieta ocidental rica em lipídios por quatro a seis meses.

Manter essa dieta durante todo o experimento. Seis horas antes da colheita da aorta, tire o acesso aos alimentos. Em seguida, prepare o mouse para a cirurgia, conforme descrito na seção anterior.

Comece a cirurgia abrindo o peito. Em seguida, corte o ápice do coração e perfunda-o sob pressão suave com três mililitros de aldeído paraforme 4% através da raiz da aorta para fixar a aorta. Em seguida, libere a aorta da raiz até sua bifurcação.

Tente remover o máximo possível do tecido adiposo. Em seguida, corte o arco aórtico e armazene-o em 4% para formaldeído. Agora transfira o coração e a árvore aórtica para uma placa de linha de silicone com PBS na placa.

Corte uma extremidade da árvore aórtica e fixe-a na camada de silicone com pinos finos. Abra a aorta longitudinalmente e deixe o tecido aórtico repousar em PBS em temperatura ambiente por alguns minutos. Em seguida, enxágue o lenço uma vez com etanol a 50% e mergulhe-o em um banho de Sudão.

Três, solução de coloração por cerca de 15 minutos. Após a coloração, enxágue rapidamente o tecido com etanol a 50% por alguns segundos para remover apenas o excesso de Sudão. Três enxágues excessivos removerão muita mancha, enxágue imediatamente o tecido com água destilada e prossiga com a imagem Para o modelo de hiperplasia miointimal, aortas de camundongo desnudas foram colhidas, embebidas em parafina e coradas com cromo As proporções de Im foram calculadas a partir das seções de coloração de tricromo medindo a espessura da íntima e da média.

Usando análise computacional seguida do cálculo da razão, a espessura máxima da placa foi medida como a espessura intimal máxima no lúmen por morpho tree computadorizado. A porcentagem de obliteração luminal foi calculada como a razão entre o novo lúmen interno e o lúmen anterior. A área da placa foi calculada subtraindo-se o novo lúmen interno do lúmen anterior.

As mesmas análises foram realizadas em cortes transversais corados com tricromo do modelo de aterosclerose na valva aórtica, no arco aórtico e na aorta descendente apenas para o modelo de aterosclerose. A aorta descendente foi aberta longitudinalmente e corada com vermelho Sudan. A área da placa e a área total da aorta foram medidas com o auxílio de um computador para análise de ambos os modelos.

Outros métodos, como histopatologia e microscopia de imunofluorescência confocal, podem ser realizados para responder a questões como oblação luminal, morfologia e celularidade. Obrigado por assistir e boa sorte com seus experimentos.