Name: Construção de-base celular Neurotransmissores fluorescentes Engineered Repórteres (CNiFERs) para detecção óptica de neurotransmissores In Vivo (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-05-12T13:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 48 s
Description: Aprenda a construir CNiFERs usando células HEK293 para monitorar neurotransmissores em tempo real no cérebro. Este método permite detectar dinâmicas de neuromoduladores in vivo com imagem fluorescente.

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Agradecemos B. Conklin (Universidade da Califórnia, San Francisco) por fornecer os qi5 G e G QS5 cDNAs, A. Schweitzer para assistência com a eletrônica, N. Taylor para a assistência com a seleção de clones, Ian Glaaser e Robert Rifkin para leitura de prova e Olivier Griesbeck para TN-XXL. Este trabalho foi apoiado por bolsas de investigação, através do Instituto Nacional sobre Abuso de Drogas (NIDA) (DA029706; DA037170), o Instituto Nacional de Imagem Biomédica e Bioengenharia (NIBIB) (EB003832), Hoffman-La Roche (88610A) eo &quot;Neuroscience relacionados com a droga de bolsa de formação abuso &quot;por meio de NIDA (DA007315).

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Os autores não têm nada para revelar.

A criação de CNiFERs proporciona uma estratégia inovadora e original para opticamente medição da libertação de neurotransmissores no cérebro in vivo. CNiFERs são idealmente adequados para a medição da libertação de extrasynaptic, ou seja, o volume de condução, para neurotransmissores. Importante, cada CNiFER possui as propriedades do GPCR nativo, proporcionando uma medição óptica fisiológica das alterações nos níveis de neurotransmissores no cérebro. Até à data, CNiFERs foram criados para a detecção de...

Para entender completamente como os neurônios se comunicam no cérebro, é necessário ter um método para medir a liberação de neurotransmissores in vivo. Existem várias técnicas bem estabelecidas para a medição in vivo neurotransmissores. Uma técnica utilizada é de microdiálise, em que uma cânula é inserida no cérebro e um pequeno volume de fluido cerebrospinal são recolhidas e analisadas por cromatografia líquida de elevado desempenho e detecção electroquímica 1. Microdiálise tem uma resolução espacial na ordem de alguns diâmetros da sonda, por exemplo, ~ 0,5 mm para uma microssonda de 200 um de diâmetro. A resolução temporal desta técnica, no entanto, é lento devido a intervalos de amostragem que duram tipicamente ~ 5 minutos ou mais 1. Além disso, as análises não são feitos em tempo real. Uma outra técnica é a pesquisa rápida voltametria cíclica (FSCV), que usa uma sonda de fibra de carbono que é introduzido no cérebro. FSCV tem excelente Tempresolução oral (subsecond), de alta sensibilidade (nanomolar), e resolução espacial com o diâmetro da sonda de 5 a 30 um. No entanto, está limitado a FSCV transmissores, que produzem uma característica de oxidação e redução perfil com tensão em uma sonda potenciométrica de carbono 2. Uma terceira técnica para medir neurotransmissores é diretamente através de neurotransmissores geneticamente codificado (NT) biossensores 3. Com este método, uma proteína de fusão é criada que contém um domínio de ligação ao ligando para um transmissor acoplado a uma transferência de energia de ressonância de fluorescência (FRET) par com base na fluoróforos de 4 ou 5 permutado um GFP. Ao contrário dos dois métodos anteriores, estes biossensores são geneticamente codificado e expresso na superfície de uma célula hospedeira, tal como um neurónio, através da produção de animais transgénicos ou de forma aguda com a utilização de agentes virais para infectar as células. Até à data, biossensores geneticamente codificados só foram desenvolvidos para detecting glutamato e GABA 3-5. Limitações com estas técnicas têm sido a baixa sensibilidade, na gama nM, e a incapacidade para expandir a detecção de um grande número de emissores, por exemplo, neurotransmissores clássicos, neuropéptidos e neuromoduladores, que sinalizam através de receptores acoplados à proteína G (GPCRs). Na verdade, existem cerca de 800 GPCRs no genoma humano. Para lidar com essas deficiências, desenvolvemos uma ferramenta inovadora para liberação medida opticamente de qualquer neurotransmissor que sinaliza através de um GPCR. CNiFERs (com base nas células repórteres fluorescentes modificadas neurotransmissor) são células HEK293 clonais manipuladas para expressar um GPCR específico que, quando estimulados, desencadeia um aumento na intracelular [Ca2 +] que é detectado por um sensor baseado em FRET de Ca 2+ geneticamente codificado, TN-XXL. Assim, obrigatório neurotransmissor CNiFERs transformar-se numa alteração na fluorescência, proporcionando uma óptica R em tempo real e directa do receptoread-out da actividade neurotransmissora local. Ao utilizar o receptor nativo para um determinado neurotransmissor, CNiFERs reter a especificidade química, afinidade e dinâmicas temporais dos receptores expresso endogenamente. Até à data, criámos três tipos de CNiFERs, um para detectar a acetilcolina utilizando o receptor M1, um para a detecção de dopamina utilizando o receptor D2, e um para detectar a norepinefrina usando o receptor de 6,7 α1a. A tecnologia CNiFER é facilmente expansível e escalável, tornando-se passível de qualquer tipo de GPCR. Neste artigo Jove, que descrevem e ilustram a metodologia para conceber, realizar, e teste em CNiFERs vivo para qualquer aplicação.

<table><tbody><tr><td>pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro&nbsp;</td><td>System Biosciences</td><td>CD510B-1</td><td>Clonagem: para gerar lentivírus</td></tr><tr><td>12 x 75 *Tubo de Ensaio BD Falcon de Polipropileno de Alta Clareza Fundo Redondo</td><td>BD Biosciences</td><td>352063</td><td>FACS</td></tr><tr><td>BD 40 um Filtros de células Falcon</td><td>BD Biosciences</td><td>352340</td><td>FACS</td></tr><tr><td>0.05% Tripsina EDTA&nbsp;</td>Placa de 96 Poços <td>Invitrogen</td><td>25200056</td><td>FACS</td></tr><tr><td>, fundo plano, transparente&nbsp;</td><td>Corning&nbsp;</td><td>3596</td><td>FACS</td></tr><tr><td>96 placas de cultura de células de poços&nbsp;</td><td>Corning&nbsp;</td><td>CLS3997</td><td>Flexstation</td></tr><tr><td>Optilux fundo preto transparente&nbsp;</td><td>Corning&nbsp;</td><td>3603</td><td>Flexstation</td></tr><tr><td>Flexstation pipet tips</td><td>Molecular Devices</td><td>9000-0911</td><td>Flexstation</td></tr><tr><td>Cloreto de Acetilcolina Flexstation&nbsp; &nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A2661</td><td>Flexstation</td></tr><tr><td>Norepinefrina&nbsp; &nbsp;</td><td>Cloridrato de dopamina Sigma-Aldrich</td><td>A7256</td><td>Flexstation</td></tr><tr><td>&nbsp; &nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>PHR1090</td><td>Flexstation</td></tr><tr><td>GABA&nbsp; &nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A2129</td><td>Flexstation</td></tr><tr><td>Histamine&nbsp; &nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H7125</td><td>Flexstation</td></tr><tr><td>Glutamato&nbsp; &nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>49621</td><td>Flexstation</td></tr><tr><td>Epinefrina&nbsp; &nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E4642</td><td>Flexstation</td></tr><tr><td>Somatostatina&nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S1763</td><td>Flexstation</td></tr><tr><td>5HT&nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H9523</td><td>Flexstation</td></tr><tr><td>VIP&nbsp;</td><td>Alpha Diagnostics Inc.&nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>SP-69627</td><td>Flexstation</td></tr><tr><td>Orexin A</td><td>Alpha Diagnostics Inc.&nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>12-p-01</td><td>Flexstation</td></tr><tr><td>Substância P&nbsp; &nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S6883</td><td>Flexstation</td></tr><tr><td>Adenosina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A4036</td><td>Flexstation</td></tr><tr><td>Melatonina&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M5250C</td><td>Flexstation</td></tr><tr><td>Leitor de Placa de Fluorescência & software</td><td>Molecular Devices</td><td>Flexstation 3</td><td>Flexstation</td></tr><tr><td>&nbsp; DMEM (glicose alta) com Glutamax&nbsp; &nbsp;</td><td>Life Technologies</td><td>10569-010</td><td>Cultura de tecidos</td></tr><tr><td>&nbsp; Soro fetal bovino</td><td>Life Technologies</td><td>10082-139</td><td>Cultura de tecidos</td></tr><tr><td>&nbsp; Pen/Strep&nbsp; antibióticos</td><td>Life Technologies</td><td>15140-122</td><td>Cultura de tecidos</td></tr><tr><td>&nbsp; Puromicina&nbsp; &nbsp;</td><td>InvivoGen</td><td>ant-pr-1</td><td>Cultura de tecidos</td></tr><tr><td>&nbsp; Fibronectina&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F0895</td><td>Cultura de tecidos</td></tr><tr><td>CoolCell LX Caixa de congelamento de células sem álcool com taxa controlada</td><td>Bioexpress</td><td>D-3508)</td>Cola de cianoacrilato <td>para cultura de</td></tr><tr><td>tecidos&nbsp;</td><td>Loctite</td><td>Loctite no. 495</td><td>cirurgia e injeção estereotáxica</td></tr><tr><td>filme plástico de parafina&nbsp;</td><td>VWR</td><td>Parafilm&reg;</td><td>cirurgia e injeção estereotáxica</td></tr><tr><td>Nanoinjetor</td><td>Drummond</td><td>3-000-204</td><td>cirurgia e injeção estereotáxica</td></tr><tr><td>Eletrodos de vidro</td><td>Drummond</td><td>3-000-203G</td><td>cirurgia e injeção estereotáxica</td></tr><tr><td>broca manual</td><td>OSADA</td><td>Exl-M40</td><td>cirurgia e injeção estereotáxica</td></tr><tr><td>Rebarbas para broca</td><td>Fine Scientific</td><td>19007-05; 19007-07)</td><td>cirurgia e injeção</td></tr> <tr><td>estereotáxicaBanho de esterilização</td><td>FST</td><td>18000-45, cirurgia de esterilizador de esferas quentes</td><td>e câmara/máscara de isoflurano de injeção estereotáxica</td></tr><tr><td></td><td>Highland Medical Equipment</td><td>564-0427, máquina anestésica de mesa HME 109 com vaporizador de isoflurano, medidor de vazão de O2, válvula de gangue; 564-0852, Câmara de Indução 16X7X7,5cm</td><td>cirurgia e injeção estereotáxica</td></tr><tr><td>Escopo 3D com braço</td><td>Cirurgia Zeiss</td><td></td><td>e injeção estereotáxica</td></tr><tr><td>cirurgia de luz</td><td></td><td></td> de fibra óptica <td>e injeção estereotáxica</td></tr><tr><td>Betadine&nbsp;</td><td></td><td></td><td>cirurgia e injeção estereotáxica</td></tr><tr><td>70% (v/v) álcool</td><td></td><td></td> isopropílico <td>cirurgia e injeção estereotáxica</td></tr><tr><td>Almofadas de preparação de iodo-povidona</td><td>dynarex</td><td>1108</td><td>cirurgia e injeção estereotáxica</td></tr><tr><td>NaCl 0,9% (injeção, USP, 918610)</td><td></td><td></td><td>cirurgia e injeção estereotáxica</td></tr><tr><td>CICLOSPORINA (INJEÇÃO, USP)</td><td></td><td></td><td>cirurgia e injeção estereotáxica</td></tr><tr><td>Buprenex (injeção) buprenorfina (0,03 &mu; g por g roedor)</td><td>Cirurgia Sigma-Aldrich</td><td></td><td>e injeção estereotáxica</td></tr><tr><td>Pomada oftálmica&nbsp;</td><td>Akorn</td><td>NDC 17478-235-35</td><td>cirurgia e injeção estereotáxica</td></tr><tr><td>Cirurgia</td><td>Surgifoam Ethicon</td><td></td><td>e injeção estereotáxica</td></tr><tr><td>Cimento dental grip</td><td>Dentsply</td><td>#675571, cirurgia 675572</td><td>e injeção estereotáxica</td></tr><tr><td>SuperCola Instantânea&nbsp;</td><td>NDindustries</td><td></td><td>cirurgia e injeção estereotáxica</td></tr><tr><td>LOCTITE 4041</td><td></td><td></td><td>cirurgia e injeção estereotáxica</td></tr><tr><td>METABOND</td><td>C& B</td><td></td><td>cirurgia e injeção estereotáxica</td></tr><tr><td>nº 0 tampa de vidro</td><td>Fisher</td><td></td><td>cirurgia e injeção estereotáxica</td></tr><tr><td>quadro estereotáxico&nbsp;</td><td>Cirurgia Kopf</td><td></td><td>e injeção estereotáxica</td></tr><tr><td>Sonda retal e almofada de aquecimento</td><td>FHC</td><td>40-90-8D, controlador de temperatura DC, 40-90-2-06, almofada de aquecimento de 6,5X9,5 cm40-90-5D-02, cirurgia de sonda de termistor retal</td> e placa de ensaio óptica <td>de injeção estereotáxica</td></tr><tr><td>para imagem Cirurgia</td><td>Thorlabs</td><td></td><td>e injeção estereotáxica</td></tr><tr><td>Óleo mineral</td><td>Fisher</td><td>S55667</td><td>cirurgia e injeção estereotáxica</td></tr><tr><td>Kwik-Cast (Elastômero de silicone)</td> Instrumentos <td></td><td>de Precisão Mundial</td><td>cirurgia e injeção estereotáxica</td></tr><tr><td>Sutura&nbsp; &nbsp;</td><td>Ethicon</td><td>18' ', 1667, 4-0</td><td>cirurgia e injeção estereotáxica</td></tr><tr><td>Tesoura</td><td>Fine Scientific Tools</td><td>91500-09, 15018-10</td><td>cirurgia e injeção estereotáxica</td></tr><tr><td>Forcepts</td><td>Fine Scientific Tools</td><td>11252-30; # 55, 11295-51; Grafe, 11050-10</td><td>cirurgia e injeção estereotáxica</td></tr><tr><td>Estudante Halsted-Mosquito Hemostats</td><td>Fine Scientific Tools</td><td>91308-12</td><td>cirurgia e injeção estereotáxica</td></tr><tr><td>Kit de cauterizador de pequenos vasos</td><td>Fine Scientific</td><td>Tools 18000-00</td><td>cirurgia e injeção estereotáxica</td></tr><tr><td>Esterilizadores de esferas quentes</td><td>Fine Scientific Tools</td><td>18000-45</td><td>cirurgia e injeção</td></tr> <tr><td>estereotáxicaEstojo de instrumento com tapete de silicone</td><td>Fine Scientific Tools</td><td>20311-21</td><td>cirurgia e injeção estereotáxica</td></tr><tr><td>Recipientes de esterilização de plástico com tapete de silicone</td><td>Fine Scientific Tools</td><td>20810-01</td><td>cirurgia e injeção estereotáxica</td></tr><tr><td>2P escopo de fluorescência de estágio fixo para in vivo imagem</td><td>Olympus</td><td>FV1200 MPE</td><td>imagem in vivo</td></tr><tr><td>Laser</td> <td>multifotônicoSpectraPhysics</td><td>Mai Tai DeepSee</td><td>imagem in vivo</td></tr><tr><td>Laser Verde Olympus</td><td></td><td>473 nm Laser</td><td>in vivo imagem</td></tr><tr><td>xy base translacional</td><td>Scientifica</td><td>MMBP</td><td>imagem in vivo</td></tr><tr><td>Cubo de filtro FRET para YFP e CFP</td><td>Olympus</td><td></td><td>imagem in vivo</td></tr><tr><td>10x e 40x objetivos de imersão em água</td><td>Olympus</td><td></td><td>imagem in vivo</td></tr><tr><td>mesa de ar</td><td>Newport</td><td></td><td>in vivo</td></tr><tr><td>imagem personalizada de gaiola à prova de luz</td><td>Thorlab</td><td></td><td>in vivo</td></tr></tbody></table>

construção de-base celular neurotransmissores fluorescentes engineered repórteres (cnifers) para detecção óptica de neurotransmissores<em&gt; in vivo</em

Construction of Cell-based Neurotransmitter Fluorescent Engineered Reporters (CNiFERs) for Optical Detection of Neurotransmitters In Vivo

Com base nas células repórteres fluorescentes neurotransmissor modificadas (CNiFERs) fornecer uma nova ferramenta para neurocientistas para detectar opticamente a libertação de neurotransmissores no cérebro in vivo. A CNiFER específica é criada a partir de uma célula de rim embrionário humano que expressa estavelmente um receptor específico G acoplado a proteína, que os casais a G q / 11 proteínas G, e uma baseada em FRET Ca 2+ -detector, TN-XXL. A activação do receptor conduz a um aumento no sinal de FRET. CNiFERs tem sensibilidade nM e uma resposta temporal do segundo porque um clone CNiFER utiliza o receptor nativo para um neurotransmissor particular, por exemplo, para D2R dopamina. CNiFERs são directamente implantadas no cérebro, permitindo-lhes sentir a libertação de neurotransmissores, com uma resolução espacial de menos de cem um, tornando-as ideais para medir a transmissão de volume in vivo. CNiFERs também podem ser utilizados para pesquisar outros fármacos para o potencial reactividade cruzada em VIvo. Nós recentemente expandiu a família de CNiFERs para incluir GPCRs que o casal a G i / o G proteínas. CNiFERs estão disponíveis para a detecção de acetilcolina (ACh), dopamina (DA) e norepinefrina (NE). Dado que qualquer GPCR pode ser utilizado para criar um novo CNiFER e que há aproximadamente 800 GPCRs no genoma humano, descrevemos aqui o procedimento geral para conceber, realizar, e testar qualquer tipo de CNiFER.

Um CNiFER é derivada de uma célula de rim embrionário humano (HEK293) que é manipulada para expressar de forma estável pelo menos duas proteínas: uma proteína G específica acoplada do receptor (GPCR) e uma [Ca 2+] Sensor geneticamente codificado, TN-XL. TN-XXL sofre de ressonância de fluorescência de transferência de energia (FRET) entre proteínas ciano e amarelo fluorescente, eCFP e citrino, respectivamente, em resposta ao Ca 2+ 6,15. A activação de GPCR...

Nós apresentamos um protocolo para criar baseada em células neurotransmissor fluorescentes repórteres modificadas (CNiFERs) para a detecção óptica de liberação do neurotransmissor volumétrica.

Construção de-base celular Neurotransmissores fluorescentes Engineered Repórteres (CNiFERs) para detecção óptica de neurotransmissores<em&gt; In Vivo</em

Cell-based neurotransmitter fluorescent engineered reporters (CNiFERs) provide a new tool for neuroscientists to optically detect the release of ...

O objetivo geral deste vídeo é descrever a metodologia para a construção e testagem de Sensores Fluorescentes Baseados em Células para Neurotransmissores, ou CNiFERs, que podem ser usados para monitorar opticamente a liberação de neurotransmissores específicos in vivo. Este método pode ajudar a responder questões fundamentais em neurociência sobre o momento e a liberação de neuromoduladores no cérebro. A principal vantagem desta técnica é que ela pode ser adaptada para qualquer tipo de neurotransmissor ou neuromodulador que sinalize por meio de GPCRs.A demonstração regional deste método é útil. A injeção in vivo e a subsequente obtenção de imagens de CNiFERs são tecnicamente desafiadoras. Para iniciar este procedimento, observe as células HEK293 que contêm o detector de cálcio com base frontal e a proteína G quimérica em um frasco T-25.Em seguida, cultive as células em um incubador umidificado, a 37 graus Celsius, com cinco por cento de CO2, até atingirem cerca de 50% de confluência. Depois disso, aspire o meio do frasco T-25. Adicione dois mililitros da mistura de meio de lentavírus e incube o frasco T-25 a 37 graus Celsius, com 5% de CO2.No dia seguinte, colete as células HEK293

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JoVE Journal

Neuroscience

Neurociência

Com o crescente interesse em terapias com células-tronco, técnicas de imagem molecular são ideais para monitorar o comportamento de células-tronco após o transplante. Genes repórter luciferase permitiram não-invasivo de avaliação, repetitiva de sobrevivência da célula, localização e proliferação in vivo. Este vídeo vai demonstrar como controlar a proliferação CTEh em um rato vivo.

In vitro e in vivo de imagens Gene Reporter bioluminescência de células estaminais embrionárias humanas

Nós desenvolvemos uma nova técnica de quantificar as alterações de receptores de acetilcolina nicotínicos no interior das regiões subcelulares de subtipos específicos de neurónios no SNC a compreender melhor os mecanismos da dependência da nicotina, usando uma combinação de abordagens, incluindo a marcação da proteína fluorescente do receptor usando o arrastamento na abordagem e espectral imagiologia confocal.

Imagem Confocal Espectral de fluorescência com a tag receptores nicotínicos na Knock-em camundongos com a administração de nicotina crônica

Fonte: Lacin, E., et al. Construção de Repórteres de Engenharia Fluorescente de Neurotransmissores Baseados em Células (CNiFERs) para Detecção Óptica de Neurotransmissores In Vivo. J. Vis. Exp. (2016)Este vídeo demonstra uma técnica para obter imagens da liberação de neurotransmissores in vivo usando repórteres de engenharia fluorescente de neurotransmissores baseados em células (CNiFERs), células repórter especializadas pré-injetadas no córtex de camundongo. Posicionado sob um microscópio de...

Liberação de neurotransmissores de imagem usando repórteres de engenharia fluorescente de neurotransmissores baseados em células

Com o seu pequeno corpo transparente, neuroanatomia bem documentado e uma série de técnicas genéticas passíveis e...

Na imagem cálcio vivo Neuronal em C. elegans

Aqui nós apresentamos um romance Ca 2+ -Imaging abordagem usando um repórter bioluminescente. Esta abordagem utiliza um GFP-aequorina constructo fundido que se liga a Ca 2+ e emite luz, eliminando a necessidade de excitação da luz. Significativamente este método permite imagem longa e contínua, o acesso a estruturas cerebrais profundas e alta resolução temporal.

In Vivo funcional do cérebro Imagiologia Abordagem Baseada em cálcio Bioluminescent Indicador GFP-aequorina

Aqui nós apresentamos um protocolo ao cálcio imagem sinalização em populações de tipos de células individuais na junção neuromuscular murino.

Ex Vivo Imagem de célula específica cálcio sinalização em sinapse tripartida do diafragma de rato

Neste relatório, nós descrevemos um protocolo simples para estudar o conseqüência do neurite em neurônios corticais do rato embrionário cotransfecting com EGFP e a proteína do interesse.

Um ensaio com base em proteínas de fluorescência verde reforçada para estudar o crescimento do neurite em neurônios primários

Apresentamos um protocolo de duas partes que combina imagens fluorescentes de cálcio com hibridização in situ, permitindo que o experimentador correlacione padrões de atividade de cálcio com perfis de expressão genética em um nível unicelular.

Imagem fluorescente de cálcio e subsequente hibridização em Situ para caracterização do precursor neuronal em xenopus laevis

Dois métodos relacionados são descritos para visualizar eventos subcelulares necessários para transmissão sináptica. Esses protocolos permitem o monitoramento em tempo real da dinâmica do influxo de cálcio pré-sináptico e da fusão da membrana vesícula sináptica usando imagens de células vivas de neurônios in vitro cultivados.

Medição fluorescente em tempo real de funções sinápticas em modelos de esclerose lateral amiotrófica

Usando camundongos fluorescentes transgênicos, protocolos detalhados são descritos para avaliar o transporte in vivo axonal de endosários e mitocôndrias dentro de axônios motores e sensoriais do nervo ciático intacto em animais vivos.

Expansão do Kit de Ferramentas para Imagens In Vivo do Transporte Axonal

Os métodos atuais descrevem uma abordagem não-ratiométrica para imagens subcompartimentais de cálcio de alta resolução in vivo em Caenorhabditis elegans usando indicadores de cálcio codificados geneticamente prontamente disponíveis.

Imagem Subcelular da Manipulação Neuronal de Cálcio In Vivo

Aprenda a construir CNiFERs usando células HEK293 para monitorar neurotransmissores em tempo real no cérebro. Este método permite detectar dinâmicas de neuromoduladores in vivo com imagem fluorescente.

Construção de-base celular Neurotransmissores fluorescentes Engineered Repórteres (CNiFERs) para detecção óptica de neurotransmissores In Vivo (Vídeo) | JoVE Journal

Construção de-base celular Neurotransmissores fluorescentes Engineered Repórteres (CNiFERs) para detecção óptica de neurotransmissores

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