A completa e atualizada "Rotifer policultura Method" para a criação de Primeira Zebrafish Alimentar

O objetivo geral do Método de Policultura de Rotíferos é aproveitar a produtividade natural e as características biológicas dos rotíferos de água salgada para criar um ambiente que promova o crescimento rápido e a sobrevivência máxima das larvas de peixe-zebra que se alimentam primeiro. A principal vantagem dessa técnica é que ela diminui drasticamente a quantidade de tempo e espaço necessários para criar com sucesso um grande número de larvas de peixe-zebra para uso em experimentos de pesquisa. Comece a manutenção da cultura de rotíferos enchendo o recipiente de cultura de alimentação, ou FCV, até 90% da capacidade com água doce limpa e sem cloro dosada com 10 gramas por litro de sais de aquário.

Certifique-se de que a água esteja bem misturada e que todo o sal esteja totalmente dissolvido. Em seguida, defina o fluxo de ar para o recipiente para que ele mantenha uma fervura contínua. Meça a salinidade do líquido com um refratômetro.

Em seguida, experimente os rotíferos no recipiente de cultura, ou CV.Certifique-se de que a cultura esteja bem misturada. Em seguida, colete três amostras de dois a três mililitros usando uma pipeta de transferência de diferentes partes da cultura e combine as amostras em um tubo. Transfira um a dois mililitros da amostra combinada para uma placa de Petri.

Visualize a amostra sob um microscópio de dissecação e verifique a qualidade da cultura. Adicione 100 microlitros de solução de iodo de Lugol a 50% à amostra para imobilizar os rotíferos e contá-los. Pegue imediatamente uma subamostra de dois mililitros com uma pipeta de plástico e distribua um mililitro em uma lâmina de contagem Sedgewick Rafter.

Usando o microscópio de dissecação, conte a área da lâmina quanto necessário para contar até 100 rotíferos intactos e o número total de ovos ligados aos rotíferos. Em seguida, calcule o número de rotíferos por mililitro para uso posterior. Inicie a colheita removendo o suprimento de ar e o filtro de fio dental.

Abra lentamente a válvula na parte inferior do CV e deixe a água fluir suavemente para um coletor de plâncton com uma tela de malha de 53 mícrons. Colete a água que sai do fundo do coletor depois de filtrar em um balde ou drenar. Em seguida, encha uma garrafa com 10 a 15 gramas por litro de água salgada limpa.

Inverta a tela sobre o FCV e lave os rotíferos no FCV com um jato suave de água salgada. Inicie o temporizador de medição programável ou PMT para fornecer alimentação ao FCV. Em seguida, esfregue todo o interior do CV com um esfregão limpo.

Crie uma nova mistura de 15 gramas por litro em um balde de cinco galões para substituir o volume de água perdido na colheita. Agite a solução vigorosamente até que a mistura esteja completamente dissolvida. Em seguida, adicione a solução ao CV.Em seguida, enxágue o filtro de fio dental com um spray de alta pressão.

Quando o filtro de fio dental estiver livre de detritos, devolva-o ao CV.Ajuste as taxas de alimentação das algas entregues ao CV alterando a duração de cada evento de dosagem. Após 24 horas, repita o processo, iniciando a colheita dos rotíferos remanescentes no FCV. Concentre os rotíferos em dois litros de água fresca, limpa e sem cloro com cinco gramas por litro de sal.

Estes podem ser armazenados a quatro graus Celsius como um suprimento de reserva ou usados para alimentar estágios posteriores de peixes além do que é descrito neste protocolo. Colete embriões de peixe-zebra de um evento de desova despejando embriões gerados em uma peneira de chá. E então, enxaguar suavemente com água de peixe estéril de uma garrafa de lavagem em placas de Petri.

Depois que todos os embriões forem coletados, incuba-os. Comece a fase de policultura quando mais de 90% das larvas eclodidas estiverem nadando ativamente na coluna d'água. Adicione 500 mililitros da cultura de rotíferos diretamente do FCV a um tanque de viveiro de 3,5 litros.

Em seguida, despeje delicadamente as larvas de uma placa de Petri no tanque do berçário. Certifique-se de que nenhuma larva permaneça no prato. Adicione 500 mililitros de água de peixe limpa e condicionada de uma fonte de água dedicada ao tanque até um volume final de um litro e 5 gramas por litro de salinidade final.

Observe o tanque de policultura pelo menos uma vez por dia para garantir que os rotíferos e peixes estejam presentes e crescendo. Verifique se os rotíferos são visíveis em toda a coluna de água. Certifique-se de que os peixes também estejam visíveis dentro da coluna d'água e que estejam nadando entre os rotíferos.

É fundamental avaliar o status de cada tanque diariamente para garantir que eles estejam vivos e nadando com rotíferos disponíveis para todas as larvas de peixes. Com a garantia de que os rotíferos e peixes estão crescendo, inicie o fluxo normal de água através do tanque. Por fim, coloque uma tela sobre a porta de drenagem para garantir que as larvas não sejam eliminadas do tanque.

O desempenho típico de uma cultura de rotíferos foi monitorado durante um período de 30 dias e produziu uma densidade média de cultura de 932 rotíferos por mililitro. E um máximo de 1.330 rotíferos por mililitro. A população de rotíferos em um tanque de policultura com peixe-zebra tem uma densidade média de rotíferos de 589,4 rotíferos por mililitro.

O valor mínimo de 481 rotíferos por mililitro é 10 vezes melhor do que o trabalho publicado anteriormente. O peixe-zebra mostrou um crescimento constante a cada dia durante o período de cinco dias, de um comprimento total médio de 3,9 milímetros a 5,4 milímetros. Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como cultivar rotíferos para uso em um sistema de policultura desenvolvido para atender às demandas nutricionais do peixe-zebra que se alimenta primeiro.