Protocolo para o Desenvolvimento de um Modelo de Osteotomia do Fêmur em Ratos Albinos Wistar

Este modelo de osteotomia do fêmur pode ajudar os pesquisadores a estudar o processo de cicatrização de fraturas e avaliar como uma droga pode influenciar a cicatrização de fraturas. É um modelo de roedores simples e fácil de seguir que pode ajudar os pesquisadores a identificar se uma droga tem propriedades curativas dos ossos e entender seu mecanismo de ação. Embora se concentre principalmente na observação e análise da cicatrização de fraturas, também pode fornecer insights sobre a patogênese da doença.

Este método pode orientar futuras pesquisas sobre a cura óssea na saúde e na doença. Pode ser usado para avaliar o efeito de potenciais drogas osteoanabolizantes. Induzir uma linha de fratura adequada e fixação de fratura com um fio K é um desafio.

Algumas sessões de prática devem ajudar. A simplicidade e a reprodutibilidade deste método são evidentes em sua demonstração visual Pawan Pagaku, um residente júnior do meu laboratório, ajudará a demonstrar o procedimento. Para começar, coloque o bloco de cera contendo cera até uma profundidade de 2,5 centímetros na mesa de operação e cubra-o com cortinas estéreis.

Depois de fazer uma incisão vertical de um centímetro na pele no lado lateral da coxa direita, exponha o músculo vasto lateral separando a fáscia profunda usando uma tesoura Metzenbaum. Divida o vasto lateral de acordo com as fibras musculares até que a diáfise do fêmur seja atingida. Em seguida, use o elevador periosteal para liberar o osso dos músculos ligados a ele.

Depois de injetar anestesia local dentro e ao redor do periósteo, crie um recuo no terço médio da diáfise do fêmur usando a lâmina cirúrgica número 15. Coloque um cinzel no recuo e bata suavemente no cinzel com um martelo para fraturar completamente o osso no terço médio do eixo. Fixe internamente a fratura usando um fio K estéril de um milímetro mantido com a ajuda de uma furadeira elétrica operada por bateria.

Passe o fio K para o canal medular do fragmento distal através do local da fratura. Em seguida, perfure o fio K através da extremidade distal do fêmur. Após a redução da fratura, avançar o fio K da extremidade distal para o canal do fragmento proximal até obter a compra na região trocantérica.

Corte a parte distal do fio K que se projeta através da pele usando um cortador de fio. Dobre a ponta do fio K a cerca de 90 graus usando um alicate e use uma atadura de gaze embebida em Betadine para o curativo do local do pino. O fio K atua como uma tala intramedular para manter a fratura em uma posição reduzida.

Aplique pressão sobre a área de sangramento usando gaze estéril ou pinça arterial para parar qualquer sangramento. Certifique-se de hemostasia completa antes de fechar a pele usando uma sutura de nylon 4-0. Limpe a ferida com Betadine e cubra-a com gaze estéril e fita adesiva de microporos.

Para cuidados pós-operatórios, devolva os ratos às suas gaiolas e continue a dar uma dieta semissintética padrão, bem como antibióticos e analgésicos por via intraperitoneal por cinco dias após o procedimento. Finalmente, avalie a cicatrização óssea por raio-X do local fraturado uma vez por semana. Raios-X do fêmur do rato com o fio K NC2 antes de induzir a fratura, e um dia após a cirurgia são mostrados aqui.

A cicatrização da fratura é monitorada radiologicamente por meio da realização de radiografias semanais sequenciais do local operado para avaliar a formação de calos. A fratura permanece reduzida e imobilizada com o fio K intramedular. Após o sacrifício em um momento pré-determinado, o fêmur foi cuidadosamente preservado em formol, seguido de descalcificação óssea.

O osso com calo foi obtido após a descalcificação ideal. O calo intacto e a seção sagital do calo são mostrados aqui. O calo é intermitentemente avaliado para garantir a descalcificação ideal antes de avaliá-lo usando outras técnicas.

Imagens de baixa ampliação e alta ampliação da seção corada com hematoxilina e eosina do local da fratura são mostradas aqui. As seções coradas do local da fratura mostram um calo duro com a formação de cartilagem e osso novo. A extremidade fraturada do osso e a segunda região cortical podem ser vistas aqui.

A parte do periósteo mais sensível à dor da ferida, e é essencial infiltrar-se no periósteo no local da fratura com um anestésico local antes da osteotomia. Pode ser seguida por análise imuno-histoquímica e radiológica da micro-TC calosa para histomorfometria quantitativa, analisando a resistência biomecânica da análise do calo do soro. Esta técnica é útil para determinar o potencial osteogênico, o mecanismo de ação e a análise comparativa de drogas osteoanabólicas promissoras.