Для начала, соберите выделенные вам тарелки с культурой, а затем снимите парапленку и крышку с одной из них.
Поместите непокрытую пластину под микроскоп, а затем наблюдайте за отдельными сообществами в каждом квадранте пластины.
Затем повторите наблюдения для каждого из двух других видов бактерий.
Чтобы выполнить окрашивание по Граму трех видов бактерий, сначала пометьте концы трех видов микроскопа инициалами каждого вида бактерий, вашими инициалами и датой. ГИПОТЕЗЫ: В этом эксперименте экспериментальная гипотеза может заключаться в том, что можно выяснить различные виды и формы бактерий с помощью окрашивания по Граму, и что грамположительные бактерии будут окрашивать в фиолетовый цвет с кристаллическим фиолетовым цветом, в то время как грамотрицательные бактерии будут казаться розовыми из-за противостойного пятна сафраина. Нулевая гипотеза может заключаться в том, что все типы бактерий сохранят оба пятна в равной степени, и окрашивание не поможет выяснить их вид или форму.
Чтобы начать окрашивание первого пятна, прикрепите зажим к предметному стеклу для удобства использования. Для каждого бактериального мазка не забудьте использовать очищенную и стерилизованную пламенем инокуляционную петлю.
Поместите две полные петли стерильной дистиллированной воды в центр предметного стекла.
После повторной стерилизации петли охладите петлю, несколько раз коснувшись неинокулированной части агара.
Затем удалите небольшое количество культуры из изолированной колонии и смешайте ее с водой на слайде.
Дайте предметному стеклу высохнуть при комнатной температуре и нагрейте мазок, быстро пропустив его через пламя.
После высыхания нанесите пипеткой несколько капель кристаллической фиалки на предметное стекло и оставьте на две-три минуты.
Осторожно промойте предметное стекло дистиллированной водой, направив прямой поток к верхней части предметного стекла, позволяя воде мягко стекать вниз. Не направляйте поток воды прямо на мазок.
Затем накройте предметное стекло йодом Грама, оставьте его снова на две минуты, а затем аккуратно промойте дистиллированной водой.
Обесцвечивайте предметное стекло 95% этанолом, пока пятно не перестанет смываться.
Немедленно промойте предметное стекло дистиллированной водой. Это ограничит чрезмерное обесцвечивание.
Затем добавьте несколько капель противокрасителя сафранина и оставьте на 30 секунд. Это приведет к окрашиванию любых присутствующих грамотрицательных клеток.
Аккуратно промойте предметное стекло дистиллированной водой и промокните насухо впитывающей бумагой.
После окрашивания двух других слайдов таким же образом (шаги 6 – 17) рассмотрите каждый с помощью микроскопа.
Сначала используйте объектив с низким энергопотреблением, чтобы выполнить грубые настройки. Когда вы найдете идеальный участок, переходите к более высоким увеличениям.
После дальнейшей визуализации и корректировки мазка с помощью объектива средней мощности, добавьте иммерсионное масло прямо в мазок. ПРИМЕЧАНИЕ: Масло необходимо для объективов высокой мощности, которые обеспечат наилучшие микрофотографии.
Теперь используйте цветные карандаши, чтобы нарисовать наблюдаемые бактерии в соответствующих кругах увеличения и заполнить наблюдаемые характеристики в соответствующей колонке, отмечая форму бактерий и то, являются ли они грамположительными, идентифицированными по более темному фиолетовому окрашиванию, или грамотрицательными, идентифицированными розовым окрашиванием.
Нажмите здесь, чтобы скачать таблицу 2
Наконец, повторите наблюдение, рисунок и характеристику для двух других окрашенных бактериальных стекол.
