Микробное и грибковое разнообразие

Для начала, соберите выделенные вам тарелки с культурой, а затем снимите парапленку и крышку с одной из них.

Поместите непокрытую пластину под микроскоп, а затем наблюдайте за отдельными сообществами в каждом квадранте пластины.

Когда колонии будут идентифицированы, заполните наблюдаемые свойства колонии в соответствующей колонке таблицы. Нажмите здесь, чтобы скачать таблицу 1

Затем повторите наблюдения для каждого из двух других видов бактерий.

Чтобы выполнить окрашивание по Граму трех видов бактерий, сначала пометьте концы трех видов микроскопа инициалами каждого вида бактерий, вашими инициалами и датой. ГИПОТЕЗЫ: В этом эксперименте экспериментальная гипотеза может заключаться в том, что можно выяснить различные виды и формы бактерий с помощью окрашивания по Граму, и что грамположительные бактерии будут окрашивать в фиолетовый цвет с кристаллическим фиолетовым цветом, в то время как грамотрицательные бактерии будут казаться розовыми из-за противостойного пятна сафраина. Нулевая гипотеза может заключаться в том, что все типы бактерий сохранят оба пятна в равной степени, и окрашивание не поможет выяснить их вид или форму.

Чтобы начать окрашивание первого пятна, прикрепите зажим к предметному стеклу для удобства использования. Для каждого бактериального мазка не забудьте использовать очищенную и стерилизованную пламенем инокуляционную петлю.

Поместите две полные петли стерильной дистиллированной воды в центр предметного стекла.

После повторной стерилизации петли охладите петлю, несколько раз коснувшись неинокулированной части агара.

Затем удалите небольшое количество культуры из изолированной колонии и смешайте ее с водой на слайде.

Дайте предметному стеклу высохнуть при комнатной температуре и нагрейте мазок, быстро пропустив его через пламя.

После высыхания нанесите пипеткой несколько капель кристаллической фиалки на предметное стекло и оставьте на две-три минуты.

Осторожно промойте предметное стекло дистиллированной водой, направив прямой поток к верхней части предметного стекла, позволяя воде мягко стекать вниз. Не направляйте поток воды прямо на мазок.

Затем накройте предметное стекло йодом Грама, оставьте его снова на две минуты, а затем аккуратно промойте дистиллированной водой.

Обесцвечивайте предметное стекло 95% этанолом, пока пятно не перестанет смываться.

Немедленно промойте предметное стекло дистиллированной водой. Это ограничит чрезмерное обесцвечивание.

Затем добавьте несколько капель противокрасителя сафранина и оставьте на 30 секунд. Это приведет к окрашиванию любых присутствующих грамотрицательных клеток.

Аккуратно промойте предметное стекло дистиллированной водой и промокните насухо впитывающей бумагой.

После окрашивания двух других слайдов таким же образом (шаги 6 – 17) рассмотрите каждый с помощью микроскопа.

Сначала используйте объектив с низким энергопотреблением, чтобы выполнить грубые настройки. Когда вы найдете идеальный участок, переходите к более высоким увеличениям.

После дальнейшей визуализации и корректировки мазка с помощью объектива средней мощности, добавьте иммерсионное масло прямо в мазок. ПРИМЕЧАНИЕ: Масло необходимо для объективов высокой мощности, которые обеспечат наилучшие микрофотографии.

Теперь используйте цветные карандаши, чтобы нарисовать наблюдаемые бактерии в соответствующих кругах увеличения и заполнить наблюдаемые характеристики в соответствующей колонке, отмечая форму бактерий и то, являются ли они грамположительными, идентифицированными по более темному фиолетовому окрашиванию, или грамотрицательными, идентифицированными розовым окрашиванием. Нажмите здесь, чтобы скачать таблицу 2

Наконец, повторите наблюдение, рисунок и характеристику для двух других окрашенных бактериальных стекол.

Извлеките планшет S. cerevisiae из инкубатора и капните каплю воды на предметное стекло микроскопа.

Используя стерилизованную петлю для инокуляции, намажьте пленку дрожжей в каплю воды и накройте предметное стекло крышкой.

Поместите предметное стекло под микроскоп с минимальным увеличением, увеличивая увеличение до настройки погружения в масло, чтобы увидеть отдельные дрожжевые клетки.

Наблюдайте за общей формой и структурой дрожжей и определяйте любые клетки, которые подвергаются бесполому размножению путем почкования.

Теперь нарисуйте ячейки в соответствующих кругах увеличения.

Когда вы закончите наблюдение за дрожжами, замените предметное стекло S. cerevisiae на подготовленное предметное стекло Ascomycetes apothecium и установите микроскоп на наименьшее увеличение.

Используя цветные карандаши, нарисуйте структуры с низким и большим увеличением, включая asci и аскоспоры.

Наконец, поместите пуговичный гриб, Agaricus bisporus, под препарирующий микроскоп и нарисуйте его особенности, включая пилеус, или шляпку, жабры и ножку, или стебель.

Используя окраску бактерий, записанных в таблице, определите, какие виды являются грамположительными, а какие - грамотрицательными.

Затем посмотрите на формы, записанные в таблице, чтобы определить, какие виды бактерий являются бациллами, кокками или спириллами.

Далее сравните свои иллюстрации дрожжевых клеток с вашими иллюстрациями бактериальных клеток. Примечание: Дрожжи из типа Ascomycetes, такие как S. cerevisiae, могут размножаться бесполым путем, что можно наблюдать через почкование клеток под микроскопом.

Записывайте любые наблюдения за почкованием дрожжевых клеток. Примечание: Аскомицеты также могут размножаться половым путем посредством митоза и образования гаплоидных спор.

Запишите все наблюдения за образованием спор или asci, которые вы наблюдали, в таблице.

ПРИМЕЧАНИЕ: Грибы из типа Basidiomycota демонстрируют ясно заметные жабры под пилеусом.

Запишите все виды грибов, у которых были жабры под pileus.