Хирургические процедуры на поставку эмбриональных стволовых клеток эндотелиальных клеток ишемического задних конечностей свидетельствует, с неинвазивным путем отслеживания биолюминесценции изображений.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Эмбриональных стволовых клеток-производных эндотелиальных клеток для лечения ишемии задней конечности
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Заболевания периферических артерий (PAD) обусловлено сужением периферических артерий, которые снабжают кислородом кровь и питательные вещества для ног и ступней, Эта патология вызывает симптомы, такие как перемежающаяся хромота (боль при ходьбе), болезненные язвы ишемический, или даже опасным для конечностей гангрены. Считается, что эндотелий сосудов, монослой эндотелиальных клеток, которые инвестирует просвета поверхность всех кровеносных и лимфатических сосудов, играет доминирующую роль в сосудистой гомеостаза и сосудистой регенерации. В результате, на основе стволовых клеток регенерации эндотелия может быть перспективным для лечения PAD.
В этом видео, мы демонстрируем трансплантации эмбриональных стволовых клеток (ЭСК)-производные эндотелиальных клеток для лечения одностороннего hindimb ишемии как модель PAD, а затем неинвазивного отслеживания клеточных самонаведения и выживание биолюминесценции изображений. Конкретные материалы и процедуры для доставки клеток и изображения будут описаны. Этот протокол следует за другой публикации в описании индукции задних конечностей ишемии Niiyama и др. 1.
Протокол
1. Дифференциация мышиных ЭСК в клетки эндотелия
- Протокол для дифференциации стволовых клеток в клетки эндотелия описана в другом месте и не является предметом этого протокола 2,3. Короче говоря, ячейки могут дифференцироваться, и клетки, которые являются положительными для эндотелиальных маркеров, таких как CD31 или эндотелия сосудов кадгерина (VE-кадгерина) затем очищают флуоресценции активирован сортировки клеток (FACS).
2. Строительство Дважды Гена Reporter Fusion и лентивирусов трансдукция
- Биолюминесценция может быть использована для отслеживания клетки, которые были изменены, чтобы выразить реп....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
ЭСК являются перспективным источником ячейки для лечения ишемии тканей из-за своей пластичности дифференциации и их способность вызывать ячейки линий включающий все три зародышевых листков, в том числе эндотелиальных клеток. Чтобы преодолеть этические проблемы, связанные с стволовых клеток, индуцированных плюрипотентных стволовых клеток (iPSCs), может быть альтернативным плюрипотентных стволовых клеток, источником, который преодолевает этические проблемы. Помимо ЭСК, взрослые стволовые клетки, такие как эндотелиальные клетки-предшественники.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Благодарности
Авторы выражают благодарность Андреа Акстелл, Сатоши Ито, доктор медицинских наук, Джефф Velotta, доктор медицинских наук, Грант Хойт, Роберт С. Роббинс, доктор медицинских наук, Цзинь Юй, доктор медицинских наук, Тим Дойл, кандидат наук, и Стэнфордского небольшое ядро изображениями животных для оказания технической помощи. Авторы также выражают благодарность А. М. Бикфорд, Inc для поддержки ветеринарное оборудование. Это исследование было поддержано исследовательских грантов от Национального института здоровья (R01 HL-75774, R01 CA098303, R21 HL085743, 1K12 HL087746), Табак Калифорнии соответствующей программы исследований Заболевание Калифорнийского университета (15IT-0257 и 1514RT-0....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии | |
|---|---|---|---|---|
| Хирургические инструменты | Инструмент | Fine Science Tools | ||
| Игла шприца | Инструмент | BD Biosciences | Рекомендуется использовать инсулиновый шприц 28G | |
| Фосфатно-солевой буферный раствор (PBS) | Реагент | Invitrogen | ||
| D-люциферин | Реагент | Biosynth International, Inc | Заранее приготовьте D-люциферин в виде фильтрованных стоковых растворов с концентрацией 15 mg/mL в PBS | |
| Система биолюминесцентной визуализации IVIS 200 и программное обеспечение для сбора данных | Оборудование |  Xenogen Corporation |
Ссылки
- Niiyama, H., Huang, N. F., Rollins, M., Cooke, J. P. Murine model of hindlimb ischemia. JoVE. , (2008).
- Levenberg, S., Golub, J. S., Amit, M., Itsakovitz-Eldor, J., Langer, R. Endothelial cells derived from human embryonic stem cells. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99, 4391-4396 (2002).
- Yamashita,....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
