Этот протокол описывает, как создавать электроды углеродного волокна. Электроды в дальнейшем использоваться для обнаружения катехоламинов освобождение от пузырьков с углекислым amperometry волокна.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Изготовление Амперометрический Электроды
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Электроды из углеродного волокна имеют решающее значение для выявления выпуска катехоламинов из везикул в одиночных камерах для amperometry измерений. Здесь мы описываем методы, необходимые для создания низкий уровень шума (<0,5 мкА) электроды. Методы были изменены из опубликованных описаний предыдущими исследователями (1,2). Электроды изготавливаются путем подготовки углеродных волокон и резьбы по отдельности в каждом капилляре с помощью вакуума с фильтром для аспирации волокна. Далее, капиллярная трубка с волокна, запряженных электрода съемник, создавая две половины, каждая из которых тонкой заостренной верхушкой. Электроды, смоченным в горячей, жидкой эпоксидной смешивается с отвердителем для создания стеклотекстолита печатью. Наконец, электроды помещаются в печь, чтобы вылечить эпоксидной смолы. Тщательная обработка электродов имеет решающее значение для обеспечения того, чтобы они сделаны последовательно и без повреждений. Этот протокол показывает, как изготовить и сократить амперометрического электроды для записи от отдельных клеток.
Протокол
Часть 1: Подготовка Carbon Fiber
- Вырезать пучка углеродных волокон (мы используем 7 мкм в диаметре) в длину, которая составляет ~ 1,25 х длина капиллярной пипетки.
- Удалить размеров путем кипячения ~ 100 мл ацетона в контейнер и добавление волокна к горячему, кипящего ацетона в течение 30 минут или дольше.
- Удалить волокон из теплого ацетона, и трансфер в стакан с чистой 50-100 мл свежего ацетона.
- Сухие волокна путем размещения расслоение на открытом 150 мм блюдо Петри и airdry ночь.
Часть 2: Огонь-полировка стеклянные капилляры
- Пожар-польский каждого капилляра (мы используем микро-г....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Этот протокол описывает, как создавать и сократить амперометрического электродов. Во время амперометрического записей, электрод из углеродного волокна помещают на поверхность секреторных клеток. Exocytotic активность наблюдается как амперометрического шипы, который показывает текущее электрохимической вызванных переносом электронов после окисления катехоламинов. С практикой решений и резки амперометрического электроды, уровень шума может быть значительно улучшилась за многие из имеющихся в продаже электродов.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Благодарности
Мы благодарим д-р Аарон П. Фокс в Чикагском университете, в лаборатории которого этот протокол был первоначально разработан, и Уильям Роден (Saint Louis University) для дальнейшего развития протокола.
Мы благодарим Фонд Уайтхолл и Национальный научный фонд для поддержки.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии | |
|---|---|---|---|---|
| Отвердитель эпоксидной смолы, чешуйки 1,3-фенилендиамина | Реагент | Sigma-Aldrich | P23954-100G04 716AJ | Аликоты хранить в эксикаторе, избегать воздействия света. |
| Углеродные волокна | Материал | Goodfellow | C005725 | |
| Капиллярные трубки для микрогематокрита | Материал | Fisher Scientific | NC9836768 | |
| Эпоксидная смола | Реагент | Miller-Stephenson | Epon Resin 828 | |
| Диссекционный микроскоп | Прибор | |||
| Пульлер для электродов | Прибор | Narishige International | PP-830 | 1-е вытягивание = 24.8 degrees C; 2-е вытягивание = 62.7 degrees C |
| Печь | Прибор | установить на 100 degrees F. | ||
| Плитка нагревательная | Прибор | установить на 55 degrees C |
Ссылки
- Mundorf, M. L., Wightman, R. M. Amperometry and cyclic voltammetry with carbon fiber microelectrodes at single cells. Curr Protocols in Neurosci. 6 (14), 1-6 (2002).
- Machado, D. J., Montesinos, M. S., Borges, R. Good practices in single-cell amperometry. Metho....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
Теги
