Прижизненные photoswitching и отслеживание Dendra2 меченных клеток опухоли молочной через окно изображений является техника, которая позволяет нам образ метастатическое поведение опухолевых клеток в выбранных микросреды опухоли на шкале времени суток.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Dendra2 Photoswitching через окно молочной изображений
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
В последнее десятилетие, прижизненной микроскопии опухолей молочной железы у мышей и крыс в одноклеточных разрешение
Протокол
1. Поколение флуоресцентных опухолей использованием инъекции опухолевых клеток в молочной жировой ткани:
- Рост клеточной линии выражения Dendra2 белка (как цитоплазматические маркера) до 40 - 80% слияния.
- Промыть блюда по крайней мере 3 раза PBS без Са 2 + или Mg 2 +.
- Добавьте 3 мл трипсина на 10 см блюдо и инкубировать при 37 ° С, пока большая часть клетки отделяются, а затем ударил блюдо от плоской поверхности, чтобы поколебать его.
- Тщательно промойте все клетки от блюдо, и использовать скребок (резиновые полицейский) для сбора матрицы, а также. Добавить 5 мл PBS. Возьмите аликвоту рассчитывать во время ....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Благодарности
Эта работа была поддержана Министерством обороны США (BC075554 к BG и DK BC061403 к), американского Национального института здоровья (U54GM064346 к JVR; CA100324 по х, JES и JW; CA77522 на JES, U54CA126511 по х и BG). Мы благодарим Д. Entenberg за помощью микроскопии, М. Rottenkolber за помощь в изготовлении окна с изображениями и Дж. Поллард (Альберт Эйнштейн медицинский колледж) для F4/80 антител.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| PBS без Ca, Mg | GIBCO, by Life Technologies | 14190-144 | |
| Трипсин | GIBCO, by Life Technologies | 25300 | |
| HBSS | GIBCO, by Life Technologies | 14025 | |
| Среда DMEM (клетки MDA-MB-231) | GIBCO, by Life Technologies | 11965 | |
| Изофлуран (Aerrane) | Baxter Internationl Inc. | # NDC 10019-773-40 | |
| Мыши SCID | National Cancer Institute | N/A | |
| Чашки для культивирования | BD Biosciences | 353003 | Специальный заказ |
| Круглые покровные стекла 8 mm | Scientific, Inc. | 8CIR-1-FIS |
Ссылки
- Farina, K. L., Wyckoff, J. B., Rivera, J., Lee, H., Segall, J. E., Condeelis, J. S., Jones, J. G. Cell motility of tumor cells visualized in living intact primary tumors using green fluorescent protein. Cancer Res. 58, 2528-2532 (1998).
- Naumov, G. N., Wilson, S. M., MacDonald, I., Schmidt, E. E., Morris, V. L., Groom, A. C., Hoffman, R. M., Chambers, A. F.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
Теги
