Method Article

Изоляция стволовых клеток из мягких тканей опорно-двигательного

DOI:

10.3791/2011

⸱

July 5th, 2010

 ,  , 
1Stem Cell Research Center, Childrens Hospital of Pittsburgh of UPMC, 2Department of Bioengineering, University of Pittsburgh, 3Department of Orthopedic Surgery, University of Pittsburgh, 4Department of Pathology, University of Pittsburgh, 5Department of Molecular Genetics & Biochemistry, University of Pittsburgh

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Изоляция взрослых стволовых клеток из мягких тканей опорно-двигательного аппарата на основе соблюдения скорости клеток к колбе.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Взрослые стволовые клетки уже давно обсуждается в отношении их применения в регенеративной медицине. Взрослые стволовые клетки породили много шуму для лечения раненых и больных тканей в связи с их впечатляющими возможностями для прохождения нескольких линии дифференциации клеток и их самообновление способности. Самое главное, эти качества сделали их выгодно для использования в аутологичной трансплантации клеток терапии. Текущего протокола представит читателям изменение preplate техники, где мягких тканей опорно-двигательного аппарата, например, сухожилия и мышцы, являются: 1

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

В общем, полное изменение preplate процедура требует 1-2 дней подготовки, 1 неделя выполнения технических процедур, 2-3 дней клеточной идентификации с иммуноцитохимия, и дополнительные 2-3 недели стволовых расширения популяции клеток. Оборудования, необходимого для стволовых клеточных культур аналогичны других систем культуры клеток, который включает настольные центрифуги, СО 2 инкубатора, ламинарный поток тканевой культуры капот и инвертированный микроскоп оснащен флуоресценции и цифровой камеры. Изолированных стволовых клеток также может быть клонирован и может храниться долгосрочный в жидком азоте в течение текущих или будущих 1,2 исследовани....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Было признано, что некоторые взрослые ткани содержат множество стволовых клеток. За последние несколько лет обучения, стволовые клетки были обнаружены в мягких тканях опорно-двигательного аппарата, в том числе скелетные мышцы и сухожилия. Этот ток детали протокола процедура, известная как изменение preplate технику, которая была успешно использована в нашей лаборатории, чтобы изолировать взрослых стволовых клеток из сухожилий и скелетных мышцах. Использование измененных preplate методике, описанной выше клетки могут быт.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Нет конфликта интересов объявлены.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы очень благодарен г-жи Хайин Пан и г-н Ян Bellayr за техническую помощь в изолятор для текущего фильма и г-н Кайл Холден и г-н Джонатан Лукас за их помощь на слайде редактирования. Большое спасибо следующий перечень лиц, которые были связаны с развитием методов preplate изменение за последние годы: Др. Бурхан Гарайбу, Baohong Цао, Дизи Бриджит, Томас Р. Пэйн, Aiping Лу, Хайжун Пэн, Хидеки Осима, Бо Цзэн, Xiaodong Му, Kimimasa Tobita, Рон Янковский, Макато Ikezawa. Мы благодарны за техническую помощь от Джеймс Х. Cummins, Райан Pruchnic, Джозеф Feduska, Ребекка С. Schugar, Хайин Пан и Джессика Tebbets. Автор также хотел бы отметить финансовую поддержку этой рабо....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
DMEMInvitrogen#11995-073
FBSInvitrogen#10437-028
Термоинактивированная сыворотка лошадиInvitrogen#26050-088
Экстракт куриного эмбрионаAccurate Chemical#CE650T-10
100U мл пенициллина/стрептомицинаInvitrogen#15140-122
Dulbecco's PBSInvitrogen#14190-250
Hank's Buffered Salt SolutionInvitrogen#24020-117
Коллагеназа типа XI 0,2% (масс./об.)Sigma-Aldrich#C7657
Dispase2.4U млInvitrogen#17105-041
Трипсин-ЭДТА0.5% (масс./об.) (10x; 5 г литров трипсина (1:250)Invitrogen#15400-054
Коллаген для покрытия колбы: Коллаген I типа, полученный из телячьей кожи 0,1 гSigma-Aldrich#C-9791
DMSOSigma#D-2650

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Gharaibeh, B. Isolation of a slowly adhering cell fraction containing stem cells from murine skeletal muscle by the preplate technique. Nat Protoc. 3, 1501-1509 (2008).
  2. Qu-Petersen, Z. Identificatio....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Stem Cell IsolationMusculoskeletal TissueEnzymatic DigestionPreplate TechniqueCollagen Coated FlaskCell DissociationFlow CytometryImmunofluorescenceMicroscopyProliferation Medium

Related Articles