Методическая статья
Мы разработали бесклеточной связывание с рецепторами анализа для оценки связывания гранулоцитов и макрофагов колониестимулирующий фактор (GM-CSF) с рецепторами. Это позволяет нам оценить конкурентного ингибирования биотинилированного GM-CSF связывания с растворимыми GM-CSF рецепторов альфа-ГМ-КСФ аутоантител с отличной воспроизводимости.
ФОН: Ранее мы показали, что нейтрализующей способности, но не концентрации ГМ-КСФ аутоантител коррелирует с тяжестью заболевания у пациентов с аутоиммунными легочного альвеолярного протеиноз (PAP) 1-3. Как отмена GM-CSF биологическую активность в легких является вероятной причиной аутоиммунных PAP 4,5, это перспективное для измерения нейтрализующей способности ГМ-КСФ аутоантител для оценки тяжести заболевания у каждого пациента с PAP.
До сих пор, нейтрализующей способности ГМ-КСФ аутоантител была оценена путем вычисления замедление роста у человека клеток костного мозга или TF-1 клетки стимулировали ГМ-КСФ 6-8. В биопроб система, однако, часто бывает проблематично получить достоверные данные, а также сравнивать данные из различных лабораторий, в связи с техническими трудностями в поддержании клеток в постоянном состоянии.
ЦЕЛЬ: имитировать GM-CSF привязки к GM-CSF рецепторов на поверхности клетки использованием бесклеточных рецептор-связывающий-анализа.
Методы: Трансгенные шелкопряда технология применяется для получения большого количества рекомбинантных растворимых GM-CSF рецепторов альфа (sGMRα) с высокой чистоты 9-13. Рекомбинантный sGMRα содержится в гидрофильные слои серицина шелковых нитей, не будучи слит с протеинами шелка, и, таким образом, мы можем легко извлечь из коконов в хорошей чистоты с нейтральным водных растворах 14,15. К счастью, олигосахарид структур, которые имеют решающее значение для связывания с GM-CSF, больше похожи на структуры человеческого sGMRα, чем те, производимых другими насекомыми или дрожжей.
РЕЗУЛЬТАТЫ: бесклеточной анализа системы с помощью sGMRα дали данные с высокой пластичностью и надежности. GM-CSF привязки к sGMRα была дозозависимой ингибируется поликлональных GM-CSF аутоантител в подобной манере к биопроб использованием ТФ-1 клетках, что свидетельствует о нашей новой бесклеточной анализа системы с помощью sGMRα более полезно для измерения нейтрализующей активностью ГМ-КСФ аутоантител, чем системы с помощью биопроб TF-1 ячейки или человеческих клеток костного мозга.
Заключение: Мы созданы бесклеточной анализа количественного нейтрализующей способности ГМ-КСФ аутоантител.
1. Производство и очистка sGMRα
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Бесклеточной анализа оценкам нейтрализующей способности ГМ-КСФ аутоантител с отличной воспроизводимостью и быстротой. Обязательные ингибирования GM-CSF аутоантитела IgG или сыворотке пациента фракций оценивали результаты анализа. Данные показали корреляцию между обязательными торможение бесклеточной анализа и замедление роста у биопроб использованием ТФ-1 клеток, соответственно. Биопроб широко используются, но таила трудности при сравнении данных между различными объектов и различные моменты времени, которое мы можем из.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Мы очень благодарны К. Nakagaki, д-р Х. Ишии, д-р К. Судзуки, А. Ямагата, К. Oofusa за их ценный вклад.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE
Запросить разрешение