Изображений нейронов Ответы на фрагмент Препараты вомероназального орган выражения генетически закодированные Кальций датчика

Краткое содержание

Вомероназального орган (ВНО) обнаруживает внутривидовой химические сигналы, которые передают социального и репродуктивного информации. Мы провели Ca2 + изображений экспериментов с использованием трансгенных мышей, экспрессирующих G-CaMP2 в ткани ВНО. Такой подход позволяет нам анализировать сложные узоры реакция вомероназального нейроны большим количеством феромона раздражители.

Аннотация

Орган вомероназального (ВНО) обнаруживает хемосенсорных сигналы, которые несут информацию о социальной, сексуальной и репродуктивного статуса лиц в пределах одного вида ^1,2. Эти внутривидовых сигналов, феромоны, а также сигналы от некоторых хищников ^3, активировать вомероназального сенсорных нейронов (VSNs) с высоким уровнем специфичности и чувствительности ^4. По меньшей мере три различных семейства G-белком рецепторы, V1R, V2R и FPR ^5-14, выражаются в нейронах ВНО посредничать обнаружения хемосенсорных сигналы. Чтобы понять, как феромон информация кодируется ВНО, очень важно проанализировать ответ профилей отдельных VSNs на различные раздражители и идентифицировать специфические рецепторы, которые опосредуют эти ответы.

Neuroepithelia о ВНО в нем заключаются в пару костей уотег. Полу-слепой трубчатые структуры ВНО имеет один открытый конец (вомероназального протока) подключение кполости носа. VSNs расширить свои дендриты в просвете части ВНО, где феромона сигналы находятся в контакте с рецепторами, высказанные на дендритных ручки. Клеточных тел VSNs форме псевдо-стратифицированных слоев с V1R и V2R выражается в апикальных и базальных слоев соответственно ^6-8. Несколько методов были использованы для контроля ответов VSNs на сенсорные стимулы ^4,12,15-19. Среди этих методов, острый срез подготовка имеет ряд преимуществ. Во-первых, по сравнению с диссоциированных VSNs ^3,17, ломтик подготовку поддерживать нейроны в их родном морфологии и дендриты клетки остаются относительно нетронутыми. Во-вторых, клеточных тел VSNs были легко доступны в корональной кусочек ВНО, чтобы электрофизиологии исследований и экспериментов изображения по сравнению с целого эпителия и весь монтаж подготовки ^12,20. В-третьих, этот метод может быть объединена с молекулярных методов клонирования, чтобы рецептор идентификации.

Сенсорная стимуляция вызывает сильную Са ^{2 +} приток в VSNs, что свидетельствует об активации рецептора ^4,21. Таким образом, разработка трансгенных мышей, которые выражают G-CaMP2 в обонятельной сенсорных нейронов, в том числе VSNs ^15,22. Чувствительность и генетической природы зонда значительно облегчит Са ^{2 +} изображений экспериментов. Этот метод устранил красителя процесса загрузки, используемых в предыдущих исследованиях ^4,21. Мы также используют системы лиганд доставки, которая дает возможность применения различных стимулов к ВНО ломтиками. Сочетание двух методов позволяет следить за несколькими одновременно нейронов в ответ на большое количество раздражителей. Наконец, мы установили полуавтоматические анализа трубопровода, чтобы помочь обработки изображений.

Протокол

1. Решение подготовки

1. Подготовка 10X R1, R2 и 10X 10X R3 решения в соответствии с таблицей.
   R1
   

   Химические вещества	МВт (г / моль)	мМ (1X)	10X акций (г / л)
   NaCl	58,44	125	73,05
   KCl	74,55	2,5	1,86
   MgCl 2	1 М акции	1	10 мл
   CaCl 2 · 2H 2 O	147,02	2	2,94
   NaH 2 PO 4 · H 2 O	137,99	1,25

Обсуждение

Большинство вомероназального рецепторов (VRS) остаются сиротами рецепторов с момента их открытия Дюлаком и Аксель ^5. Феромона лигандами для этих хемосенсорных рецепторы и их роль в посредничестве животного поведения, не до конца понятны. До сих пор только одна пара лиганд / рецептор, ESP1 пептида и его родственные рецепторы, Vmn2r116 (V2Rp5), был определен и показан для передачи специфических социальных информацию ^19,23. Другой рецептор, V1rb2, как было показано в ответ на 2-heptanone, которые, пре.......