В этой статье описывается порядок синтеза гидрофобно модифицированные мембраны Nafion иммобилизации ферментов и как для иммобилизации белков и / или ферментов в мембране и проверить их конкретной деятельности.
Методическая статья
В этой статье описывается порядок синтеза гидрофобно модифицированные мембраны Nafion иммобилизации ферментов и как для иммобилизации белков и / или ферментов в мембране и проверить их конкретной деятельности.
За последние десять лет, произошло множество приложений для иммобилизации ферментов и стабилизировалась в том числе биокатализа, биосенсоров, и биотопливо клеток. 1-3 В большинстве биоэлектрохимические приложений, ферментов или органеллы иммобилизованных на поверхности электрода с использованием определенного типа полимерной матрицы. Этот полимер леса должны иметь стабильную и ферменты позволяют поверхностным диффузии молекул и ионов в и из матрицы. Большинство полимеров, используемых для данного типа иммобилизации на основе полиаминов или многоатомные спирты - полимеры, которые имитируют природную среду ферменты, которые они воплощают и стабилизации ферментов через водород или ионной. Другой метод для стабилизации ферментов связано с использованием мицелл, содержащих гидрофобные области, которые могут инкапсулировать и стабилизации ферментов. 4,5 В частности, группа Minteer разработала мицеллярных полимер на основе коммерчески доступных Nafion. 6,7 NafionСам мицеллярных полимера, что позволяет каналу помощью диффузии протонов и другие мелкие катионы, но мицеллы и каналов крайне малы и полимер является очень кислым из-за сульфокислоты боковых цепей, что неблагоприятно для иммобилизации ферментов. Однако, когда Nafion смешивается с более гидрофобные алкильные соли аммония, такие как тетрабутиламмония бромид (TBAB), четвертичного аммония катионов замене протонов и стать счетчик ионов сульфонатных групп на стороне полимерные цепи (рис. 1). Это приводит к большим мицелл и каналов в полимер, который позволяет для распространения больших подложках и ионов, которые необходимы для ферментативной функции, такие как никотинамидадениндинуклеотида (NAD). Это изменение Nafion полимера был использован для иммобилизации различных типов ферментов, а также митохондрий для использования в биосенсоров и биотопливных элементов. 8-12 Эта статья описывает новую процедуру принятия этого микрофонаellar полимер иммобилизации ферментов мембраны, которая может стабилизировать ферментов. Синтез мицеллярной мембранной иммобилизации фермента, процедура для иммобилизации ферментов в мембране, а анализы для изучения ферментативных удельной активности иммобилизованного фермента приведены ниже.
1. Модификация с Nafion соли четвертичного аммония
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
В описанной процедуре, тетра-алкил соли аммония используются для изменения коммерческой Nafion создать мицеллярных полимеров, которые могут быть использованы для иммобилизации и стабилизации ферментов. Анализы описанных в порядке, показывают, что полимер может быть использован для иммобилизации различных ферментов с высокой сохранение активности. Если фермент интерес имеет очень низкую активность или нечистым, более высокие концентрации могут потребоваться, и не должны влиять на процесс иммобилизации, если иммобилизации.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Нет конфликта интересов объявлены.
Авторы признают, Управление военно-морских исследований, Соединенные сои совета и Национального научного фонда для финансирования.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Название реагента | Компания | Номер в каталоге | |
| Nafion | Sigma-Aldrich | 70160 | |
| Tetra соли алкиламмония бромид | Sigma-Aldrich | н / д | |
| Алкогольдегидрогеназы | Sigma-Aldrich | A3263 | |
| Никотинамидадениндинуклеотида (NAD) | Simga-Aldrich | N7004 | |
| Натрий пирофосфат | Sigma-Aldrich | P8010 | |
| Феназинметасульфат (PMS) | Sigma-Aldrich | P9625 | |
| 2,6-Dichloroindophenol (DCIP) | Сигналма-Aldrich | D1878 | |
| Глюкозооксидаза | Sigma-Aldrich | G7141 | |
| 4-гидроксибензойной кислоты | Sigma-Aldrich | 240141 | |
| Азид натрия | Sigma-Aldrich | S8032 | |
| Пероксидаза | Sigma-Aldrich | P8375 | |
| 4-аминоантипирином | Sigma-Aldrich | 06800 | |
| UV / Vis Спектрофотометр | Thermo | Эволюция 260 Bio или Spectronic Genesys 20 | |
| Vortex Genie | |||
| Аналитические весы |
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE
Запросить разрешение