Методическая статья

Количественные оценки миграции клеток в Phagokinetic анализа подвижности трек

DOI:

10.3791/4165

⸱

4 декабря 2012 г.

 ,  ,  ,  , 
1Department of Microbiology and Immunology, Louisiana State University Health Sciences Center, 2Center for Molecular and Tumor Virology, Louisiana State University Health Sciences Center, 3Department of Microbiology and Immunology, SUNY Upstate Medical University, 4Feist-Weiller Cancer Center, Louisiana State University Health Sciences Center

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Phagokinetic анализа трек подвижности является метод, используемый для оценки движения клеток. В частности, анализ мер хемокинез (случайный подвижность клеток) с течением времени в количественном выражении. Анализ использует способность клеток для создания измеримых отслеживать их движение на коллоидное золото покрытием покровные.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Клеточная подвижность является важным биологическим процессом как для одноклеточных, так и для многоклеточных организмов. Он необходим для перемещения одноклеточных организмов к источнику питательных веществ или прочь от неподходящих условий, а также для развития тканей многоклеточных организмов, иммунного надзора и заживления ран, и это лишь некоторые из ролей1,2,3. Дерегуляция этого процесса может привести к серьезным неврологическим, сердечно-сосудистым и иммунологическим заболеваниям, а также к усугублению образования опухоли и распространению4,5. Было показано, что молекулярная полимеризация актина и рециркуляция рецепторов играют важную роль в создании клеточных расширений (ламеллиподий), которые стимулируют поступательное движение клетки6,7,8. Тем не менее, многие биологические вопросы о миграции клеток остаются без ответа.

Центральная роль клеточной подвижности в здоровье и болезнях человека подчеркивает важность понимания специфических механизмов, участвующих в этом процессе, и делает особенно важными точные методы оценки подвижности клеток. Микроскопы обычно используются для визуализации движения клеток. Тем не менее, клетки движутся довольно медленно, что делает количественное измерение миграции клеток ресурсоемким процессом, требующим дорогостоящих камер и программного обеспечения для создания количественных покадровых фильмов подвижных клеток. Таким образом, возможность выполнять количественное измерение миграции клеток, которое является экономически эффективным, нетрудоемким и использует обычное лабораторное оборудование, является большой потребностью для многих исследователей.

Анализ фагокинетической подвижности трека использует способность движущейся ячейки очищать свой путь от частиц золота для создания измеримого следа на коллоидном стеклянном покровном покрытии9,10. С помощью свободно доступного программного обеспечения можно оценить несколько треков для каждого лечения для выполнения статистических требований. Анализ может быть использован для оценки подвижности многих типов клеток, таких как раковые клетки11,12, фибробласты9, нейтрофилы13, клетки скелетных мышц14, кератиноциты15, трофобласты16, эндотелиальные клетки17 и моноциты10,18-22. Протокол включает в себя создание предметных стекол, покрытых наночастицами золота (Au°), которые образуются путем восстановления хлорауриновой кислоты (Au3+) цитратом натрия. Этот метод был разработан Туркевичем и др. в 1951 г.23, а затем усовершенствован в 1970-х гг. Френсом и др.24,25. В результате этой стадии химического восстановления частицы золота (диаметром 10-20 нм) выпадают в осадок из реакционной смеси и могут быть нанесены на стеклянные покровные стекла, которые затем готовы к использованию в анализе клеточной миграции9,26,27.

В общем, анализ фагокинетической подвижности трека является быстрым, количественным и простым измерением клеточной подвижности. Кроме того, он может быть использован в качестве простого высокопроизводительного анализа для использования с типами клеток, которые не поддаются покадровой визуализации, а также для других применений, зависящих от потребностей исследователя. В совокупности возможность количественного измерения клеточной подвижности нескольких типов клеток без необходимости использования дорогостоящих микроскопов и программного обеспечения, а также использование обычного лабораторного оборудования и химических веществ, делают анализ фагокинетической подвижности трека надежным выбором для ученых, заинтересованных в понимании клеточной подвижности.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Подготовка желатин покрытием Покровные

  1. Место кислотно-промытый покровные стекла (15 мм в диаметре) в стерильный пластиковый 100 мм блюдо (а). Поместите 8-9 покровных на блюдо и убедиться, что они не соприкасаются друг с другом или сторон блюдо ..

Примечание: Покровные стекла, иглы и пинцет должны быть стерильными, чтобы устранить возможные загрязнения микроорганизмами, а также эндотоксины, которые будут влиять клеточных функций, в том числе подвижности.

  1. Взвешивание порошка желатина и ресуспендируют порошка в деионизованной воды, чтобы сделать раствор желатина с конечной концентрации 0,5 г/300 мл. Затем раствор желатина должно быть в автоклаве.
  2. Пипетки 2-3 капли желатина (~ 100-150 мл) на каждую покровное.

Примечание: Будьте осторожны, чтобы не допустить желатин прикоснуться к блюду, или вы не сможете удалить покровные от тарелки.

  1. Выпекать желатин покрытием покровные в 100 мм блюдо в духовке при температуре 90 ° С в течение 10 мин.
  2. Удалите излишки желатина осторожным пипетированием.
  3. Сухие покровные в 100 мм блюдо в духовке при температуре 70 ° C в течение 45 мин.
  4. После высыхания, удалите покровные от 100 мм блюдо, используя стерильный, без эндотоксина иглы и пинцет (иглой, чтобы мягко подтолкнуть вверх покровное, чтобы сделать его доступным для пинцетом аккуратно удалить).
  5. Поместите отдельные желатин покрытием покровные на отдельные лунки 24-луночных блюдо.

2. Подготовка коллоидного золота покрытием Покровные

  1. Взвесьте необходимое количество chloroauric кислоты (tetrachloroauric тригидрат кислоты; HAuCl 4 · 3H 2 O), а затем ресуспендируют в стерильной деионизированной воды подготовить окончательный 14,5 мм раствор (токсичных). Подготовка 1,5 мл раствора на 8-9 покровные.

Внимание: Chloroauric кислота чохапку при проглатывании, вызывает сильные ожоги кожи и повреждения глаз и может вызвать аллергические реакции кожи. Токсичен при проглатывании.

  1. Взвесьте необходимое количество цитрата натрия (тринатрия дигидрофосфат 2-гидроксипропан-1 ,2,3-tricarboxylate; Na 3 C 6 H 5 O 7), а затем ресуспендируют порошка в деионизованной воды, чтобы сделать окончательные 0,5% раствора. Подготовить 1 мл раствора на 8-9 покровные.

Внимание: цитрат натрия может вызвать раздражение глаз и кожи. Это может также вызвать респираторные и желудочно-кишечного тракта раздражение.

  1. В стерильные, без эндотоксина стакан сочетать 1,5 мл стерильного 14,5 мм HAuCl 4 решения и 13,5 мл стерильной деионизированной воды; результат должны дать слабый раствор желтого цвета. Указанные объемы позволят за 8-9 коллоидного золота покровные быть сделано.
  2. В то время как непрерывно помешивая, нагрейте раствор на горячей плите, пока она не начнет бнефти.

Внимание: нагревание раствора должна быть выполнена в вытяжном шкафу, так как пары могут быть вредными / токсичными. Пары оказывают разрушительное воздействие на ткани слизистых оболочек и верхних дыхательных путей.

  1. Снимите стакан с горячей плите.
  2. При перемешивании добавляют 0,7 мл 0,5% раствора цитрата натрия. Указанные объемы позволят за 8-9 коллоидного золота покровные быть сделано.
  3. Продолжайте размешивать это универсальное решение для примерно 2 минуты (Примечание: цвет раствора будет постепенно меняться от бледно-желтого, очистить, до серого, до фиолетового, до темно-фиолетового, перед тем как достичь красного вина или, предпочтительно, ржавчины цвета) . Данный продукт является вашим коллоидный раствор золота.
  4. Охладить коллоидный раствор золота в 10 мл пипетки в течение 1-2 мин (для того, чтобы сохранить желатиновый слой на покровное от таяния, когда коллоидный раствор золота добавляется), а затем добавить 1.0-2.0 мл colloidaл раствора на золото каждый желатин покрытием покровное ранее размещенных в 24-а блюдо (а) (сумма коллоидный раствор золота, которое вы добавляете в желатин покрытием покровные зависит от того, насколько хорошо частицы золота осаждается в растворе - см. комментарии ниже).

Примечание: Потому что там могут быть изменения в эффективности осаждения частиц золота, рекомендуется сначала добавить 0,5-1 мл коллоидного раствора золота в желатин покрытием покровные, а затем поместить 24-а блюдо в инкубаторе в течение 0,5 ч . После этого инкубационного периода, покровные должны быть проверены под световым микроскопом для соответствующей плотности частиц золота на покровные. См. рисунок 1 для 20x микроскопа изображений примеров слишком низко и слишком высокой концентрации частиц золота. См. Рисунок 2 для 40x изображений микроскопии идеальной концентрацией частиц золота (по крайней мере для использования с моноциты). ОПТмальные плотность наночастиц золота на слайде должны быть определены экспериментально для каждого типа клеток используются, как характеристики различных клеток будет диктовать свои силы движения на покровные. Если концентрация частиц золота недостаточно, добавить дополнительные 0,5-1 мл коллоидного раствора золота в желатин покрытием покровные.

В зависимости от размера ячейки, соответствующей концентрации частиц золота может меняться и, таким образом, в конечном счете, зависят от размера ячейки исследуют на подвижность. Например, в человеческих моноцитов быть малогабаритных клеток (~ 10-20 мкм 28), более высокая концентрация частиц золота было необходимо в нашем анализе. Соответствующее распределение наночастиц золота предоставляет исследователю возможность легко и эффективно различать края сотовых треков. Концентрация частиц золота, которое является слишком высокой затрудняет способность клеток перемещаться и, следовательно, для точного измеренияих подвижности, в то время как концентрация частиц золота, которое является слишком низкие пределы способности человека определять точное трек подвижности.

Важное примечание: Если синтеза наночастиц золота является проблематичным, синтезированные наночастицы золота имеются в продаже в размерах от 5 нм до 400 нм. Кроме того, флуоресцентные микросферы были также использованы в исследованиях клеточной подвижности 29. Тем не менее, использование этих микросфер требует флуоресцентный микроскоп для анализа миграции клеток.

  1. Поместите 24-а блюдо с коллоидным золотом покрытые покровные в инкубаторе при температуре 37 ° C и инкубировать от 1 часа до ночи.
  2. После инкубации промыть / удаления несвязанного золота путем погружения покровные (3x) в стерильные фосфатным буферным раствором (PBS, рН 7,4).
  3. Поместите эти коллоидного золота покрытием покровные в чистую 12-а блюдо (ы), содержащий PBS.
  4. Храните эти покровные при 4 ° С до готовностииспользовать (парафильмом пластины перед размещением в холодильнике).

Важное замечание: Всегда держите коллоидного золота покрытием покровные в некоторый тип жидкости / средства массовой информации, как частицы золота могут отслаиваться от покровных если дают высохнуть. Коллоидного золота покровные должны быть использованы в течение 2-3 месяцев с даты, когда они были сделаны.

Контроль качества: в одном phagokinetic анализа подвижности трек, очень важно использовать покровные, которые характеризуются аналогичной концентрации частиц золота. Эта простая точка позволит количественные различия в клеточной подвижности между образцами, чтобы быть исключительно из-за характера лечения, а не физическими свойствами коллоидного золота покрытием покровные. Мы выступаем с использованием только покровные сделаны в то же время в отдельных экспериментах, хотя мы показали, что до тех пор, как плотность наночастиц золота равны, использование покровныхот различных препаратов является целесообразным.

3. Анализ сотового Подвижность

  1. Поместите коллоидного золота покрытием покровные в соответствующей сотовой СМИ для клеток интерес.
  2. Передача надлежащее лечение клеток на коллоидное золото покрытием покровные помещают в 24-луночный блюдо (а)

Примечание: количество клеток передается в одной скважины должна быть определена для каждого типа клеток изучены. В идеале, клетки должны быть равномерно распределены по коллоидного золота покрытием покровное, которые в свою очередь позволят статистический анализ только треки, созданные на одну ячейку. Если Клетки высевали при слишком высокой концентрации, она становится весьма вероятным, что перекрытие следов нескольких ячеек будет видно. Перекрытие треков не может быть точно количественно и, таким образом, они не могут быть приняты во внимание в окончательном анализе движения проверенных клеток. Перекрытие треков в результатеучастие несколько ячеек, как правило, легко заметить, как объединить или пересек треков (в области анализа), в которых два или более клеток можно наблюдать в той же непрерывной очищенной области.

  1. Инкубировать при 37 ° C / 5% CO 2 в течение 24 ч (или на любое удобное время, например, мы проанализировали моноцитов подвижность между 6 ч и 24 ч после лечения и эндотелиальных клеток в 12 часа после лечения). Оптимальный срок для определения и измерения сотовой подвижность будет варьироваться в зависимости от типа клеток изучены и, таким образом, должны быть определены экспериментально для каждого типа клеток (хорошей отправной точкой, однако, 6 - 12 ч после обработки).

Примечание: Если экспериментальные коллоидного золота покрытием покровные должны храниться и / или проанализированы на более позднее время, клеток и наночастиц золота должны быть закреплены на покровные. Для достижения этой фиксации шаг, следующий шаг 3.3, первой стирки тщательно покровные 2 раза 1xPBS (погружение покровные предпочтительнее, так как удаление наночастиц золота из покровных следует избегать), а затем использовать стандартный метод фиксации клеток, таких как инкубации при комнатной температуре 3% параформальдегидом. После 15-минутной инкубации, 3% параформальдегидом должны быть удалены и покровные тщательно промывают 3 раза 1x PBS. Фиксированные покровные можно хранить в холодильнике.

  1. С помощью светового микроскопа, захват изображения треки, созданные одной движущейся клетке (Примечание: увеличение используется для съемки сотовой треков, безусловно, варьироваться в зависимости от типа клеток под следствием). Примеры сотовой треки, созданные на неподвижных и подвижных клеток на коллоидное золото покрытием покровные показано на рисунке 2.

Примечание: наночастицы золота размером используемых в phagokinetic анализа подвижности трек был найден, чтобы быть полностью нетоксичны для клеток 30. В случае необходимости, Жизнеспособность рассматриваемой клетки могут быть оценены путем окрашивания трипановым синим или рассматриваются другие маркеры клеточной жизнеспособности. Можно было бы принять во внимание необходимость для фиксации, тип фиксации, и т.д., если этот шаг необходимо проделать.

  1. Использование свободно доступного программного обеспечения, таких как ImageJ программного обеспечения ( http://rsbweb.nih.gov/ij/ ) или NIH Image ( http://rsb.info.nih.gov/nih-image/ ), оба разработаны в Национальные Институты Здоровья, или ImageTool ( http://ddsdx.uthscsa.edu/dig/itdesc.html ), разработанная в университете штата Техас здоровья Научного центра в Сан-Антонио, средняя площадь (в условных единицах) коллоидного золота очищается 10-20 или более ячеек (по образцу) определяется для каждой экспериментальной группе из захваченных изображений. Статистика может быть выполнена на тОн собрал результаты. Например, результаты могут быть нанесены как среднее ± стандартная ошибка средствами (SEM) с т тесты Студенческая выполняется, а значение P <0,05 использоваться как мера статистической значимости между образцами. Рисунках 3 и 4 показаны шаги в Анализ области коллоидное золото очищается клетки.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Показанный пример фотографии, сделанные под световым микроскопом показывает трек область очищена одна ячейка (моноцитов из наших экспериментах показано на рисунке 2). Non-подвижных клеток создают характерный небольшие, овальной или круг формы участки вокруг себя указывает на низкий базальный уровень движения для этих стимулированных клеток (рис. 2А и 2В). В отличие от очень подвижных клеток [в нашей системе, цитомегаловируса человека (HCMV)-инфицированные клетки] характеризуется направл...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Phagokinetic анализа подвижности дорожки представленные в этой статье является простой и очень эффективный метод для количественного анализа миграции клеток. Потому что несколько типов клеток могут быть проанализированы 9-17, этот метод имеет потенциал широкого использования нескольких дисциплинах. Использование коллоидного золота покрытием покровные стекла позволяет для измерения трек площадь очищена от движущейся клетке. Анализ может измерить влияние различных раздражителей (т. е. факторы роста, оч...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Нет конфликта интересов объявлены.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Эта работа была поддержана грантами от Национального института здоровья (AI050677, HD-051998, и GM103433), Малкольм Feist сердечно-сосудистых исследований в общении и Американской ассоциации сердца predoctoral стипендий (10PRE4200007).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Название реагента Компания Номер в каталоге Комментарии
Покровные стекла (15 мм) Fisher Scientific 12-545-83
Желатин 300 Bloom Sigma-Aldrich G-1890
Tetrachloroauric Trihydrate кислота Фишер химической G54-1 14,5 мм (окончательное решение рабочей)
Цитрат натрия Fisher Scientific BP327-500 0,5% (окончательное решение рабочей)
Параформальдегид Fisher Scientific O4042 3% (окончательное решение рабочей)
100 мм блюдо культуры ткани Sarstedt 83,1802
12-луночные планшеты Fisher Scientific 08-772-29
24-луночные планшеты Fisher Scientific 07-200-84
Techne печь Hybridiser HB-1D LabPlanet 2040500 Стандартные печи лаборатория будет достаточно
10 мл Пипетки серологические Sarstedt 86.1254.001
Pipet-Aid Filler / диспенсер Драммонд 13-681-15
P200 Single-Channel Руководство пипетки Rainin PR-200
200 советов мл Барьер CLP BT200
ImageJ программного обеспечения HTTр :/ / rsb.info.nih.gov / ц / Лицензия: Public Domain
Nikon Eclipse TE300 с Фотометрия CoolSNAPfx монохромный 12-битной CCD камеры Nikon Снято; наиболее сопоставимыми спецификации имеет Nikon Eclipse Ti, а нижний конец Nikon 80i будет подходящим, а также. Другие бренды также обеспечить сопоставимые микроскопов.
Примечание: реагенты и оборудование, перечисленные ниже, были использованы нами в различных исследованиях. Другие материалы, поставщики, реактивы и оборудование можно использовать, пока они имеют сходные характеристики.

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Armstrong, P. B. The control of cell motility during embryogenesis. Cancer Metastasis Rev. 4, 59-79 (1985).
  2. Dustin, M. L. Stop and go traffic to tune T cell responses. Immunity. 21, 305-314 (2004).
  3. Mutsaers, S. E., Bishop, J. E., McGrouther, G., Laurent, G. J. Mechanisms of tissue repair: from wound healing to fibrosis. Int. J. Biochem. Cell Biol. 29, 5-17 (1997).
  4. Etienne-Manneville, S. Polarity proteins in migration and invasion. Oncogene. 27, 6970-6980 (2008).
  5. Parsons, J. T., Horwitz, A. R., Schwartz, M. A. Cell adhesion: integrating cytoskeletal dynamics and cellular tension. Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 11, 633-643 (2010).
  6. Mitchison, T. J., Cramer, L. P. Actin-based cell motility and cell locomotion. Cell. 84, 371-379 (1996).
  7. Pollard, T. D., Borisy, G. G. Cellular motility driven by assembly and disassembly of actin filaments. Cell. 112, 453-465 (2003).
  8. Bretscher, M. S. Getting membrane flow and the cytoskeleton to cooperate in moving cells. Cell. 87, 601-606 (1996).
  9. Albrecht-Buehler, G. The phagokinetic tracks of 3T3 cells. Cell. 11, 395-404 (1977).
  10. Smith, M. S., Bentz, G. L., Alexander, J. S., Yurochko, A. D. Human cytomegalovirus induces monocyte differentiation and migration as a strategy for dissemination and persistence. J. Virol. 78, 4444-4453 (2004).
  11. Palmisano, R., Itoh, Y. Matrix Metalloproteinase Protocols. Methods in Molecular Biology. 622, Humana Press. 379-392 (2010).
  12. Ohta, H., et al. HOXD3-Overexpression Increases Integrin Alpha V Beta 3 Expression and Deprives E-Cadherin while It Enhances Cell Motility in A549 Cells. Clinical and Experimental Metastasis. 7-8, 381-390 (2006).
  13. Kawa, S., Kimura, S., Hakomori, S., Igarashi, Y. Inhibition of chemotactic motility and trans-endothelial migration of human neutrophils by sphingosine 1-phosphate. FEBS Lett. 420, 196-200 (1997).
  14. Kawamura, K., et al. N-WASP and WAVE2 acting downstream of phosphatidylinositol 3-kinase are required for myogenic cell migration induced by hepatocyte growth factor. J. Biol. Chem. 279, 54862-54871 (2004).
  15. Ando, Y., Jensen, P. J. Epidermal growth factor and insulin-like growth factor I enhance keratinocyte migration. J. Invest. Dermatol. 100, 633-639 (1993).
  16. Todt, J. C., et al. Effects of tumor necrosis factor-alpha on human trophoblast cell adhesion and motility. Am. J. Reprod. Immunol. 36, 65-71 (1996).
  17. McAuslan, B. R., Reilly, W. Endothelial cell phagokinesis in response to specific metal ions. Exp. Cell. Res. 130, 147-157 (1980).
  18. Smith, M. S., Bentz, G. L., Smith, P. M., Bivins, E. R., Yurochko, A. D. HCMV activates PI(3)K in monocytes and promotes monocyte motility and transendothelial migration in a PI(3)K-dependent manner. J. Leukoc. Biol. 76 (3), 65-76 (2004).
  19. Smith, M. S., et al. Roles of phosphatidylinositol 3-kinase and NF-kappaB in human cytomegalovirus-mediated monocyte diapedesis and adhesion: strategy for viral persistence. J. Virol. 81, 7683-7694 (2007).
  20. Bentz, G. L., Yurochko, A. D. Human CMV infection of endothelial cells induces an angiogenic response through viral binding to EGF receptor and beta1 and beta3 integrins. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105, 5531-5536 (2008).
  21. Chan, G., Nogalski, M. T., Yurochko, A. D. Activation of EGFR on monocytes is required for human cytomegalovirus entry and mediates cellular motility. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 106, 22369-22374 (2009).
  22. Nogalski, M. T., Chan, G., Stevenson, E. V., Gray, S., Yurochko, A. D. HCMV-Regulated Paxillin in Monocytes Links Cellular Pathogenic Motility to the Process of Viral Entry. J. Virol. 85, 1360-1369 (2011).
  23. Turkevich, J. A study of the nucleation and growth processes in the synthesis of colloidal gold. Discuss. Faraday. Soc. 11, 55-75 (1951).
  24. Frens, G. Particle size and sol stability in mental colloids. Colloid & Polymer Science. 250, 736-741 (1972).
  25. Frens, G. Controlled nucleation for the regulation of the particle size in monodisperse gold suspensions. Phys. Sci. 241, 20-22 (1973).
  26. Zetter, B. R. Assay of capillary endothelial cell migration. Methods Enzymol. 147, 135-144 (1987).
  27. Scott, W. N., McCool, K., Nelson, J. Improved method for the production of gold colloid monolayers for use in the phagokinetic track assay for cell motility. Anal. Biochem. 287, 343-344 (2000).
  28. Wang, S. Y., Mak, K. L., Chen, L. Y., Chou, M. P., Ho, C. K. Heterogeneity of human blood monocyte: two subpopulations with different sizes, phenotypes and functions. Immunology. 77, 298-303 (1992).
  29. Windler-Hart, S. L., Chen, K. Y., Chenn, A. A cell behavior screen: identification, sorting, and enrichment of cells based on motility. BMC Cell Biol. 6, 14(2005).
  30. Pan, Y., et al. Size-dependent cytotoxicity of gold nanoparticles. Small. 3, 1941-1949 (2007).
  31. Rodriguez, L. G., Wu, X., Guan, J. L. Wound-healing assay. Methods Mol. Biol. 294, 23-29 (2005).
  32. Boyden, S. The chemotactic effect of mixtures of antibody and antigen on polymorphonuclear leucocytes. J. Exp. Med. 115, 453-466 (1962).
  33. Brooks, D. M., Brooks, S. A. In Vitro Invasion Assay Using Matrigel(R). Methods Mol. Med. 58, 61-70 (2001).
  34. Kuo, J. C., Wang, W. J., Yao, C. C., Wu, P. R., Chen, R. H. The tumor suppressor DAPK inhibits cell motility by blocking the integrin-mediated polarity pathway. J. Cell Biol. 172, 619-631 (2006).
  35. Benazeraf, B., et al. A random cell motility gradient downstream of FGF controls elongation of an amniote embryo. Nature. 466, 248-252 (2010).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Image J

Похожие статьи