Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Прародитель полученные из олигодендроцитов системе культуры человека от мозга плода

14.3K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/4274

⸱

20 декабря 2012 г.

 ,  ,  ,  ,  , 
1Laboratory of Molecular Medicine and Neuroscience, National Institute of Neurological Disorders and Stroke, National Institutes of Health, 2Laboratory of Neurophysiology, National Institute of Neurological Disorders and Stroke, National Institutes of Health

В этой статье

Краткое содержание

Первичные, человеческий мозг плода полученных, мультипотентных клеток-предшественников размножаться В пробирке, Сохраняя при этом способность дифференцироваться в нейроны и астроциты. Эта работа показывает, что нейронная предшественников можно индуцировать дифференцировку через этапы oligodendrocytic линии на кондиционирование с некоторыми факторами роста.

Аннотация

Дифференцировка нейральных прогениторов человека в нейрональные и глиальные типы клеток предоставляет модель для изучения и сравнения молекулярной регуляции развития клеточных линий нервной системы. Экспансия нейральных прогениторов из тканей ЦНС плода in vitro была хорошо охарактеризована. Несмотря на идентификацию и выделение глиальных прогениторов из субкортикального белого вещества мозга взрослого человека и разработку различных условий культивирования для направленной дифференцировки фетальных нейральных прогениторов в миелинизирующие олигодендроциты, получение достаточного количества олигодендроцитов человека для экспериментов in vitro остается затруднительным. Была описана дифференцировка галактоцереброзид+ (GalC)- и O4+-положительных клеток-предшественников или прогениторов олигодендроцитов (OPC) из нейральных клеток-предшественников с использованием мозга плода второго триместра. Однако эти клетки не пролиферируют в отсутствие поддерживающих клеток, включая астроциты и нейроны, и быстро погибают в культуре с течением времени. Сохраняется потребность в системе культивирования для получения клеток олигодендроцитарной линии, пригодных для экспериментов in vitro.

Культивирование первичных олигодендроцитов человека может, например, стать полезной моделью для изучения патогенеза нейротропных инфекционных агентов, таких как полиомавирус человека JCV, который in vivo инфицирует эти клетки. Такие культивируемые клетки также могут служить моделями других демиелинизирующих заболеваний центральной нервной системы (ЦНС). Первичные мультипотентные нейральные клетки-предшественники, полученные из головного мозга плода человека, пролиферируют in vitro, сохраняя способность дифференцироваться в нейроны (нейроны, производные от предшественников, PDN) и астроциты (астроциты, производные от предшественников, PDA). Данное исследование показывает, что нейральные предшественники могут быть индуцированы к дифференцировке через многие стадии развития олигодендроцитарной линии (олигодендроциты, производные от предшественников, PDO). Мы культивируем нейральные клетки-предшественники в безсывороточной среде DMEM-F12 с добавлением основного фактора роста фибробластов (bFGF), тромбоцитарного фактора роста (PDGF-AA), белка Sonic hedgehog (Shh), нейротрофического фактора 3 (NT-3), добавки N-2 и трийодтиронина (T3). Пассирование культивируемых клеток проводят при плотности 2.5e6 клеток на флакон 75 см примерно каждые семь дней. При таких условиях большинство клеток в культуре сохраняют морфологию, характеризующуюся небольшим количеством отростков, и экспрессируют маркеры пре-олигодендроцитов, такие как A2B5 и O-4. После удаления четырех факторов роста (GF) (bFGF, PDGF-AA, Shh, NT-3) и добавления кондиционированной среды от PDN клетки начинают образовывать больше отростков и экспрессировать специфические маркеры дифференцировки олигодендроцитов, такие как GalC и основной белок миелина (MBP). Мы провели фенотипическую характеристику с помощью многоцветной проточной цитометрии для идентификации уникальных маркеров олигодендроцитов.

Протокол

Примечание: Для обычного культивирования нейронных предшественников и oligodendrocytic клетках линии, инкубационного делается при 37 ° С в увлажненной 5% CO 2 атмосферы. Каждые 2 дня, среду заменяют, используя 50 до 100% свежей среды, если культура составляет 40-70% вырожденная. Во время возле слияния, культуры пассировать на 2-2.5e6/T75 колбы обычно на недельном графике.

1. Подготовка покрытием колбы

  1. Для подготовки покрытием колбы разбавлять 5 мг поли-D-лизин (PDL) в 100 мл деионизированной воды (DI-воды), затем слой T75 колбы с 50 мкг / мл PDL при комнатной температуре (RT) в темноте. После 1 ½ часа, аспирации PDL и промойте колбы раз с DI-воды. Пусть колбы сухой перед посевом клеток (табл. 1).

2. Начиная дифференциации нервных клеток-предшественников в Прародитель полученных Олигодендроциты (PDO)

Протокол являетсяolate человека предшественники ЦНС клеток описана в предыдущей публикации, и она не является частью данного протокола 1. Человека предшественники ЦНС клетки были выделены из конечного мозга в 8-недельной беременности мозг плода, полученных в соответствии с руководящими принципами NIH.

  1. Расти мультипотентных населения нейронных клеток-предшественников на PDL покрытием колбы в Neurobasal среде с добавлением 25 нг / мл шФРФ и 20 нг / мл эпидермального фактора роста (EGF) (рис. 1А). Не используйте их, если выше, чем прохождение 11 (p11).
  2. Начинают дифференцироваться нервных клеток-предшественников, когда культура составляет около 70% вырожденная.
  3. Сделайте полную дифференциацию олигодендроцитов среды с использованием бессывороточной DMEM / F12 HAMS 1:01 среде с добавлением бычьего сывороточного альбумина, L-глютамин, гентамицин, N2 компонентов, T3, Shh, NT-3, шФРФ, и PDGF-AA (табл. 1) . Эта среда будет определяться как средняя олиго с факторами роста (олиго средний + GF).
  4. Удалить Progenitor средств массовой информации из колб, промыть клетки один раз фосфатным буферным раствором (PBS), затем добавить олиго средний + GF (подробно описано в 2,3), чтобы начать олигодендроцитов дифференциации. Только клетки стремится к oligodendrocytic линия будет расти (рис. 1б). Культуры клеток в этой среде в течение 3 недель.
  5. Каждую неделю, когда клетки находятся на 90-95% слияния, переход их с помощью трипсина (0,05%)-ЭДТА (0,1%) (4 мл на флакон T75). Передача всей среды из ячеек, которые будут пересевать в 50 мл коническую трубку, это кондиционированной среды будет использоваться, чтобы утолить трипсина. Убедитесь, что не высохнут клеток. Затем добавить трипсина.
  6. Инкубируйте клетки трипсином в течение 5 минут при комнатной температуре, слегка нажав колбу несколько раз, чтобы помочь ячейке отряда.
  7. Quench трипсина путем добавления 4-5 мл кондиционированной среды в колбу с отдельных клеток.
  8. Передача среды и клеток те же 50 мл коническую трубку. Центрифуга среды и клеток при 1200 мин (~300 мкг) в течение 5 минут при комнатной температуре.
  9. Аспирируйте супернатант, ресуспендируют осадок клеток, слегка наклонив трубу, а затем добавьте свежую среду олиго + GF. Аккуратно пипетки средой и клетки вверх и вниз, чтобы сделать однородной суспензии клеток.
  10. Подсчет клеток и передачи 2.5e6 в каждый новый PDL-T75 покрытием колбы.

3. Последним шагом в дифференциации Олигодендроциты

  1. После 3 недель культуры в олиго средний + GF, когда клетки находятся на уровне 70-80% слияния, начать окончательный процесс дифференциации (рис. 1С).
  2. Подготовка средних таким же образом, как средство олиго + GF но без добавления четырех GF: Тсс, NT-3, шФРФ и PDGF-AA. Эта среда без четырех GF будут определены как олиго средний - GF.
  3. Аспирируйте среднего олиго + GF из колбы, смойте один раз PBS, а затем добавить общий объем 16 мл среды, из которых ¾ (12 мл) олиго среде - GF и ¼ (4 мл) PDN кондиционированной среды, для 6-10 Дней). Использование кондиционированной среды от PDN не является критическим для дифференциации процесса или для выживания клетки. Мы ведь заметил, что только непосредственный контакт с клетками PDO ПДН совместно культуре эксперименты оказали влияние на продолжительность выживания PDO. Время выживания в среде олиго - GF может быть продлен до двух-трех недель, если PDO клетки совместно культивировали с PDN клеток. Протокол различать человеческие нейронных клеток-предшественников в ПДН описано в предыдущей публикации, и она не является частью данного протокола 1. Фактор роста выходе из культуральной среды приводит к постепенному дифференцировать культуру клеток с несколькими процессами (рис. 1D).

4. Анализ проточной цитометрии

Анализ проточной цитометрии сравнивает приобретение олигодендроцитов маркеров при дифференциации процесса в связи с тем, родительских населения.

  1. Использование нейронных проgenitors в качестве контроля. Семенной PDO клеток при 2.5x10 6 ячеек в двух колбах T75 покрытые поли-D-лизина в олиго средний + GF.
  2. Через неделю, заменить среде с свежей среды олиго + GF в колбах в качестве контрольной культуры для жизнеспособности клеток, в то время как другие колбы были олиго средний - GF.
  3. Чтобы отделить PDO клеток в обеих средах использовать 20 Ед / мл папаина, а не трипсина. Это потому, что папаин имеет более мягкий эффект на клетки при диссоциации сохранения клеточной морфологии.
  4. Добавить 5 мл сбалансированный солевой раствор Эрла (EBSS), чтобы папаин флаконе. Поместите флакон при 37 ° С в течение 10 мин или до папаин полностью растворяется, и раствор становится ясно. Это папаин раствор, используемый для диссоциации клеток.
  5. Добавить 0,5 мл EBSS в дезоксирибонуклеазы I (аз) флакон (табл. 1). Осторожно перемешать. Добавить 0,25 мл этого раствора в пробирку растворенного папаин. Этот препарат содержит в конечной концентрации примерно 20 ЕД / мл папаина и 0.005% ДНКазы.
  6. Место папаин решение (как описано выше) на клетки и инкубировать при 37 ° С в течение 15-30 мин; следить за отрядом из клеток с помощью микроскопа. Остановить реакцию с 5 мл среды с или без GF и центрифуге при 1200 оборотов в минуту в течение 7 мин.
  7. Передача ячейки гранул из обеих колб на две разные 5 мл пробирок из полипропилена и мыть их с нормальной физиологической среде (НПМ: 145 мм NaCl, 5 мМ KCl, 1,8 мМ CaCl 2, 10 мМ Hepes и 10 мМ глюкозы) с добавлением 1 мг / мл бычьего сывороточного альбумина (НПМ + BSA).
  8. Выполните поверхности иммунной при 4 ° С в течение 20 мин с использованием специфических и надлежащим образом титруют первичных антител для A2B5, О4, Galc (табл. 2).
  9. Вымойте клеток с НПМ + BSA при 4 ° С в течение 5 мин и инкубировать их с конкретными вторичными антителами при 4 ° С в течение 20 мин (табл. 2).
  10. Для окраски внутриклеточных антигенов в том числе нестин, глиальных фибриллярный кислый белок (GFAP), класс III и бытьта;-тубулина и основному белку миелина (ОБМ) (табл. 2), исправить клеток в 2% параформальдегида (PFA) в течение 20 мин при комнатной температуре и permeabilize с холодным 70% этанола в течение 15 мин при температуре -20 ° C.
  11. Вымойте клеток с 1x PBS и инкубируют с конкретными вторичными антителами (табл. 2).
  12. Чтобы провести различие между неповрежденные клетки и субклеточных мусора в ходе анализа потока цитометрии, пятно клеток с 4,6-диамидино-2-phenyllindole, дигидрохлорид (DAPI) (Life Technologies, Grand Island, NY).
  13. В оптимизации выше протокола, мы выполнили все соответствующие контрольные эксперименты, чтобы подтвердить специфику каждого иммунореагента. Короче говоря, для непосредственного меченые антитела, соответствующие отрицательным контролем было непосредственно конъюгированных антител того же класса изотипа иммуноглобулина (или подкласс) и флуорохромом сопряженных в качестве основного антитела (т. е. изотипа контроля). Для непрямого иммуноокрашивания первичных антител, соответствующие отрицательным контролем сокак вторичные антитела, конъюгированные с флуорохромом интересов, которые специально предназначены иммуноглобулинов класса (или подкласс), принимающей в котором первичных антител был создан. При первичных антител с нескольких хостов (мышь, кролик, курица), были использованы вместе, мы использовали вторичные антитела ориентированных на первичных антител каждого хоста и каждого вторичного антитела, используемые обычно был перекрестный адсорбированная против иммуноглобулинов от других хостов, чтобы минимизировать поперечное проведение иммунореактивности. Положительного контроля включены прямые или косвенные иммуноокрашивания клеточных препаратов известны, чтобы выразить антигенов интерес использование прямых или косвенных immunoreactions с первичными антителами, специфичными к этим антигенам. Приведенные выше методы оптимизации проводились один раз для каждого типа иммунной экспериментов. Управление immunoreactions не выявило значительных поперечных эпитопа иммунореактивности между первичными и вторичными антителами. Проточной цитометрии проводили на равномерноприостановлено флуоресцентно меченых клеток с использованием FACVantage SE клетки сортировщик (BD Biosciences, San Jose, CA) оснащена тремя лазерами, которые обеспечивают возбуждение волн настроена на 488 нм, 647 нм, а также широкий УФ (351-364 нм) (рис. 2) .

5. Иммунофлуоресцентной

Примечание: Для иммунофлюоресценции экспериментов, PDO высевают в олиго средний + GF или олиго среде - GF в 2.5e5 в 6-луночные планшеты покрытые PDL. Клетки фиксировали в 2% PFA в различные моменты времени после ухода из факторов роста. Антитела пятно осуществляется на пластиковую 6-луночные планшеты вместо стекла покровные.

  1. Удалите медиа и добавьте 2% PFA. Инкубировать в течение 10 мин при комнатной температуре. Откажитесь PFA. Вымойте клетки 3 раза PBS, 5 минут каждый раз. Будьте осторожны, чтобы не высохнуть клеток.
  2. Permeabilize клетки для внутриклеточных маркеров использованием 0,25% тритона решение в PBS в течение 10 мин при комнатной температуре.
  3. Для предотвращения неспецифического связывания, клетки блока Fили 10 мин с HHG (1 мМ HEPES буфера, 2% лошадиной сыворотки и 10% козьей сывороткой в ​​сбалансированном солевом растворе Хэнкса). Развести конкретных первичных антител (табл. 2) к заранее определенной концентрации в HHG. Поместите разбавленный антител на клетки. Инкубировать 1 час при комнатной температуре на шейкере или при температуре 4 ° С в течение ночи.
  4. Вымойте клетки 3 раза PBS, в течение 5 минут каждый раз. Развести соответствующие вторичные антитела (табл. 2) в сочетании с флуорохромом к заранее определенной концентрации в HHG. Поместите смесь разбавленных вторичных антител на клетки. Инкубировать 1 час при комнатной температуре на шейкере в темноте.
  5. Вымойте клетки 3 раза PBS, в течение 5 минут каждый раз.
  6. Чтобы избежать фотообесцвечивания добавить 10 мкл продлить Золото с DAPI в клетки и поместить стекло покровное на них. Визуализируйте меченых клеток с использованием Axiovert 200M микроскоп флуоресценции (Zeiss, Thornwood, Нью-Йорк) (рис. 3).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Это очень важно начать процесс дифференциации от 70% -80% вырожденная нейронных культуре клеток-предшественников (рис. 1А). Многие клетки будут вымирать после замены культуральной среды от предшественников в среде олиго так как он включает в себя конкретные факторы роста. Это указывает на то, что рост нейронных клеток-предшественников не стремится oligodendrocytic фенотип не будут поддерживаться новой среде (рис. 1b). Инкубации в среде олиго + GF в течение одной недели в результате пром...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Этот протокол описывает, как получить плода олигодендроциты из первичных человеческих нервных клеток-предшественников и характеризуют их фенотипа с использованием как проточной цитометрии и иммунофлуоресцентного окрашивания. Расширение и рост нейронных предшественников из ЦНС плода была очень хорошо описал 1-4. Тем не менее, получение достаточных человеческих олигодендроцитов для экспериментов в пробирке остается сложной, хотя это можно идентифицировать и изолировать глиальных предшественников из взр...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Нет конфликта интересов объявлены.

Благодарности

Это исследование было поддержано Внутренние программы исследований в Национальном институте здоровья, NINDS. Авторы хотели бы поблагодарить всех членов лаборатории молекулярной медицины и неврологии, Рик Дрейфус за помощь в микроскопии и Памела С. Рассев за помощь в редактировании.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Название реагента Компания Номер в каталоге Конечная концентрация
DME / HAMS F12 1:01 Omega ученый DM-251 1X
Бычьего альбумина Сигма A9418 1%
Гентамицин Качество биологических препаратов 120-098-031 50 мкг / мл
L-Глютамин Качество биологических препаратов 118-084-061 2 мМ
T3 Сигма T2877 3 нМ
N2 компоненты Gibco BRL 17502 1:100
NT-3 PeproTech Inc 450-03 2 нг / мл
Shh R & D системы 1314-SH/CF 2 нг / мл
шФРФ PeproTech Inc 100-18B 20 нг / мл
PDGF-AA PeproTech Inc 100-13A 10 нг / мл
PDL Сигма P6407 50 мкг / м
PFA Электрон наук микроскопии 15712 2%
Трипсин Качество биологических препаратов 118-087-721
Папаин Worthington LK003178 20 Ед / мл
ДНКазы флаконах Worthington LK003172 0,005%
EBSS Worthington LK003188
Продлить золото
сDAPI 		Invitrogen P36931

Таблица 1. Реагентов.

Первичный Abs (все на 1 мкг / мл) Виды Изотип Источник Вторичный Abs
Проточной цитометрии
A2B5-биотин Мышь IgM Подарок Дж. Нильсон Стрептавидин Петр, Invitrogen, CA
O4FITC Мышь IgM Подарок от Дж. Нильсон
A2B5 Мышь IgM Millipore, MA gαm IgM-FITC, Invitrogen, CA
O4 Мышь IgM Millipore, MA gαm IgM-FITC, Invitrogen, CA
Galc Мышь IgG 3 Millipore, MA gαm IgG 3-PE, Southern Biotech, AL
MBP Курица IgY Millipore, MA dαck IgY-AMCA, Джексон иммунитета., Пенсильвания
Nestin Мышь IgG 1 Messam и соавт. 2000 28 gαm IgG 1-PECy5, Invitrogen, CA
GFAP Кролик IgG Millipore, MA gαrb IgG-PE, Джексон иммунитета, PA
βIII тубулина Мышь IgG 2 Covance, CA gαm IgG 2-Петр, Invitrogen, CA
Иммуноцитохимическая
βIII тубулина
(1:1,500) 		Мышь IgG 2a Covance, CA gαm IgG 2a-FITC, Invitrogen, CA
(1:1,000)
GFAP
(1:1,000) 		Кролик IgG Millipore, MA gαrb IgG-FITC, Джексон иммунитета, PA
(1:500)
MBP
(1:50) 		Курица IgY Millipore, MA dαck IgY-FITC, Джексон иммунитета, PA
(1:100)
O4
(1:100) 		Мышь IgM Millipore, MA gαm IgM-AF546, Invitrogen, CA
(1: 100)
Galc
(1:10) 		Кролик IgG Millipore, MA gαm IgM-AF750, Invitrogen, CA
(1:100)

Таблица 2. Антитела (АТ), используемые для проточной цитометрии и иммуноцитохимия анализы антитела конъюгаты: PE, фикоэритрин, Петр, фикоэритрин Texas Red, AMCA, амино-метил-кумарин-ацетат, Cy, цианинового; FITC, изотиоцианат флуоресцеина Ig. Иммуноглобулина. . AF: Alexa Fluor; gαm: антимышиного; gαrb: козий анти-кролик; dαck: осел борьбе с курицей.

Ссылки

  1. Messam, C. A., Hou, J., Gronostajski, R. M., Major, E. O. Lineage pathway of human brain progenitor cells identified by JC virus susceptibility. Ann. Neurol. 53, 636-646 (2003).
  2. Vescovi, A. L., Reynolds, B. A., Fraser, D. D., Weiss, S. bFGF regulates the proliferative fate of unipotent (neuronal) and bipotent (neuronal/astroglial) EGF-generated CNS progenitor cells. Neuron. 11, 951-966 (1993).
  3. Johe, K. K., Hazel, T. G., Muller, T., Dugich-Djordjevic, M. M., McKay, R. D. Single factors direct the differentiation of stem cells from the fetal and adult central nervous system. Genes Dev. 10, 3129-3140 (1996).
  4. McKay, R. Stem cells in the central nervous system. Science. 276, 66-71 (1997).
  5. Belachew, S., et al. Postnatal NG2 proteoglycan-expressing progenitor cells are intrinsically multipotent and generate functional neurons. J. Cell Biol. 161, 169-186 (2003).
  6. Almazan, G., McKay, R. An oligodendrocyte precursor cell line from rat optic nerve. Brain Res. 579, 234-245 (1992).
  7. Filipovic, R., Zecevic, N. Neuroprotective role of minocycline in co-cultures of human fetal neurons and microglia. Exp. Neurol. 211, 41-51 (2008).
  8. Goldman, S. A., Natesan, S. A niche-defying feat: induced oligoneogenesis in the adult dentate gyrus. Cell Stem Cell. 3, 125-126 (2008).
  9. Nunes, M. C., et al. Identification and isolation of multipotential neural progenitor cells from the subcortical white matter of the adult human brain. Nat. Med. 9, 439-447 (2003).
  10. Lyssiotis, C. A., et al. Inhibition of histone deacetylase activity induces developmental plasticity in oligodendrocyte precursor cells. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 104, 14982-14987 (2007).
  11. Sim, F. J., Goldman, S. A. White matter progenitor cells reside in an oligodendrogenic niche. Ernst Schering Res. Found Workshop. , 61-81 (2005).
  12. Raff, M. C., Miller, R. H., Noble, M. A glial progenitor cell that develops in vitro into an astrocyte or an oligodendrocyte depending on culture medium. Nature. 303, 390-396 (1983).
  13. Windrem, M. S., et al. Progenitor cells derived from the adult human subcortical white matter disperse and differentiate as oligodendrocytes within demyelinated lesions of the rat brain. J. Neurosci. Res. 69, 966-975 (2002).
  14. Chen, Y., et al. Isolation and culture of rat and mouse oligodendrocyte precursor cells. Nat. Protoc. 2, 1044-1051 (2007).
  15. Armstrong, R. C. Isolation and characterization of immature oligodendrocyte lineage cells. Methods. 16, 282-292 (1998).
  16. Hu, B. Y., Du, Z. W., Li, X. J., Ayala, M., Zhang, S. C. Human oligodendrocytes from embryonic stem cells: conserved SHH signaling networks and divergent FGF effects. Development. 136, 1443-1452 (2009).
  17. Gard, A. L., Williams, W. C. 2nd, Burrell, M. R. Oligodendroblasts distinguished from O-2A glial progenitors by surface phenotype (O4+GalC-) and response to cytokines using signal transducer LIFR beta. Dev. Biol. 167, 596-608 (1995).
  18. Hu, B. Y., Du, Z. W., Zhang, S. C. Differentiation of human oligodendrocytes from pluripotent stem cells. Nat. Protoc. 4, 1614-1622 (2009).
  19. Reubinoff, B. E., et al. Neural progenitors from human embryonic stem cells. Nat. Biotechnol. 19, 1134-1140 (2001).
  20. Pfeiffer, S. E., Warrington, A. E., Bansal, R. The oligodendrocyte and its many cellular processes. Trends Cell Biol. 3, 191-197 (1993).
  21. Zhang, S. C., Ge, B., Duncan, I. D. Tracing human oligodendroglial development in vitro. J. Neurosci. Res. 59, 421-429 (2000).
  22. Bradl, M., Lassmann, H. Oligodendrocytes: biology and pathology. Acta Neuropathol. 119, 37-53 (2010).
  23. Chong, S. Y., Chan, J. R. Tapping into the glial reservoir: cells committed to remaining uncommitted. J. Cell Biol. 188, 305-312 (2010).
  24. Jakovcevski, I., Filipovic, R., Mo, Z., Rakic, S., Zecevic, N. Oligodendrocyte development and the onset of myelination in the human fetal brain. Front Neuroanat. 3, 5(2009).
  25. Rao, R. C., Boyd, J., Padmanabhan, R., Chenoweth, J. G., McKay, R. D. Efficient serum-free derivation of oligodendrocyte precursors from neural stem cell-enriched cultures. Stem Cells. 27, 116-125 (2009).
  26. D'Intino, G., et al. Triiodothyronine administration ameliorates the demyelination/remyelination ratio in a non-human primate model of multiple sclerosis by correcting tissue hypothyroidism. J. Neuroendocrinol. 23, 778-790 (2011).
  27. Cui, Q. L., et al. Human fetal oligodendrocyte progenitor cells from different gestational stages exhibit substantially different potential to myelinate. Stem Cells Dev. , (2012).
  28. Messam, C. A., Hou, J., Major, E. O. Coexpression of nestin in neural and glial cells in the developing human CNS defined by a human-specific anti-nestin antibody. Exp. Neurol. 161, 585-596 (2000).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

нейральные клетки-предшественникидифференцировка олигодендроцитовпроточная цитометрияиммунофлуоресцентная микроскопияотмена факторов ростамаркеры олигодендроцитовглиальные предшественникиосновной белок миелина
Прародитель полученные из олигодендроцитов системе культуры человека от мозга плода
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.