Два метода могут быть использованы для создания этой модели: введение суспензии клеток рака в слепой кишки стену или трансплантация части опухоли подкожной на слепой кишки. Эта модель полезна для изучения естественное развитие колоректального рака и тестирования новых лекарственных средств против колоректального рака.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Ортотопическая мышиной модели колоректального рака
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Традиционные опухоли подкожной модели далеки от идеальных для изучения рака прямой кишки. Ортотопическая модели мыши колоректального рака, особенностью которой раковые клетки растут в их естественном месте, копировать человеческие заболевания с высокой точностью. Два метода могут быть использованы для создания этой модели. Оба метода схожи и требуют анестезии мыши и лапаротомию для выявления слепой кишки. Один метод предполагает введение колоректального рака суспензии клеток в слепой кишки стену. Раковые клетки вырастили первый в области культуры, собранных при subconfluent и готовят суспензии отдельных клеток. Небольшой объем клетки вводят медленно, чтобы избежать утечки. Другая техника включает в себя трансплантацию части опухоли подкожной на слепой кишки. Мышь с ранее установленной опухоли подкожной колоректального является эвтаназии и опухоль удаляется с использованием стерильной техники. Опухоль часть разделена на мелкие кусочки для пересадки на другой мыши. До трансплантации, слепой кишки стены слегка поврежденных чтобы облегчить опухолевой инфильтрации клеток. Время развитие первичной опухоли и метастазов в печень будет варьироваться в зависимости от техники, клеточной линии, и мышь видов, используемых. Это ортотопической модели мыши полезны для изучения естественное развитие колоректального рака и тестирования новых лекарственных средств против колоректального рака.
Протокол
I. Подготовка сотовый
- Колоректальный раковые клетки выращиваются в культуре и собираться после subconfluent.
- Суспензии отдельных клеток готовят в фосфатном буферном растворе и держал на льду.
II. Опухоль подготовка
- Мышь с ранее установленной опухоли подкожной колоректального является эвтаназии.
- Опухоль подкожной удаляется с использованием стерильной техники и разделен на части 2-3 мм
- Опухоль части хранятся в фосфатном буферном растворе на льду.
III. Мышь Подготовка
Примечание: В нашей лаборатории мы используем вдыхании изофлуран на анестезию мыши; альтернативно, можно использовать инъекционного наркоза, чтобы достичь того же эффекта
- Глубины анестезии оценивается с помощью ног крайнем случае. Там должно быть никаких снять рефлекс с ног крайнем случае.
- Антибиотики могут быть даны в этой точке.
- Наркозом мыши, которая ранее была выбрита, правильно расположен.
- Живот нацелен с бетадин решение.
- Брюшной полости и хирургические сайта завернуто в стерильных моды.
IV. Лапаротомия
- Небольшой ник выполнен в коже
- Брюшная мускулатура стены схватил и поднял
- Брюшную полость вводится и одного лезвия ножниц используется для передачи внутрибрюшного содержимого от
- Разрез продлен до 2-3 см.
В. Воздействие Слепая кишка
- Слепая кишка с ее слепой мешок окончание выявлены и экстериоризируется
- Слепая кишка изолированы от остальной части мыши, используя нарезанные, стерильные марлевые
- Теплые солевые используется для хранения влажного слепой кишки
VI. Введение клеток в слепой кишки стены
- 27 G или тоньше игла для инъекций 50 мкл объема клеток в слепой кишки стену
- Игла удаляется
- Место инъекции осматривается, чтобы убедиться в отсутствии утечки
- Слепая кишка возвращается в брюшную полость
VII. Трансплантация опухоли на Слепая кишка
Примечание: В дополнение к инъекционным клеток в слепой кишки стены, Альтернативный подход заключается в трансплантации опухоли на слепой кишки
- Фигура 8 стежка помещается на слепой кишки использованием 6-0 или 7-0 размера шва
- Слепой кишки стены слегка поврежденных
- Затем опухоль кусок позиционируется
- Стежка увязла
- Слепая кишка возвращается в брюшную полость
VIII. Мышь брюшной Закрытие стены и восстановление
- Мышь брюшной стенки закрыта с помощью трех прервал стежки использованием 3-0 или 4-0 размера шва
- Кроме того, можно использовать простой работает стежка
- Послеоперационные анальгетики и жидкости болюсно может быть дана в этом пункте
- Мышь, допускается, чтобы оправиться от наркоза.
Примечание: При ингаляционных анестетиков это обычно занимает 30 секунд
IX. Результаты - Первичная опухоль и метастазы печени
Первичные опухоли - показано на месте () и с признаками неоваскуляризации (B), с окрашиванием H & E, опухолях локально инвазивной (С)
Метастазами в печень - показал бывший естественных условиях (D)
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Хотя мышиные модели подкожной опухоли легко установить и контролировать, то ясно, что эта модель не может воспроизвести оригинальную анатомических сайт колоректального рака. Из-за разницы в микросреде, толстой кишки раковые клетки растущего под кожей, как было показано изменение их фенотипа и почти всегда терпят неудачу на пути прогресса и метастазировать 1,2. На самом деле, ответ опухоли на лечение может значительно варьироваться в зависимости от того, раковые клетки имплантируются в внематочной (подкожно) по сравнению с ортотоп...
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Благодарности
Отделение хирургии, Университет Калифорнии, Сан-Франциско
Раймонд Шахин, доктор медицинских наук
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Среды и компоненты для культивирования клеток | варьируются в зависимости от используемой клеточной линии | ||
| Фосфатно-солевой буферный раствор | BioWhittaker | 17-512F | также продается рядом других поставщиков |
| Центрифужные пробирки 15 mL, полипропиленовые | Corning | 430790 | |
| 6-луночные планшеты с крышкой | BD Biosciences | 353046 | |
| Пинцет ирисовый, прямой, с рифлеными концами | World Precision Instruments, Inc. | 15914 | рекомендуется иметь пару таких инструментов |
| Ножницы ирисовые для препарирования, прямые, острые | World Precision Instruments, Inc. | 14393 | |
| Иглодержатель (стандартный) | World Precision Instruments, Inc. | 14109 | |
| Иглодержатель (Кастровиехо) | World Precision Instruments, Inc. | 14137 | |
| Cidex Plus | World Precision Instruments, Inc. | 7364 | инструменты следует периодически автоклавировать, но их также можно стерилизовать замачиванием в Cidex |
| Шовный материал 6-0 или 7-0 | для слепой кишки; предоставлено кафедрой хирургии UCSF | ||
| Шовный материал 3-0 или 4-0 | для брюшной стенки; предоставлено кафедрой хирургии UCSF | ||
| Анестезиологический аппарат / Изофлуран | J.A. Baulch and Associates | 3206 | также продается рядом других поставщиков |
| Грелка, одноразовая, 6" x 6" | Prism Technologies | 20419 | |
| Лента, оранжевая, 13 mm x 13 m | Fisher Scientific | 15901F | для фиксации анестезированной мыши |
| Триммер Pro-Cord/Cordless | Oster Professional Products | 78997-010 | для бритья шерсти мыши |
| Бетадин | Fisher Scientific | 19-027132 | также можно приобрести в любом магазине медицинских товаров |
| Марлевая салфетка 2 x 2, 3-слойная | Johnson & Johnson | 7635 | также можно приобрести в любом магазине медицинских товаров |
| Стерильное поле, барьер, 16" x 29" | Johnson & Johnson | 0905 | также можно приобрести в любом магазине медицинских товаров |
| Аппликаторы с ватным наконечником, 6" | Fisher Scientific | 14-960-3Q | также можно приобрести в любом магазине медицинских товаров |
| Шприц 10 cc, с Luer-lock наконечником | BD Biosciences | 309604 | |
| Шприц 1 cc, туберкулинный, с конусным наконечником | BD Biosciences | 309602 | |
| Игла 27 1/2 G | BD Biosciences | 305109 | |
| Игла 30 G | BD Biosciences | 305106 |
Ссылки
- Heijstek, M. W., Kraneburg, O., Rinkes Borel, I. H. Mouse models of colorectal cancer and liver metastases. Dig Surg. 22, 16-25 (2005).
- Kobaek-Larsen, M., Thorup, I., Diederichsen, A., Fenger, C., Hoitinga, M. R. Review of colorectal cancer and its metastases in rodent models: comparative aspects with those in humans. Comp Med. 50, 16-26 (2000).
- Wilmanns, C., Fan, D., O'Brian, C. A., Bucana, C. D., Fidler, I. J. Orthotopic and ectopic organ environments differentially influence the sensitivity of murine colon carcinoma cells to doxorubicin and 5-fluorouracil. Int J Cancer. 52, 98-104 (1992).
- Kashtan, H., Rabau, M., Mullen, J. B., Wong, A. H. C., Roder, J. C., Shiptz, B., Stern, H. S., Gallinger, S. Intra-rectal injection of tumor cells: a novel animal model of rectal cancer. Surg Oncol. 1, 251-256 (1992).
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
