Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Эндотелина-1 Индуцированные средней мозговой артерии модели развития ишемического инсульта с лазерной доплеровской флоуметрии руководство в Крысы

19.7K просмотров

DOI:

10.3791/50014

16 февраля 2013 г.

В этой статье

Краткое содержание

Несколько животных моделях ишемии головного мозга были разработаны для имитации человеческого состояния инсульта. Этот протокол описывает эндотелина-1 (ЕТ-1) индуцированных окклюзии средней мозговой артерии (MCAO) модель развития ишемического инсульта у крыс. Кроме того, важными соображениями, преимущества и недостатки этой модели обсуждаются.

Аннотация

Инсульт является основной причиной инвалидности и третьей ведущей причиной смерти в мире, стоимостью около $ 70 млрд в Соединенных Штатах в 2009 1, 2. Некоторые модели ишемии головного мозга были разработаны, чтобы имитировать человеческое состояние инсульта. Было высказано предположение, что до 80% всех результатов ударов от ишемического повреждения в средней мозговой артерии (СМА) области 3. В начале 1990-х годов, эндотелина-1 (ЕТ-1) 4 был использован, чтобы вызвать ишемию, применяя его в непосредственной близости от поверхности MCA после трепанации черепа. Позднее эта модель была изменена 5 с помощью стереотаксической инъекции ET-1, прилегающих к MCA для производства церебральной ишемии. Основные преимущества этой модели включают в себя возможность выполнить процедуру быстро, способность контролировать сужение артерий, изменяя дозу ET-1 поставляется, не нужно манипулировать экстракраниальных сосудов, снабжающих кровью мозг, а также постепенное reperfusiпо ставкам, которые более точно имитирует реперфузии у человека 5-7. С другой стороны, ET-1 модель имеет недостатки, которые включают в себя необходимость для трепанации черепа, а также высших изменчивости ударного объема 8. Эта изменчивость может быть уменьшен с помощью лазерной допплеровской флоуметрии (ЛДФ), чтобы проверить ишемии головного мозга во время ET-1 вливания. Факторы, влияющие на ход изменчивости включают точность инфузии и партия ET-1 используется 6. Еще одним важным фактором является то, что хотя реперфузии является обычным явлением в человеческой инсульта, длительность окклюзии для ET-1 индуцированной MCAO не может точно имитировать у человека инсульт, где многие пациенты имеют частичную реперфузии в течение часов или дней после окклюзии 9, 10. Этот протокол будет подробно описать ET-1 индуцированной MCAO модель развития ишемического инсульта у крыс. Он также обратить внимание на особые соображения и возможные недостатки в течение всей процедуры.

Протокол

Этот протокол был одобрен Институциональные уходу и использованию животных комитета (IACUC) из Университета Флориды и в соответствии с "Руководство по уходу и использованию лабораторных животных» (восьмое издание, Национальной академии наук, 2011).

Материалы

  1. Животные: восемь-недельных, мужчина, Sprague Dawley крыс (Charles River Farms, Уилмингтон, Массачусетс, США) массой 250-300 г во время операции.
  2. Анестезия
    1. Вдыхание анестезии системе (VetEquip Inc, Pleasanton, CA, USA)
    2. Isoflurane анестетика (Бакстер Фармацевтика, Deerfield, IL, USA)
  3. Стереотаксическая система (Dav....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

1. Post-Op неврологическое обследование

После того, как животное приходит в сознание, разнообразные тесты могут быть использованы для оценки неврологического дефицита, включая баланс, сила хвата, лапы размещение, постуральная асимметрии и лестница восхождения. Задача семян подсолнечника является грубой оценкой моторные и сенсорные функции, которая имеет значительную корреляцию с инфарктом объемом 7, 12. Во время этой задачей, крысы приурочена при открытии и потребляет 5 семян подсолн.......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

ET-1 индуцированной MCAO является признанной модели экспериментального ишемического инсульта, который регулярно используется в нескольких штаммов крыс. Многие переменные, такие как крысы деформации, возраста животного, температура тела, метод анестезии, и оператор экспертизы может привести к увеличению изменчивости инфаркта объемов при использовании этой модели 5, 14. Тем не менее, некоторые исследователи показали, что преимущества этой модели можно отнести относительно неинвазивный подход, доза-эффект мозго.......

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Нет конфликта интересов объявлены.

Благодарности

Эта работа была поддержана грантами от Американской Ассоциации Сердца Большой Юго-Восточной Партнерская (09GRNT2060421), Американская медицинская ассоциация, и из университета Флориды клинических и трансляционных Science Institute. Адам Мекке NIH / NINDS, АЯРБ predoctoral человек (F30 NS-060335). Роберт Regenhardt получил predoctoral поддержки стипендий из Университета Флориды многопрофильная программа обучения в гипертония (T32 HL-083810).

....

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
  1. Животные: восемь-недельных, мужчина, Sprague Dawley крыс (Charles River Farms, Уилмингтон, Массачусетс, США) массой 250-300 г во время операции.
  2. Анестезия
    1. Вдыхание анестезии системе (VetEquip Inc, Pleasanton, CA, USA)
    2. Isoflurane анестетика (Бакстер Фармацевтика, Deerfield, IL, USA)
  3. Стереотаксическая система (David Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA)
    1. Малые системы стереотаксической животных
    2. Номера для разрыва ухо баров для крыс
    3. Газ анестезии голове держатель для крыс
  4. Регулирование температуры
    1. BAT-12 микрозонда термометр (World Precision Instruments, Inc, Сарасота, штат Флорида, США)
    2. Т / НАСОС, TP600 тепловой одеяло (Гаймар Industries, Inc Orchard Park, Нью-Йорк, США)
  5. Хирургические инструменты
    1. Скальпель ручкой и лезвием № 11, ирис щипцы, Грефе пинцет, зажим бульдог преднатяжителями, отвертка, 10 мкл шприц с 26 калибровочных скошенной иглой (инструменты Всемирного Precision, Inc Сарасоте, штат Флорида, США)
    2. Сверло микромоторы и стереотаксической держатель, Quintessential Стереотаксическая инжектор (Stoelting, Вуд-Дейл, Иллинойс, США)
    3. 1,0 мм круглого бора дрель, 1,0 мм перевернутого конуса сверла бора (Roboz хирургических инструментов Co, Inc, Gaithersburg, MD, USA)
  6. Хирургические принадлежности
    1. Крепежные винты 0-80 х 3/32 с 2,4 мм длины вала, 21-калибровочного канюли [длиной 4мм ниже пьедестала] и канюли манекен (пластмассы один, Роанок, Вирджиния, США)
    2. Jet акриловых протезов и жидкие (Lang Стоматологическая Производство Co, Inc Brooklyn, NY, США)
    3. 3,0 нейлона шва (Oasis, Mettawa, IL, USA)
    4. Ватные тампоны, Puralube глазная мазь (Fisher Scientifiс, Питтсбург, Пенсильвания, США)
    5. Электрические машинки для стрижки волос (Oster, Провиденс, Род-Айленд, США)
  7. Химикалии
    1. Эндотелина-1 (Американский пептид, Саннивейл, Калифорния, США)
    2. Хлоргексидин 2% (Agrilabs, Сент-Джозеф, штат Миссури, США)
    3. Бупренорфин HCl (Hospira Inc, Лейк-Форест, Иллинойс, США)
  8. Визуализация оборудование
    1. Хирургический микроскоп (Seiler инструмента и производства; Сент-Луис, Миссури, США)
    2. Волоконно-оптический осветитель (TechniQuip Corp, Ливермор, Калифорния, США)
  9. Лазерной доплеровской флоуметрии системы (ADInstruments, Inc, Колорадо-Спрингс, Колорадо, США)
    1. Стандартный зонд карандаш
    2. Держатель зонда
    3. Кровь расходомер
    4. PowerLab 4/30 с LabChart 7
  10. Измерение объема инфаркта
    1. Головного мозга крысМатрица (Zivic-Miller Lab., Inc Allison Park, штат Пенсильвания, США)
    2. 2,3,5-трифенилтетразолий хлорид (Sigma-Aldrich Co, Сент-Луис, Миссури, США) разбавляют до 0,05% в PBS
    3. Планшетный сканер (Epson Perfection V30, Epson America, Inc, Лонг-Бич, Калифорния, США)
    4. Изображение J программного обеспечения (ImageJ 1.42q программного обеспечения, американского Национального Института Здоровья, Bethesda, штат Массачусетс, США)

Ссылки

  1. Stroke--1989. Recommendations on stroke prevention, diagnosis, and therapy. Report of the WHO Task Force on Stroke and other Cerebrovascular Disorders. Stroke. 20, 1407-1431 (1989).
  2. Lloyd-Jones, D., et al.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги