Это видео иллюстрирует способ, с помощью клинического 3 T сканера, для контрастированием МР томографии наивным мыши визуальной проекции и для повторяющихся и продольных естественных условиях исследования в зрительного нерва дегенерации, связанных с острым повреждением зрительного нерва на раздавливание и хронической дегенерации зрительного нерва в нокаут-мышей (р50 КО).
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
В естественных изображений зрительного нерва волокна целостность контрастным усилением МРТ у мышей
* These authors contributed equally
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Грызун визуальная система охватывает ганглиозных клеток сетчатки и их аксонов, которые формируют зрительный нерв, чтобы войти таламическое и среднего мозга центры и постсинаптические прогнозы на зрительной коре. На основе своего специфического анатомического строения и удобной доступности, он стал излюбленным структура исследований по выживаемости нейронов, регенерации аксонов и синаптической пластичности. Последние достижения в области МРТ позволили визуализации в естественных условиях ретинобластому tectal части этой проекции с использованием марганца опосредованной повышение контрастности (MEMRI). Здесь мы приводим протокол MEMRI для иллюстрации визуальной проекции у мышей, которым резолюции (200 мкм) 3 может быть достигнуто с помощью обычных 3 Tesla сканеры. Мы показываем, как инъекция из одного дозировке 15 нмоль MnCl 2 приводит к насыщенному повышения неповрежденной проекции в 24 час. За исключением сетчатки, изменения в интенсивности сигнала не зависятвмятина от совпадали визуальной стимуляции или физиологического старения. Кроме того, мы применить эту технику для продольно контролировать дегенерацию аксонов в ответ на острый зрительного повреждения нерва, парадигма, по которому Mn 2 + транспорт полностью аресты на месте повреждения. С другой стороны, активное Mn 2 + транспорт количественно пропорциональна жизнеспособности, числа и электрической активности аксонов волокон. Для такого анализа мы примером Mn 2 + транспортные кинетики вдоль зрительной пути в трансгенных мышах (NF-kB р50 KO), где отображаются спонтанное атрофию сенсорные, в том числе визуальных, прогнозов. У этих мышей MEMRI указывает снижается, но не задерживается Mn 2 + транспорт по сравнению с мышами дикого типа, обнаруживая таким образом признаки структурных и / или функциональных нарушений на NF-kB мутаций.
Таким образом, MEMRI удобно соединяет в естественных условиях анализов и послеубойную гистологии для characterizatiна целостности нервных волокон и деятельности. Это очень полезно для продольных исследований по дегенерации аксонов и регенерации, и исследований мутантных мышей для подлинных или индуцибельных фенотипов.
Введение
На основе его благоприятного нервно-анатомические структуры грызун визуальная система предоставляет уникальные возможности для оценки фармакологических соединений и их способность быть посредником нейропротекцию 1 или про-регенеративный эффект 2,3. Кроме того, она позволяет исследования по функциональной и нейро-анатомических характеристик мутантных мышей, как это недавно примера для мышей, лишенных пресинаптического строительных лесов белок Фагот 4. Кроме того, широкий спектр дополнительных инструментов дает дополнительные показывая сетчатки ганглиозных клеток (РГК) и РГК чисел аксонов, а также РГК деятельности, например, пу....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Все вмешательства животных проводятся в соответствии с Европейской конвенцией по уходу за животными и использованию лабораторных животных и Заявление о ARVO для использовании животных в офтальмологической и Vision Research. Все эксперименты одобрено местным комитетом по этике. Порядок НА травмы у мышей описан в другом месте 9.
1. Интравитреальных Марганец впрыска
- Выполните Mn 2 + инъекции через 24 часа перед МР сканирование с помощью ассистента. Обезболить животных путем внутрибрюшинной инъекции 5% раствора хлоралгидрата (420-450 мг / кг массы тела в стерильном PBS). Для получения дополни....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Способность этого метода воображения, чтобы точно оценить жизнеспособность и функциональность визуального проектирования опирается на точного применения нетоксичной Mn 2 + дозировке в стекловидное тело и его поглощением РГК. Этот крупный предположение проверяется на рисунке 1, где слой конкретных Mn 2 + поглощение чем свидетельствует autometallography (окрашивания TIMM) 21. Retina разделы были проанализированы в 24 часов после ivit применения либо 15 нмоль или 1.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
MEMRI зрительной системы распространяется обычные нейробиологические методики для оценки функциональности под наивных и патологических состояний. Помимо предоставления уникальную возможность заглянуть в целостности изолированной ЦНС волокна тракта, MEMRI может быть легко дополнен поведенческих тестов, например, оптометрии и задач воды визуально основе, для расследования непосредственных последствий данной парадигмы для зрительного восприятия. Он также связывает электрофизиологических и гистологических исследова.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы заявляют, что они не имеют конкурирующие финансовые интересы.
Благодарности
АК поддерживается Oppenheim фонда и относительной влажности поддерживается Фондом Velux. Мы благодарим I. Krumbein технической и К. Будер для гистологического поддержки, Дж. Гольдшмидт (Лейбниц Институт нейробиологии, Магдебург, Германия) для технических консультаций по окрашиванию Тимм.
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Раствор хлорида марганца (II) 1 M | Sigma Aldrich, Тауфкирхен, Германия | M1787 | MEMRI контрастный реактив |
| Conjuncain | Dr. Mann Pharma, Берлин, Германия | PZN 7617666 | 0,4% оксибупрокаина гидрохлорид |
| Флоксаль глазные капли | Dr. Mann Pharma, Берлин, Германия | PZN 3820927 | 3 мг/мл офлоксацина |
| Мазь пантенол | Jenapharm, Йена, Германия | PZN | |
| Хлорал гидрат | Sigma Aldrich, Тауфкирхен, Германия | C8383 | 420-450 мг/кг массы тела |
| Шприц Hamilton | Компания Hamilton, Рино, Невада, США | 7634-01 | SYR 5 &микро; l, 75 RN, без иглы NDL |
| 34 G (34/35/pst4/tapN) | Hamilton Company, Рино, Невада, США | 207434/00 | съемная игла RN, 34 G, длина 38,1 мм, тип острия 4 |
| Бинокль Stemi-2000 | Zeiss, Оберкохен, Германия | ||
| 3 Т МРТ сканер Magnetom TIM Trio | Siemens Medical Solutions, Эрланген, Германия | ||
| Катушка для крысиной головы | Doty Scientific Inc., Колумбия, Южная Каролина, США | ||
| Держатель | на заказ | ||
| Лампа | |||
| Замороженный профиль средний NEG-50 | Thermo Fisher Scientific, Schwerte, Германия | 6502 | встраивание ткани для криосекций |
| Моногидрат дигидрофосфата натрия (2PO4· H2O) | Merck, Darmstadt, Германия | 106346 | для сульфидной перфузии |
| Нонагидрат сульфида натрия (Na2S· 9H2O) | Sigma Aldrich, Taufkirchen, Германия | 208043 | |
| Gum arabic | Roth, Arlesheim, Швейцария | 4159 | для окрашивания гидрохинона TIMM |
| (C6H6O2) | Roth, Arlesheim, Switzerland | 3586 | |
| Лимонная кислота (C6H8O7)Roth | , Arlesheim, Швейцария | 6490 | |
| Дигидрат цитрата натрия дигидрат (C6H5Na3O7· 2H2O) | Merck, Darmstadt, Германия | 106448 | |
| Нитрат серебра (AgNO3) | Roth, Arlesheim, Switzerland | 7908 |
Ссылки
- Kretz, A., et al. Simvastatin promotes heat shock protein 27 expression and Akt activation in the rat retina and protects axotomized retinal ganglion cells in vivo. Neurobiol Dis. 21, 421-430 (2006).
- Lima, S., et al.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
