Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.

Методическая статья

Укрощение Bioorthogonal Обратная электронной Demand Дильса-Альдера циклоприсоединения для Pretargeted ПЭТ

8.4K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/52335

⸱

3 февраля 2015 г.

 ,  , 
1Department of Radiology, Memorial Sloan Kettering Cancer Center

* These authors contributed equally

В этой статье

Краткое содержание

Биоортогональное обратное потребность в электронах циклоприсоединение Дильса-Альдера было использовано для создания эффективной и модульной предцелевой стратегии визуализации ПЭТ при раке. В данном протоколе этапы данной методики описаны в контексте модельной системы с использованием таргетного антитела к колоректальному раку huA33 и радиолиганда, меченного 64Cu.

Аннотация

Благодаря своему исключительному сродству и специфичности, антитела стали чрезвычайно перспективными векторами для доставки радиоизотопов к раковым клеткам для ПЭТ-визуализации. Однако необходимость мечения антител радионуклидами с длительным физическим периодом полураспада часто приводит к высоким мощностям дозы фонового облучения для тканей, не являющихся мишенями. Чтобы обойти эту проблему, мы применили предварительно направленную стратегию визуализации ПЭТ, основанную на реакции циклоприсоединения Дильса-Альдера с обратным спросом на электроны. Методология отделяет антитела от радиоактивности и, таким образом, использует положительные характеристики антител, избегая при этом их фармакокинетических недостатков. Система состоит из четырех этапов: (1) инъекция конъюгата mAb-транс-циклооктена (TCO); (2) период времени локализации, в течение которого антитело накапливается в опухоли и выводится из крови; (3) инъекция тетразина, меченного радиоактивными веществами; и (4) клик-лигирование компонентов in vivo с последующим выведением избытка радиолиганда. В примере, представленном в данной работе, меченный 64Cu-NOTA тетразиновым радиолигандом и трансциклооктен-конъюгированное гуманизированное антитело (huA33) были успешно использованы для выделения опухолей колоректального рака SW1222 с высоким контрастом опухоли к фону. Кроме того, методология предварительного нацеливания позволяет получать изображения высокого качества при уровне лишь малой доли дозы облучения нецелевых тканей, создаваемых радиоиммуноконъюгатами, непосредственно меченными 64Cu или 89Zr. В конечном счете, модульность этого протокола является одним из его самых больших преимуществ, поскольку трансциклооктеновый фрагмент может быть присоединен к любому неинтернализующему антителу, а тетразин может быть присоединен к широкому спектру радиоизотопов.

Введение

За последние тридцать лет, позитронно-эмиссионная томография (ПЭТ) стала незаменимым клиническим инструментом в диагностике и лечении рака. Антитела уже давно считаются перспективными векторы для доставки позитронно-эмиссионной радиоизотопов к опухолям из-за своей изысканной сродством и специфичностью для биомаркеров рака. 1,2 Тем не менее, относительно медленные Фармакокинетика в естественных условиях антител обязательное использование радиоизотопов с мульти-день физические периоды полураспада. Это сочетание может дать высокие дозы радиоактивного облучения для нецелевых органов пациентов, что является важным осложнением, что имеет особое клиническое значение, так как radioimmunoconjugates вводят внутривенно и поэтому - в отличие от частичных сканирований тела КТ - результат в поглощенных доз в каждой части тела, независимо от опрошенных тканей.

Для того, чтобы обойти эту проблему, значительные усилия были посвящены развитмат ветствующую защитную эк ПЭТ стратегий изображений, что отделить радиоизотоп и целевой части, таким образом, используя благоприятные свойства антител, одновременно обходя их внутренние ограничения фармакокинетические. Эти стратегии - наиболее часто называют pretargeting или многоступенчатый таргетинг - обычно используют четыре стадии: (1) введение антител, способных связываться как антиген и меченый лиганд; (2) накопление антитела в ткани-мишени и ее выведения из крови; (3) введение радиоактивного небольшой молекулы; и (4) лигирование в естественных радиолиганда с антителом с последующим быстрым выведением избыточных радиолиганда. 3-8 В некоторых случаях, дополнительной очистки агент вводят между этапами 2 и 3, чтобы ускорить выделение любого антитела что до сих пор, чтобы связать опухоли и остается в крови. 5

Вообще говоря, TWО типы pretargeting стратегий являются наиболее распространенными в литературе. В то время как оба оказались успешными в доклинических моделей, они также обладают ключевые ограничения, которые препятствуют их клиническое применение. Первая стратегия опирается на высоким сродством между стрептавидином, конъюгированным антител и биотин-модифицированный радиоактивные метки; Однако иммуногенность стрептавидином-модифицированного антитела, оказалось, беспокойство проблема в связи с переводом. 5,6,9,10 Вторая стратегия, напротив, использует биспецифических антител, которые были генетически сконструированных для связывания как рак биомаркеров антиген и малая молекула с радиоактивной меткой Гаптен. 3,11-14 Хотя этот последний маршрут, конечно, творческий, его широкое применение ограничивается сложностью, расходы, и отсутствие модульности системы.

Недавно мы разработали и опубликовали pretargeted методологии ПЭТ на основе спроса обратная электронного Дильса-Альдера (IEDDA) реакции циклоприсоединения между транс -cyclooctene (TCO) и тетразин (TZ;. Рисунок 1) 11, а сама реакция была известна на протяжении десятилетий, IEDDA химия пережила возрождение в последние годы в качестве метода биоконъюгации нажмите химии, как показано на увлекательная работа из групп Ральф Вейследер, Джозеф Фокс, и Питер Конти среди других. 12-15 IEDDA циклоприсоединение была применена в широком диапазоне параметров, в том числе флуоресценции изображений с пептиды, антитела, и наночастиц, а также ядерные изображений . с обеих radiohalogens и radiometals 16-26 перевязка высокие урожаи, чистый, быстрый (к 1> 30000 M -1 с -1), избирательное, а также - в критическом. - bioorthogonal 27 в то время как число типов клик химии - в том числе Cu-катализируемой азида алкин cycloadditions, процедить раскрученной азида алкин cycloadditions и Штаудингер Лигations -. являются bioorthogonal как хорошо, это уникальное сочетание быстрой кинетики реакции и bioorthogonality, что делает IEDDA химию так хорошо подходит для pretargeting приложений в целых организмах 28,29 Вдоль этих линий, важно отметить, что в недавнем докладе от наших лаборатории не было первым применил IEDDA химию pretargeting: первый доклад pretargeted изображений с IEDDA возник из-за работы Россина, и др, и в нем методологии ОФЭКТ, использующей 111 В-меченого тетразин 30..

Как мы уже говорили выше, pretargeting методология имеет четыре довольно простые шаги (рисунок 2). В протоколе в стороны, pretargeted стратегия для ПЭТ колоректального рака, который использует 64-Си NOTA-меченого тетразин радиолиганда и ТСО-модифицированный конъюгат антитела huA33 будет описано. Однако, в конечном счете модульность этой методологии является одним из его грешь активы, транс -cyclooctene фрагмента может быть добавлена ​​к любой не интернализации антитела и тетразин может быть присоединен к широкому спектру радиоактивных репортеров.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

ЭТИКА ЗАЯВЛЕНИЕ: Все в естественных условиях экспериментов на животных, описанных проводились в соответствии с утвержденным протоколом и под этических принципов в Memorial Sloan Kettering онкологический центр Институциональные животных уходу и использованию комитета (IACUC).

1. Синтез TZ-BN-НОТА

  1. В небольшой реакционный сосуд, растворите 7 мг NH 2 -bn-Примечание (1,25 х 10 -2 ммоль) в 600 мкл раствора NaHCO 3 буфера (0,1 М, рН 8,1). Проверьте рН раствора. Если необходимо, довести рН раствора до 8,1 с помощью небольших аликвот 0,1 М Na 2 CO 3.
  2. Добавить раствор NH 2 -Bn-NOTA до 0,5 мг TZ-NHS (1,25 × 10 -3 ммоль) в 1,7 мл микроцентрифужных трубки.
    Примечание: Tz-NHS либо могут быть взвешивают сухой или добавлены из маточного раствора сухого ДМФ или ДМСО (<50 мкл).
  3. Разрешить полученный реакционный раствор ют реагировать в течение 30 мин при комнатной температурес мягким агитации.
  4. Через 30 мин, очищают продукт с помощью обращенно-фазовой С18 ВЭЖХ, чтобы удалить непрореагировавший NH 2 -bn-NOTA. NH 2, -Bn-NOTA можно контролировать при длине волны 254 нм, в то время как Tz-NHS и Tz-n-NOTA лучше контролировали при длине волны 525 нм.
    Примечание: время удерживания, очевидно, сильно зависит от установки оборудования ВЭЖХ каждого лаборатории (насосы, колонки, трубы и т.д.). Тем не менее, чтобы представить, например, если градиент 0: 100 MeCN / H 2 O (оба с 0,1% TFA) до 100: 0 MeCN / H 2 O в течение 25 мин и аналитической 4,6 х 250 мм С 18 колонке используется , время удерживания TZ-BN-Нота, TZ-NHS, и NH 2 -Bn-NOTA будет около 15 мин, 16,5 мин и 10 мин, соответственно. Продукт может быть очищен от других компонентов реакционных в любом одном периоде или нескольких трасс с использованием полупрепаративной и препаративной С 18 колонку HPLC. 1 Н-ЯМР, анальныйytical ВЭЖХ и ESI-MS все методы, которые могут быть использованы для проверки чистоты законченного Tz-BN-NOTA предшественника. 11
  5. Замораживание собранную ВЭЖХ элюент с помощью жидкого азота.
  6. Оберните замороженную пробирку в непрозрачной алюминиевой фольги.
  7. Поместите замороженные пробирки в лиофилизации судна O / N, чтобы удалить ВЭЖХ подвижную фазу.
  8. Храните очищенный продукт (ярко-розовый твердый) в темноте при -80 ° C.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Это приемлемо остановочный пункт в процедуре. Завершено Tz-BN-NOTA предшественником является стабильным в течение по крайней мере 1 год в этих условиях.

2. Подготовка huA33-TCO иммуноконъюгат

  1. В 1,7 мл микроцентрифужных трубки, подготовить 1 мг / мл (2,7 мМ) раствор TCO-NHS в сухом ДМФ.
  2. В 1,7 мл микроцентрифужных трубки, подготовить 2 мг / мл (13,3 мкмоль) раствор huA33 в 1 мл фосфатно-буферным раствором, рН 7,4 (0,01 М PO 4 3-, 0,154 М NaCl).
  3. Использование небольших аликвот (<5 мкл) 0,1 М Na 2 CO 3, довести рН раствора антител к 8,8-9,0. Используйте либо индикаторную бумагу или рН-метр с микроэлектродом контролировать рН, и будьте осторожны, чтобы не допустить pH подняться выше рН 9,0.
  4. После того, как раствор антитела при правильном рН, добавить объем раствора ТСО-NHS, соответствующей 8 мол рных эквивалентов активированного сложного эфира. Например, добавьте 7,9 мкл 1 мг Раствор / мл TCO-NHS (1,07 х 10 -7 моль TCO-NHS) к 1 мл раствора 2 мг / мл huA33 антител (1,33 х 10 -8 моль huA33). Не более 5% по объему DMF в растворе.
  5. Аккуратно перемешайте раствор, переворачивая пробирку микроцентрифужных несколько раз.
  6. Оберните микроцентрифужную трубку в непрозрачной алюминиевой фольги.
  7. Разрешить раствор инкубируют в течение 1 ч при комнатной температуре при умеренном перемешивании.
  8. После 1 ч при комнатной температуре, в результате очистки иммуноконъюгата с использованием предварительно упакованные одноразовые Sizе исключение колонка для обессоливания. Во-первых, промыть эксклюзивной колонке, как описано поставщика, чтобы удалить какие-либо консерванты присутствует на колонке при хранении. Затем добавляют в реакционную смесь в колонке гель, промыть колонку с 1,5 мл 0,9% стерильного физиологического раствора, а затем собрать продукт, используя 2 мл 0,9% стерильного солевого раствора в качестве элюента.
    Примечание: Этот шаг даст заполненную huA33-совокупную стоимость владения в виде раствора в 2 мл.
  9. Измерьте концентрацию полученного в результате huA33-ТШО на УФ-Vis спектрофотометр.
  10. Если концентрация выше, желательно, концентрат раствор huA33-TCO с использованием центробежного блок фильтра с молекулярной массой 50000 отсечки.
    Примечание: Важно отметить, что в то время huA33 и множество других известных антител (например, бевацизумаб, трастузумаб, цетуксимаб и J591) очень терпим к концентрированием, агрегация и осаждение может происходить при концентрации и в других случаях. Исследователи, пытающиеся это ProcedЮр с новым антитела должен доверять литературе или их собственных знаний антитела идет речь в отношении того, действительно ли концентрировать антитела.
  11. Храните заполненную huA33-TCO иммуноконъюгат при 4 ° С в темноте.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Это приемлемо остановочный пункт в процедуре. Завершения МАБ TCO сопряжены должен быть стабильным в течение по крайней мере 3 месяцев в этих условиях хранения.

3. 64 Cu радиоактивной из TZ-BN-НОТА

Примечание: Этот шаг протокола включает обработку и манипулирование радиоактивности. Перед выполнением этих действий - или при выполнении любых других работ с радиоактивностью - исследователи должны консультироваться с Департаментом радиационной безопасности их дома учреждения. Принять все возможные меры для сведения к минимуму воздействия ионизирующего излучения.

  1. В 1,7 мл трубки микроцентрифужных, подготовить 0,5 мг / мл (723 мкм) решение TZ-BN-НОТА.
  2. В 1,7 мл MicroCentrifuge трубки, добавляют 10 мкл раствора Tz-n-Примечание (5 мкг), чтобы 400 мкл 0,2 М NH 4 OAc рН 5,5 буфер.
  3. В интересах надлежащего радиохимического ноте учета, измерения и регистрации количества радиоактивности в образце с помощью дозы калибратор до и после наступления шагов в приведенной ниже протокола (3,4-3,8). Это поможет с точного определения радиохимических урожайности.
  4. Добавить 2000 мкКи (74 МБк) от 64 Cu в растворе Tz-n-NOTA.
    Примечание: Как правило, [64 Cu] CuCl 2 подается в небольшом объеме (<30 мкл) 0,1 Н HCl, и, таким образом, только небольшие объемы (<10 мкл) этого раствора необходимо для реакции радиоактивной метки. Если крупные объемы [64 Cu] CuCl 2 акции необходимы, реакция радиоактивной терпимо увеличения общего объема реакционной смеси. Тем не менее, значение рН реакционной радиоактивной раствора следует тщательно контролировать, чтобы обеспечитьчто он не упадет ниже рН 4,0.
  5. Разрешить раствор инкубируют в течение 10 мин при комнатной температуре при умеренном перемешивании.
  6. После 10 мин инкубации, очищают продукт с помощью обращенно-фазовой С 18 ВЭЖХ. Время удерживания, очевидно, сильно зависит от установки оборудования ВЭЖХ каждого лаборатории (насосы, колонки, трубы и т.д.). Тем не менее, чтобы представить, например, если градиент 5:95 MeCN / H 2 O (оба с 0,1% TFA) до 95: 5 MeCN / H 2 O в течение 15 мин, используется, время удерживания 64 Cu-Tz- Bn-NOTA должна быть около 9,8 мин, а бесплатно, незакомплексованный 64 Cu будет элюирования с фронта растворителя составляет около 2-4 мин.
  7. С использованием роторного испарителя, удалить ВЭЖХ элюента.
  8. Повторного растворения продукта 64 Cu-Tz-n-NOTA в 0,9% стерильного солевого раствора.
    Примечание: данное 12,7 ч физический период полураспада 64 Cu, это не приемлемо остановочный пункт в процедуре. Выполните синтез 64 Cu-TZ-BN-НЕНепосредственно перед инъекцией радиоактивного и следовать шаг за 3,7 сразу за шагом 4,5.

4. В Vivo Pretargeted ПЭТ

Примечание: Как и в разделе 3 протокола, этот шаг протокола включает обработку и манипулирование радиоактивности. Перед выполнением этих шагов исследователи должны консультироваться с Департаментом радиационной безопасности их дома учреждения. Принять все возможные меры для сведения к минимуму воздействия ионизирующего излучения.

  1. В женской бестимусных голых мышей, подкожно имплантата 1 х 10 6 SW1222 колоректального рака клеток и позволить им расти в 100-150 мм 3 ксенотрансплантате (9-12 дней после прививки). 11
  2. Развести аликвоту раствора huA33-ППО от протокола разделе 2 до концентрации 0,5 мг / мл в 0,9% стерильного солевого раствора.
  3. Вводят 200 мкл раствора huA33-TCO (100 мкг) в хвостовую вену ксенотрансплантата мыши, несущей,
  4. Разрешить 24 ч для накопления huA33-ТШО в опухоли мыши.
  5. Развести 64 Cu-Tz-n-NOTA радиолиганда в концентрации 1,5 мКи / мл в 0,9% стерильного солевого раствора.
  6. Вводят 200 мкл 64 Cu-Tz-n-NOTA раствора радиолиганда (300 мкКи; 11,1 МБк; 1,6 нмоль 64 Cu-TZ-BN-Нота, при условии, удельную активность 6,7 МБк / нмоль) в хвостовую вену ксенотрансплантат мышей, несущих.
  7. В момент времени желательно изображений (например, 2, 6, 12 или 24 ч после инъекции), обезболить мышь с 2% изофлуран: газовую смесь кислорода.
  8. Наведите на кровати маленькое животное ПЭТ сканера. Поддержание анестезии во время сканирования с использованием 1% в ИФ: газовую смесь кислорода. До размещения животное на планшете сканера, убедитесь, анестезии по методу схождение щепотку и применять ветеринарный мазь для глаз мыши, чтобы предотвратить высыхание во время анестезии.
  9. Приобретать данные ПЭТ для мыши с помощью статическогосканирование с минимумом 20000000 совпадающих событий, используя окно энергии 350-700 кэВ и временную окно совпадение 6 нс. После завершения сделки по приобретению изображения, не оставляйте мышь без присмотра и не кладите его в клетку с другими мышами, пока он не пришел в сознание.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Начальные три этапа эксперимента - синтез TZ-BN-Нота, сопряжения ТШО huA33, и радиомечения в TZ-BN-НОТА построить (рис 3 и 4) - отличаются высокой надежностью. В случае описанной выше процедуре, конструкция Tz-n-NOTA был синтезирован с высоким выходом и чистотой. HuA33 антитела был изменен с 4,2 ± 0,6 TCO / монАТ, и Tz-n-NOTA метили с 64 Cu с получением очищенного радиолиганда в> 99% радиохимической чистоты,> 85% распада-скорректированный выход, и удельная активность ~ ...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Основным преимуществом этого pretargeted стратегии ПЭТ является то, что он способен разграничения опухоли с целевой к фону контрастности изображения на только часть фонового излучения дозы производится непосредственно меченых антител. Например, в колоректального рака системы формирования изображения, описанного здесь, данные острых опытах биораспределению были использованы для выполнения вычислений для дозиметрии стратегии pretargeting 64 Cu-основе, а также непосредственно меченного 64 Cu-NOTA-huA3...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

Авторы благодарят профессора Ральфа Вайследера, доктора Пэта Занцонико и доктора Нагу ВараКишор Пилларсетти за полезные беседы, а также NIH за финансирование (BMZ: 1K99CA178205-01A1)

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Тетразин NHS EsterSigma-Aldrich764701хранить при -80 °°; C
Трансциклоктен NHS EsterSigma-Aldrich764523хранить при -80 °°; C
p-NH2-Bn-NOTAMacrocyclicsB-601Store at -80 ° С

Ссылки

  1. Wu, A. M. Antibodies and antimatter: The resurgence of immuno-PET. Journal of Nuclear Medicine. 50, 2-5 (2009).
  2. Zeglis, B. M., Lewis, J. S. A practical guide to the construction of radiometallated bioconjugates for positron emission tomography. Dalton Transactions. 40, 6168-6195 (2011).
  3. Hollander, N. Bispecific antibodies for cancer therapy. Immunotherapy. 1, 211-222 (2009).
  4. Liu, G., et al. Tumor pretargeting in mice using 99mTc-labeled morpholino, a DNA analog. Journal of Nuclear Medicine. 43, 384-391 (2002).
  5. Boerman, O. C., van Schaijk, F. G., Oyen, W. J. G., Corstens, F. H. M. Pretargeted radioimmunotherapy of cancer: Progress step by step. Journal of Nuclear Medicine. 44, 400-411 (2003).
  6. Goldenberg, D. M., Sharkey, R. M., Paganelli, G., Barbet, J., Chatal, J. F. Antibody pretargeting advances cancer radioimmunodetection and radioimmunotherapy. Journal of Clinical Oncology. 24, 823-834 (2006).
  7. Sharkey, R. M., Chang, C. H., Rossi, E. A., McBride, W. J., Goldenberg, D. M. Pretargeting: taking an alternate route for localizing radionuclides. Tumor Biology. 33, 591-600 (2012).
  8. Sharkey, R. M., et al. Improving the delivery of radionuclides for imaging and therapy of cancer using pretargeting methods. Clinical Cancer Research. 11, 7109-7121 (2005).
  9. Schultz, J., et al. A tetravalent single-chain antibody-streptavidin fusion protein for pretargeted lymphoma therapy. Cancer Research. 60, 6663-6669 (2000).
  10. Lewis, M. R., et al. In vivo evaluation of pretargeted 64Cu for tumor imaging and therapy. Journal of Nuclear Medicine. 44, 1284-1292 (2003).
  11. Zeglis, B. M., et al. A pretargeted PET imaging strategy based on bioorthgonal Diels-Alder click chemistry. Journal of Nuclear Medicine. 54, 1389-1396 (2013).
  12. Blackman, M. L., Royzen, M., Fox, J. M. Tetrazine ligation: fast bioconjugation based on inverse electron demand Diels-Alder reactivity. Journal of the American Chemical Society. 130, 13518-13519 (2008).
  13. Devaraj, N. K., Upadhyay, R., Hatin, J. B., Hilderbrand, S. A., Weissleder, R. Fast and sensitive pretargeted labeling of cancer cells through a tetrazine/trans-cyclooctene cycloaddition. Angewandte Chemie-International Edition. 48, 7013-7016 (2009).
  14. Devaraj, N. K., Weissleder, R. Biomedical applications of tetrazine cycloadditions. Accounts of Chemical Research. 44, 816-827 (2011).
  15. Devaraj, N. K., Weissleder, R., Hilderbrand, S. A. Tetrazine-based cycloadditions: application to pretargeted live cell imaging. Bioconjugate Chemistry. 19, 2297-2299 (2008).
  16. Keliher, E. J., Reiner, T., Turetsky, A., Hilderbrand, S., Weinberg, R. A. High-yielding, two-step 18F labeling strategy for 18F-PARP1 inhibitors. ChemMedChem. 6, 424-427 (2011).
  17. Reiner, T., Earley, S., Turetsky, A., Weissleder, R. Bioorthogonal small-molecule ligands for PARP1 imaging in living cells. ChemBioChem. 11, 2375-2377 (2010).
  18. Reiner, T., Keliher, E. J., Earley, S., Marinelli, B., Weissleder, R. Synthesis and in vivo imaging of a 18F-labeled PARP1 inhibitor using a chemically orthogonal scavenger-assisted high-performance method. Angewandte Chemie International Edition. 50, 1922-1925 (2011).
  19. Taylor, M. T., Blackman, M., Dmitrenko, O., Fox, J. M. Design and synthesis of highly reactive dienophiles for the tetrazine-trans-cyclooctene ligation. Journal of the American Chemical Society. 133, 9646-9649 (2011).
  20. Selvaraj, R., et al. Tetrazine-trans-cyclooctene ligation for the rapid construction of integrin alpha(v)beta(3) targeted PET tracer based on a cyclic RGD peptide. Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters. 21 (3), 5011-5014 (2011).
  21. Liu, S., et al. Efficient 18F labeling of cysteine-containing peptides and proteins using tetrazine-trans-cyclooctene ligation. Molecular Imaging. 12, 121-128 (2013).
  22. Han, H. S., et al. Development of a bioorthogonal and highly efficient conjugation method for quantum dots using tetrazine-norbornene cycloaddition. Journal of the American Chemical Society. 132, 7838-7839 (2010).
  23. Zeglis, B. M., et al. Modular strategy for the construction of radiometalated antibodies for positron emission tomography based on inverse electron demand Diels-Alder click chemistry. Bioconjugate Chemistry. 22, 2048-2059 (2011).
  24. Zeng, D., Zeglis, B. M., Lewis, J. S., Anderson, C. J. The growing impact of bioorthogonal click chemistry on the development of radiopharmaceuticals. Journal of Nuclear Medicine. 54, 829-832 (2013).
  25. Reiner, T., Zeglis, B. M. The inverse electron demand Diels-Alder reaction in radiochemistry. Journal of Labeled Compounds and Radiopharmaceuticals. 57, 285-290 (2014).
  26. Li, Z., et al. Tetrazine-trans-cyclooctene ligation for the rapid construction of 18-F labeled probes. Chemical Communications. 46, 8043-8045 (2010).
  27. Karver, M. R., Weissleder, R., Hilderbrand, S. A. Synthesis and evaluation of a series of 1,2,4,5-tetrazines for bioorthogonal conjugation. Bioconjugate Chemistry. 22, 2263-2270 (2011).
  28. Sletten, E. M., Bertozzi, C. R. Bioorthogonal chemistry: fishing for selectivity in a sea of functionality. Angewandte Chemie International Edition. 48, 6973-6998 (2009).
  29. Bosch, S. M., et al. Evaluation of strained alkynes for Cu-free click reaction in live mice. Nuclear Medicine and Biology. 40, 415-423 (2013).
  30. Rossin, R., et al. In vivo chemisry for pretargeted tumor imaging in live mice. Angewandte Chemie International Edition. 49, 3375-3378 (2010).
  31. Ackerman, M. E., et al. A33 antigen displays persistent surface expression. Cancer Immunology and Immunotherapy. 57, 1017-1027 (2008).
  32. Carrasquillo, J. A., et al. 124I-huA33 antibody PET of colorectal cancer. Journal of Nuclear Medicine. 52, 1173-1180 (2011).
  33. Sakamoto, J., et al. A phase I radioimmunolocalization trial of humanized monoclonal antibody huA33 in patients with gastric carcinoma. Cancer Science. 97, 1248-1254 (2006).
  34. Rossin, R., Lappchen, R., vanden Bosch, S. M., LaForest, R., Robillard, M. S. Diels-Alder reaction for tumor pretargeting: In vivo chemistry can boost tumor radiation dose compared with directly labeled antibody. Journal of Nuclear Medicine. 54, 1989-1995 (2013).
  35. Rossin, R., et al. Highly reactive trans-cyclooctene tags with improved stability for Diels-Alder chemistry in living systems. Bioconjugate Chemistry. 34, 1210-1217 (2014).
  36. Emmetiere, F., et al. 18F-labeled-bioorthogonal liposomes for in vivo targeting. Bioconjugate Chemistry. 24, 1784-1789 (2013).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Теги

64
Укрощение Bioorthogonal Обратная электронной Demand Дильса-Альдера циклоприсоединения для Pretargeted ПЭТ
Связаться с нами
Порекомендовать библиотеке

Конфиденциальность

Условия использования

Политики

© 2026 MyJoVE Corporation. Все права защищены.