Методическая статья

Mesenteric лимфатический проток канюлированного крысиной модели: Приложение к оценке кишечных лимфатической транспорта лекарства

28.7K просмотров

⸱

DOI:

10.3791/52389

⸱

6 марта 2015 г.

 ,  ,  ,  , 
1Drug Delivery, Disposition, and Dynamics, Monash Institute of Pharmaceutical Sciences, Monash University (Parkville Campus)

В этой статье

Краткое содержание

Здесь мы описываем технику канюлирования брыжеечного лимфатического протока у крыс, которая позволяет количественно оценить транспортировку липидов и лекарств через лимфатическую систему после доставки через кишечник. Метод может быть адаптирован для оценки концентрации брыжеечной лимфы и/или транспорта жидкости, иммунных клеток, пептидов, белков и липофильных молекул.

Аннотация

Кишечного лимфатическая система играет ключевую роль в жидкости транспорта, поглощения липидов и иммунной функции. Лимфатические течет непосредственно из тонкой кишки с помощью серии лимфатических сосудов и узлов, которые сходятся на верхней брыжеечной лимфатический проток. Канюли в мезентериального лимфатического протока, таким образом, обеспечивает сбор брыжеечных лимфатических течет из кишечника. Брыжеечных лимфатических состоит из клеточной фракции иммунокомпетентных клеток (99% лимфоцитов), водной фракции (жидкости, пептидов и белков, таких как цитокины и гормоны кишечника) и фракции липопротеинов (липидов, липофильных молекул и апо-белков). Таким образом, брыжеечных лимфатических протоков катетеризации модель может быть использована для измерения концентрации и скорости переноса ряда факторов из кишечника через лимфатическую систему. Изменение этих факторов в ответ на различные вызовы (например, диеты, антигены, лекарственные средства), и при болезни (например, воспалительное заболевание кишечника, ВИЧ, диабет) также может бе определяется. Площадь расширяется интерес представляет роль лимфатической транспорта в поглощении перорально липофильных лекарственных средств и пролекарства, которые связывают с кишечными путей поглощения липидов. Здесь мы опишем в деталях, брыжеечных лимфатических протоков канюлированного крысах, которые позволяет оценить скорость и степень липидного и транспорта лекарства через лимфатическую систему в течение нескольких часов, после кишечной доставки. Способ может быть легко адаптирован к измерению других параметров в лимфе. Мы предоставляем подробные описания трудностей, которые могут возникнуть при создании этой сложной хирургический метод, а также репрезентативные данные из неудачных и успешных экспериментов, чтобы обеспечить инструкцию о том, чтобы подтвердить экспериментально успех и интерпретировать полученные данные.

Введение

Лимфатические течет из тонкого кишечника с помощью однонаправленного процесса, происходящего в отдельных млечными, которые содержатся в каждом маленьком кишечных ворсинок 1. Млечными относительно проницаемой для жидкости, макромолекул, клеток и образование лимфы, таким образом, начинается с момента вступления этих факторов в млечными. Начальное лимфатических в млечными затем течет из кишечника через сеть лимфатических микрососудов, сбора (афферентной) лимфатических сосудов, серия брыжеечных лимфатических узлов и в конечном счете после узловой (эфферентных) лимфатических сосудов. В узлах, лимфатических проходит через серию мозговых синусов, где обмен происходит с иммунными клетками-резидентами узла, а также материала, поступающих в узел из крови. Все лимфатических течет из тонкой кишки в конечном итоге сходится в эфферентных превосходит брыжеечных лимфатических протоков и впоследствии цистерны chyli. Цистерны chyli также собирает лимфодренажный хвостового периферических тканей, IntestИнал, печени и поясничного отделов и присоединяется к грудной лимфатический проток вместе с лимфой из средостения и черепных частях тела. Грудной лимфатический проток впадает лимфатическую непосредственно в венозную систему на стыке левой внутренней яремной и подключичной вен. Протокол, описанный здесь, который позволяет сбора лимфы непосредственно из верхней брыжеечной лимфатический проток, таким образом, облегчает анализ различных факторов, проходящих прямо из кишечника в системной (общей) циркуляции через лимфатическую систему кишечника.

Основные физиологические функции, возложенные на желудочно-кишечном лимфатической системы для поддержания баланса жидкости, чтобы облегчить липидов и поглощение липофильный молекул, и, чтобы включить соответствующие иммунные реакции 1. Опухолевые клетки и вирусы распространяются с помощью кишечной лимфатической системы 2-4 и ключевые изменения происходят в лимфатических в ряде воспалительных и метаболических патологий 5-7. Можетnulation брыжеечных лимфатический проток, чтобы собрать лимфы в брыжейки позволяет анализ объемного потока жидкости через кишечную лимфатические сосуды, а также количественное определение уровня концентрации и транспортной различных клеток и молекул. Изменения в концентрации или транзита этих факторов в ответ на различные вызовы (например, диеты, антигены, лекарственные средства) и в моделях болезни (например, колит, ВИЧ, диабет), также может быть оценено. Несмотря на то, что невозможно подробно описать каждый лимфы компонент, который может быть проанализированы и сравнены здесь, брыжеечных лимфатических упрощенно состоит из водного, липидов и клеточных фаз. Компоненты интерес в водной фазе, включают пептиды и белки, такие как антигены или tolerogens 8, иммунных мессенджеров, таких как цитокинов и медиаторов тучных клеток 9 и метаболических медиаторов, таких как инкретинов 10. Клеточный часть пост-узловой брыжеечных лимфатических состоит почти полностью (более 99%) lymphocytES 11. Различные иммунные клетки (дендритные клетки, тучные клетки, и т.д.) ввести предварительно узловые брыжейки лимфатические но остаются в пределах узла 12. Если клетки в афферентной лимфы представляют интерес, можно собрать эти клетки с помощью удаления брыжеечных лимфатических узлов за несколько дней до катетеризации брыжеечной лимфатический проток 12. Таким образом, афферентные и эфферентные лимфатические протоки непосредственно связаны и лимфатических клеток в афферентных лимфатических проходить непосредственно в мезентериального лимфатического протока. Транзита и фенотип различных иммунных клеток, проходящих через кишечные лимфатические сосуды может быть, таким образом исследованы. Возможно, наиболее распространенной причиной привел для сбора брыжеечных лимфатических до настоящего времени, однако, заключается в изучении кишечной обработки, абсорбцию и транспорт пищевых липидов и липофильных молекул 10.

После приема, пищевые жиры перевариваются (например, из триглицерида с жирных кислот и моноглицерида, phospholipid с жирными кислотами и lysophospholipid и сложного эфира холестерина в жирной кислоты и холестерин, и т.д.) и диспергированные в просвете кишечника на мелкие мицеллы и везикулярных структур с помощью добавлением амфифильных из желчи (фосфолипиды, холестерин и соли желчных кислот) и действие ферменты поджелудочной железы 10,13. Отсюда они всасываются в энтероцитов. Доля поглощенных компонентов повторно этерифицируют с образованием триглицеридов, фосфолипидов и эфиров холестерина в пределах поглощающих клеток (энтероцитов). Эти переэтерификацией липиды собраны из комбинации экзогенно внутрь липидных компонентов и эндогенных липидных компонентов из секретируемого желчи, слизистой оболочки липидных бассейнов или кишечной кровоснабжения 13. Отсюда этерифицированные липиды либо храниться в энтероцитов или собраны в кишечных липопротеинов (хиломикроны, липопротеинов очень низкой плотности (VLDL)) вместе с различными апопротеинов и других липофильных молекул ( , например, витамины) 10,13. После выхода из энтероцитов, липопротеины специально транспортируется из кишечника в системный кровоток через лимфатическую систему брыжеечной как кишечные млечными более проницаемыми для их ввода кишечной чем кровеносных капилляров. Доля поглощенных липидных компонентов также транспортируется из кишечника в системный кровоток через кровеносные капилляры и воротной вены, как отдельная система, не липопротеина связанных молекул 14. В целом, однако, воротной вены транспортного маршрута только играть важную роль в поглощении коротких и средней длины цепи липидов.

Сбор брыжеечных лимфатических таким образом, позволяет производить оценку транспортировки липопротеинов и связанных с ними компонентов (липидов, липофильных молекул, апо-белков) из кишечника. В липопротеины могут быть количественно и характеризуется тем преимуществом, что брыжеечные лимфатические липопротеины, в общем, в nascenт состояние, так как они не были широко изменен системных ферментов, таких как липазы липопротеинов 15. Несмотря на то, брыжеечных лимфатических модель канюлируют крыса, возможно, исторически наиболее широко описаны для анализа липидов / липопротеинов транспорта в кишечнике, площадь расширяется интерес представляет роль лимфатической системы в транспорте липофильных лекарственных средств, пролекарства и других ксенобиотиков 13,16 что акцент в модели, описанной здесь. Липофильных лекарственных средств (как правило, те, с журнала P> 5 и растворимости в долгосрочной триглицерида> 50 мг / г, хотя исключения являются очевидными) 17,18 пролекарства 19 и другие ксенобиотики 13,16 могут получить доступ к кишечной лимфатической системы или пассивно или активно интегрируется в кишечная липопротеинов транспортных путей 19.

Таким образом, крысы брыжеечной лимфатических техники катетеризации имеет множество применений. Bollman и др. Впервые описал TechniqUE в иглу брыжеечных лимфатический проток у крыс в 1948 году 20. Так были описаны то количество вариаций на модели. Например, коллекция может произойти, когда крыса анестезии с различными анестетиками 21,22, или в сознательном состоянии, пока сдерживается 15 или свободно перемещаться 23,24. Крысы могут быть введены различные регидратации растворы и другие вещества, такие как липиды и лекарственных форм с различными скоростями в желудок, кишечник или парентерально (обычно 0 - 5 мл / ч) 25. В некоторых исследованиях грудной лимфатический проток, а не брыжеечных лимфатических канал канюли, чтобы оценить транспорт из кишечника через лимфатические сосуды, хотя это может переоценить транзит из тонкой кишки, в зависимости от коэффициента интерес, так как грудной лимфатический проток также получает лимфу от друга Регионы 22,26. Лимфатические модели катетеризации также были описаны в ряде других видов, включая мышей 15,27, мини-пиGS 12, овец 28,29, свиньи 30 и собаки 31. Тем не менее, модель крысы является наиболее широко и последовательно привел. Подробные протоколы для катетеризации брыжеечной лимфатический проток, с последующим сбором лимфы в сознательном 25 или наркоза 22 крыс и мышей 15,27 были опубликованы ранее, и заинтересованный читатель относится к этим протоколам. Этот протокол является первым, чтобы продемонстрировать технику в визуализируется формате.

Лимфатических канюлируют крысах имеет преимущества перед более крупных моделей животных с точки зрения расходов, легкость операции и этических соображений. По сравнению с мышиной модели, брыжеечных лимфатических катетеризации операции также легче у крыс, хотя модель мыши дает более подробные исследования в трансгенных животных 27. Тем не менее, есть некоторые ограничения модели крыс, особенно те, которые связаны с различиями в физиологии, что предел extrapolatионов к другим доклинических и клинических ситуациях. Например, в потоке крыс желчного постоянна и не зависит от приема пищи, тогда как в более высокой пищи или липидов видов стимулировать выделение желчи 32. Это создает проблемы для получения репрезентативных до и после приема пищи среды у крыс, которые отражают то, что видел в более крупных видов и человека. Для исследований доставки лекарств, более крупные виды также могут быть предпочтительными при оценке лимфатической транспорта после введения реалистичного человека лекарственных форм 25. В недавнем исследовании, липидов ставки переноса в брыжеечных лимфатических оказались сопоставимы у разных видов (мыши, крысы, собаки) после введения эквивалентной массы и типа липидов, который обеспечивает некоторую уверенность в экстраполяции транспорта липидов данных разных видов 27. Тем не менее, транспортировка модели липофильный лекарственный препарат, Галофантрин, попавшая в порядке размера животного (например, собака> крыса> мыши). Коэффициент масштабирования может быть, таким образом требуется эксtrapolate лимфатические препарат транспортные данные крысы с другими видами.

Ограничение моделей лимфатических катетеризации, в общем, является то, что пассивное лимфатических коллекции непосредственно из лимфатического протока может изменить лимфы и транспортировки, так как лимфатические сосуды работать против градиента давления, который изменен после того, как сосуд через канюлю 33. Лимфатических катетеризация модель также может быть трудно установить в лабораториях, которые не знакомы с техникой. Альтернативные модели, таким образом, были описаны. Например, транзит факторов через лимфатическую систему кишечника, таких как липопротеины и липофильных молекул, был изучен с помощью косвенного сбора крови. Одной из таких моделей включает сравнение концентрации в крови липидов и / или лекарственных средств после перорального, в присутствии и в отсутствие ингибиторов (например, колхицин, Pluronic L81, циклогексимид) кишечной производства липопротеинов, которые блокируют лимфатической транспорта 34. Преимуществомоделей, которые количественно лимфатической транспорта косвенно через сбора образцов крови является то, что она позволяет некоторую оценку лимфатической транспорта как у человека, инвазивная хирургия не требуется 35. Тем не менее, ингибиторы транспорта лимфатической не являются специфическими и факторы, которые транспортируются через лимфатические сосуды разбавляют и модифицированы в системный кровоток, что затрудняет таких оценок. В пробирке альтернативы также были описаны. Например, Caco-2 клеток или изолированных энтероцитов культуры были использованы для изучения более подробно кишечного секрецию молекул, которые входят в лимфатических 36-38. Продвинутая модель в пробирке, что является более представительным кишечного микроокружения человека также недавно был описан 39. В этой модели лимфатической эндотелиальной слой клеток совместно культивируют с Caco-2 клеток, которые обеспечивает более детальный анализ переноса веществ из кишечника в лимфатическую систему. Тем не менее, в ВИТРО клеточные системы не хватает перетока и передать то есть взаимосвязь с просвета кишечника и основного крови и лимфатической кровоснабжения. В альтернативном подходе, Кассис и др. Установлено, двухканальный (высокоскоростной светлого поля видео и флуоресценции) в системе формирования месте, что позволяет количественные сравнения между судном сжатия, лимфы и люминесцентные концентрации липидов в мезентериальных лимфатических сосудов 33. Преимущество этой модели над вышеупомянутый в пробирке системы является то, что он обеспечивает точное отслеживание прохождения иммунных клеток через лимфатические сосуды. Абсолютные измерения массового липидов (или препарата) транспортом, однако, еще не создана с использованием методов визуализации. В пробирке и в кремнии подходы к специально предсказать степень липофильного транспорта наркотиков с помощью кишечной лимфатической системы также были опубликованы 40-42. Например, экс виво сродство с несколькимиompounds для плазменных хиломикронов коррелирует достаточно хорошо с их лимфатической транспорта в естественных условиях 41. Впоследствии та же группа создана в силикомарганца модели для прогнозирования наркотиков сродство к хиломикронов, основанных на нескольких физико-химических свойств 40. Холм и др. Также установили относительно сложным в силикомарганца модели, чтобы предсказать, напрямую лимфатической транспорта липофильных соединений на основе молекулярных дескрипторов 42. Эти модели могут обеспечить полезный подход для прогнозирования степени лимфатической транспорта неизвестных препаратов. Валидация моделей с широким диапазоном наркотиков и между различными лабораториями, однако, требуется, чтобы подтвердить их точность и воспроизводимость.

Катетеризация брыжеечной лимфатический проток, таким образом, остается единственное средство непосредственно ознакомиться с содержимым лимфодренажный тонкую кишку, и транзитной ставке в сложный комплекс факторов (клеток, белков,пептиды, липиды, лекарственные препараты) в лимфе в в естественных условиях ситуации. В этом мы описываем протокол для катетеризации брыжеечных лимфатических протоков и сонной артерии, что позволяет сбора брыжеечных лимфатических и системной крови из анестезированных крыс. Типичные данные показывают, как модель может быть использован для изучения липидов и транспорта лекарства из кишечника через лимфатическую систему брыжеечной. Это последовало обсуждение трудностей, которые могут возникнуть при создании модели и руководство по устранению неисправностей. После создания модели является мощным инструментом исследования кишечника лимфатической транспорта.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

Исследования, описанные в этой рукописи были утверждены местным комитетом по этике животных и были проведены в соответствии с Австралии и Новой Зеландии Совет по уходу за животными в руководящих научных исследований и преподавания. Перед началом любой процедуры животное, убедитесь, что надлежащее разрешение достигается за счет местного учреждения / организации. Как и во всех хирургических операций на животных, убедитесь, что операция проводится специально обученным операторам, в асептических условиях и что анестетики, анальгетики и антибиотики вводят, когда требуется обеспечить этическую и успешный исход.

1. Подготовка день до хирургической процедуры

  1. Быстрое крысы ночь до операции, если требуется. Убедитесь, что крыса имеет свободный доступ к воде.
  2. Приготовления растворов для введения крысе.
    1. Готовят раствор регидратации, такие как стерильный физиологический раствор или раствор Рингера.
    2. Подготовкаэстетические решения по мере необходимости. Анестетик используют в экспериментах, описанных здесь, состоит из "коктейль" 1 получают смешиванием 1,9 мл кетамина 100 мг / мл, 0,5 мл ксилазина 100 мг / мл, 0,2 мл ацепромазин 10 мг / мл и 2,5 мл физиологического раствора и " Коктейль 2 ", состоящий из 1 мл кетамина 100 мг / мл и 0,1 мл ацепромазин 10 мг / мл. Примечание: Ингаляционный изофлуран или севофлурана может быть предпочтительным, поскольку это может обеспечить хирургического плоскости анестезии в течение более длительного периода времени.
    3. При желании приготовить композицию, содержащую лекарственное средство, например, липидной эмульсии. Выполните соответствующие исследования стабильности для обеспечения стабильности композиции в течение срока хранения и управления.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Истинная природа разработке и препарата для введения будет изменяться в зависимости от каждого исследования в целях лимфатических препарат транспортных исследований чаще всего для оценки эффективности лимфатической транспорта наркотиков в зависимости от рецептуры и наркотиков Administered.
      1. Препарат используют в представительных экспериментов на фиг.4 и 5, получают здесь, как описано выше 43. Вкратце, включают 14 C олеиновой кислоты (2-5 мкКи) и Галофантрин (200 мкг) в 40 мг олеиновой кислоты до дисперсии в 5,6 мл водной фазы, состоящей из 5 мМ таурохолата натри в фосфатном буферном физиологическом растворе (рН 6,9).
      2. Для композиций, содержащих 2-моноолеина, добавить 7,1 мг 2-моноолеина вместе с другими компонентами, в водной фазе, в то же время, что и олеиновой кислоты фазы, содержащей Галофантрин. Подготовка препаратов, содержащих 2-моноолеина непосредственно перед введением в крысы, как 2-моноолеин относительно нестабильными и изомеризуется 1-моноолеина.
      3. Впоследствии эмульсию композиций ультразвуком в течение 2 мин при комнатной температуре.
        ПРИМЕЧАНИЕ: Как было описано ранее 43, контролировать стабильность составов по I) визуальный осмотр EMULSion в поляризованном свете, чтобы гарантировать, что эмульсия не фазу отделяли, II) анализ размеров частиц сразу после приготовления и после дозирования с использованием динамического рассеяния света, чтобы обеспечить индикацию любых фазовых изменений и / или разделения, и в) анализ концентраций Галофантрин использованием подтверждено ВЭЖХ.
  3. Подготовка антикоагулянта раствора, содержащего 10 мг / мл ЭДТА в стерильной воде или 10 МЕ / мл гепарина в солевом растворе для промывки лимфы канюли. Также подготовьте анти-коагулянта раствор, содержащий 2,5 - 10 МЕ / мл гепарина в солевом растворе, чтобы избавиться канюли сонной артерии.
  4. Подготовка полиэтиленовых канюль для введения в брыжеечной лимфатический проток (0,8 мм OD, 0,5 мм внутренний диаметр), сонной артерии (0,96 мм OD, 0,58 мм ID или 0,8 мм OD, 0,5 мм внутренний диаметр) и двенадцатиперстной кишки (0,96 мм OD, 0,58 мм ID )
    1. Разрежьте канюли до требуемой длины (обычно 25 - 30 см для сонной артерии и двенадцатиперстной канюли и 10 - 15 см для лимфатической Каннула) и поместить скос на кончике канюли с использованием стерильного хирургического ножа (рисунок 1).
      Примечание: Это повышает удобство введения канюли и снижает частоту канюли блокировки после введения.
    2. Поставьте J формы опорную точку в интрадуоденального канюли с помощью цикла малую часть канюли обратно на себя, нагревая его с легкой или горячей пластины, а затем раскрой (рис 1).
  5. Прикрепите лимфы канюли 25 G иглы и шприца, содержащего решение анти-коагулянта (полученного на стадии 1.3). Заполните лимфы канюли с анти-раствора коагулянта и оставить решение в канюли O / N, чтобы уменьшить частоту образования тромба в лимфатических канюли во время лимфатического коллекции.
  6. Подготовка трубы для лимфы и образец крови коллекции. Pre-весят трубы лимфы сбора, этикетки трубы для лимфы и образец крови коллекции и добавить антикоагулянт решение. Добавьте достаточное количество антикоагулянта Solutиона для достижения конечной концентрации 1 мг / мл EDTA в стерильной воде или 10 - 20 МЕ / мл гепарина в собранной лимфы или крови.

2. Подготовка перед его началом хирургической процедуры

  1. Проверьте все канюли с помощью промывки стерильным физиологическим раствором или анти-раствора коагулянта для того, чтобы они патент.
  2. Подготовка крысу для хирургической процедуры.
    ПРИМЕЧАНИЕ: брыжеечных лимфатических протоков виднее у крыс, которые ели или вводили дозу масла в качестве брыжеечной лимфатических становится молочно-непрозрачным с высокой липидной нагрузки. Некоторые операторы, особенно тех, кто новичок в хирургии, поэтому легче иглу брыжеечных лимфатический проток, когда крысы предварительно вводили масла (около 0,1 - 1 мл), такие как оливковое или соевое масло 0,5 - 2 ч до начала операции , Тем не менее, предварительно дозирования масла влияет на лимфатическую транспорта липидов, липофильных лекарственных средств и других факторов, в лимфе, так что он не может быть идеальным, чтобы перед введением дозы маслав зависимости от цели эксперимента.
    1. Обезболить крысу всей операции и периода выборки сбора.
      1. Например, инициировать анестезии с помощью подкожной инъекции 1,5 мл / кг коктейль I (с шага 1.2.2) в складки кожи на задней части шеи крыс с использованием 1 мл шприц, присоединенный к игле 25 г. Поддержание анестезии с помощью внутрибрюшинной инъекции 0,44 мл / кг коктейль 2 (из стадии 1.2.2) примерно каждый час в соответствии с требованиями, с использованием 1 мл шприц, присоединенный к игле 25 г.
      2. Перед началом операции убедитесь, что глубина анестезии достаточна, наблюдая частоту дыхания, движение усов, мышечный тонус и ответов на стимулы, такие как защемления стопы. Администрирование дополнительных анестезии по мере необходимости.
    2. Бритье мех от хирургических регионах, в том числе на правую сторону живота для лимфы и двенадцатиперстной кишки катетеризации и шею и левой ключицы регион для канюли сонной артерииния.
    3. Очистите хирургических регионы асептических помощью повидин-раствор йода или раствором хлоргексидина и 70% этанола скраб. Повторите это упражнение 3 раза для каждой области, заканчивая окончательной чистки с 70% этанола.
  3. Место животное в спинной отдохновение на чистом листе выше хирургического площадку с подогревом (37 ° C).

3. катетеризации брыжеечных лимфатический проток

  1. Место животное с его правой стороны, обращенной к оператору. Выполните операцию с помощью или без помощи хирургического микроскопа, как это требуется.
  2. Откройте верхний слой брюшной мышцы стене прямо 4 см разрез, проходящий от средней линии (xyphoid процесса) на правый фланг около 2 см ниже грудной клетки (маржи реберной) с помощью стерильного скальпеля лезвие (рис 2б).
  3. Откройте оставшиеся слои брюшной мышцы стенки от 4 - 5 мм латеральнее средней линии на правый фланг с мелкой паройхирургических ножниц (рис 2б).
  4. Уберите тонкий кишечник под левой брюшной мышцы стены и держать его на месте с помощью 2 - 3 части стерильной марли, насыщенные нормального физиологического раствора.
  5. Мост крысу за 10 мл пластмассовый шприц расположен горизонтально под спину крысы на уровне правой почки, чтобы облегчить визуализацию брыжеечной лимфатический проток.
  6. Расположить брыжеечной лимфатический проток: сосуд приблизительно 0,5 - 1 мм в диаметре, которое перпендикулярно правой почки и сразу ростральной и параллельно брыжеечной артерии (пульсирующего темно-красном кровеносного сосуда, см фиг.2с).
    Примечание: В не голодавших или нефть предварительно дозированных крыс судно белый, непрозрачной и легче визуализировать, чем у голодных крыс, у которых это вполне прозрачным.
  7. Осмотрите область сразу хвостовой с большим брыжеечной лимфатический проток и брыжеечной артерии, чтобы определить, во-вторых, меньше аксессуар лимфатических протоковприсутствует. Если присутствует, блокировать поток лимфы через канал путем разделения канала и окклюзии суперклеем, или связывание шов вокруг канала, чтобы гарантировать, что весь объем лимфы, оттекающей от кишечника собирают из верхней брыжеечной лимфатический проток.
  8. Проход пара прямых щипцов через пери-почечной жировой слой на нижнем крае правой почки, и через слои соединительной ткани непосредственно под полой вены, в направлении, параллельном верхней брыжеечной лимфатический проток.
  9. Использование кончик пинцетом завладеть лимфатической канюли и извлеките его через пери-за почечной жировая постели с одним концом в непосредственной близости от брыжейки лимфатический проток и другие exteriorised от животного на уровне правой почки.
  10. Изолировать брыжеечных лимфатических протока с вышележащих слоев соединительной и жировой ткани тупым. Будьте осторожны, не прокалывать и не повредить лимфатический проток.
  11. После выделения лимфатический проток, сделать небольшой холе в лимфатический проток либо с микро-ножницы, острым наконечником щипцов ювелирного или иглы 25 G. Будьте осторожны, не полностью разорвать сосуд.
  12. Убедитесь, что лимфа канюли полностью заполнен анти-коагулянта раствора (с помощью шприца и 25 г иглы) без воздушных зазоров. Вставка лимфатических канюли приблизительно 2 - 4 мм внутрь от мезентериального лимфатического протока через небольшое отверстие с помощью небольшого пинцета.
  13. Соблюдайте лимфы канюли в течение нескольких минут. Заметим, постепенное поток лимфы кишечника от свободного конца собирающей канюли, если катетеризации успешно. Если катетеризация не удалась, повторите шаги 3,8 - 3,12.
  14. Если катетеризации успешно, обеспечить канюлю, поместив небольшую каплю ветеринарной клея на входное отверстие в лимфатический проток. Будьте осторожны, не закупоривать сосуд с помощью приложения избыточного ветеринарной клея.
  15. Несмотря на то, ждет ветеринарная клей, чтобы установить, obserве поток лимфы в течение нескольких минут, чтобы гарантировать, что эта процедура была успешной катетеризации. После того, как уверены в успехе катетеризации, удалить марлевые куски, которые были размещены в брюшной полости тщательно и поместите тонкую кишку в исходное положение.
  16. Поместите лимфатических пробирку, содержащую антикоагулянт (см шаг 1,6) в конце канюли, чтобы собрать свободно текучего лимфу.
  17. Далее, иглу в двенадцатиперстную кишку для инфузии регидратации растворов и / или составов.

4. катетеризация двенадцатиперстной кишки

  1. Приложить канюли в двенадцатиперстную кишку с помощью шприца (например, 10 мл), заполненной раствором регидратации.
  2. Определить в двенадцатиперстную кишку, как ярко-розового (с более кровеносных сосудов) части тонкой кишки, который при нежной вниз, потянув показывает желудок.
  3. Сделайте небольшое отверстие прокола в двенадцатиперстной кишке около 2 см ниже стыке желудка и двенадцатиперстной кишки (привратника), используястерильный 23 G иглы.
  4. Вставьте J образный закрепленный конец двенадцатиперстной кишки канюли через отверстие прокола. Безопасный в месте с каплей цианакрилатного клея.
  5. Начать гидратации крысы путем присоединения канюли к регидратации шприца, загруженной в инфузионного насоса. По данным литературы ставки регидратации в диапазоне от 0,5 - 3 мл / ч 15,25.
  6. После завершения лимфы и двенадцатиперстной кишки катетеризации, закрыть разрез в брюшной мышечной стенке с швами. Затем закройте разрез кожи с применением несколько капель ткани клеем (цианакрилатного) вдоль боковой разрез и зажимая кожу на обеих сторонах надреза вместе.

5. катетеризации сонной артерии

Катетеризации сонной артерии может быть выполнена до или после катетеризации брыжеечной лимфатический проток. Некоторые операторы предпочитают вводить иглу в сонную артерию до cannulating в лимфатический проток так, чтобы уменьшить POtentially выбивании лимфы канюли при перемещении животного.

  1. Поставьте отметку на канюли сонной артерии 2,5 см от конической оконечности определить часть трубы вставить в артерии. Подключите другой конец канюли (т.е. без фаски) к 23 или 25 G иглой в шприц с анти-коагулянта раствора и заполнения канюли с анти-коагулянта решение убедившись, что нет воздушных зазоров нет.
  2. Для облегчения катетеризации, место наркозом крыса в спинной лежачее положение с шеей растягивается и головы указывая в сторону оператора. Обратите внимание, что некоторые операторы предпочитают выполнять эту технику с хвоста крысы, указывая в сторону оператора.
  3. Поместите 1 - 1,5 см продольный разрез через слой кожи выше в левой части трахеи в сагиттальной плоскости.
  4. Проанализируйте подкожной соединительной ткани, используя тупым кончиком пинцет, чтобы разоблачить основные парные мышцы шеи.
  5. Уберите мышц шеи тO показать левую сонную артерию (расположенный ~ 1 см ниже поверхности кожи и пульсации). Очистите лежащего соединительной ткани с артерии тупым.
  6. Изолировать ~ 1 см раздел артерии тщательно с использованием тупых щипцы ткани, стараясь не повредить прилегающие блуждающего нерва трек нерва. Выполните это путем открытия и закрытия тупым кончиком пинцета вертикально по обе стороны артерии, чтобы освободить ее от окружающей ткани и блуждающего нерва.
  7. Использование тонких наконечников щипцов, нити два шелковых швов под сонной артерии и поместить их в конце каждого раздела изолированной артерии. Галстук шва ближе к оператору и дальше всего от крыс сердца и ключицы (рис 3а).
  8. Окклюзии кровотока через артерии, поместив пару прямых тонкий наконечник щипцов под артерии (фиг.3В).
  9. Использование тонких ножниц наконечник радужной оболочки глаза, положите небольшой надрез на верхней поверхности артерии (около 1/3 извниз от верхней части изолированной области). Подавить любое пролитой крови на поверхности артерии с гепаринизированной физиологического раствора и осторожно протрите, используя ватные палочки.
  10. Вставьте кончик канюли в артерию с парой изогнутых наконечников щипцов. После введения, удаления прямой тонкий наконечник щипцов окклюзии кровотока и продвигать канюлю 2,5 см в артерию с помощью двух пар щипцов, один держать канюлю внутри артерии, чтобы остановить кровь от утечки обратно, а другой, чтобы вставить канюли.
  11. Используйте зажим небольшой артерии провести канюли внутри артерии и удалить прямые тонкий наконечник щипцов, которые были размещены ниже артерии в шаге от 5,8 до окклюзии кровотока.
  12. Подтверждение проходимости канюли путем введения антикоагулянта раствора в канюлю и отступая небольшое количество крови (фиг.3С). Затем промойте канюли с антикоагулянтами раствора и уплотнения конец с помощью пламени зажигалки или канюли пробку.
  13. Свяжите йе канюли в месте с двумя швами, помещенных под артерии в шаге 5.8.
  14. Снимите зажим артерии и закрепите третий шов вокруг артерии и канюли. Закройте шею раны со швами.

6. послеоперационном периоде и формулирование Настой

  1. Продолжать поддерживать крысу под наркозом и нагретой подушки.
  2. Увлажняет крысу через вливание раствора регидратации в двенадцатиперстную кишку, по меньшей мере, 0,5 ч после завершения в cannulations. Обратите внимание на уменьшение расхода лимфы (~ 0,1 - 0,5 мл / ч) в течение первоначального периода после пункции и вскоре увеличится до постоянной линией (0,4 - 2,5 мл / ч в зависимости от скорости регидратации).
  3. После периода восстановления, настоять формулировку интерес (содержащий липиды, наркотики и т.д.) в двенадцатиперстную кишку через канюли. При желании, использовать инфузионного насоса для регулирования расхода препарата. ПРИМЕЧАНИЕ: В протокол, описанный здесь животные остаются anaesthetised в течение операции и лимфатических сбора периода и эвтаназии под наркозом, так что дополнительное обезболивание не требуется. Если протокол изменяется, и животные имеют возможность прийти в сознание, то потребуется соответствующая анестезия и послеоперационный уход.
  4. По завершении разработки инфузии продолжают увлажняет крысу со скоростью 1,5-3 мл / ч с физиологическим раствором в двенадцатиперстную кишку, чтобы предотвратить обезвоживание.
  5. Продолжайте держать крысу на 37с с подогревом хирургического площадку для поддержания температуры (в соответствии с шагом 2,3), экспресс мочи из мочевого пузыря с помощью мягкого вниз нажатием на нижнюю часть живота по мере необходимости и повторно глазная мазь каждый час (как при шаге 2.2. 3). Регулярные изменения положение тела рекомендуется, если животное очнуться после процедуры.

7. Сбор лимфатических и образцы крови для определения липидного и наркотиков поглощение

  1. Сбор лимфы постоянно вПробирки, содержащие антикоагулянт. Изменить трубки на требуемом промежутки времени (например, ежечасно).
  2. Соберите образцы крови в точках заданного времени.
    1. Закрывают приток крови через канюлю посредством изгиба канюли назад примерно 2 см от запечатанного конца. Распечатайте канюли, отрезав запечатанный конец или удаления канюли пробку.
    2. Использование пустой шприц, снять гепарином солевой раствор из канюли, пока кровь не заполнит всю канюли.
    3. Использование новой пустой шприц, вывести требуемый объем крови и поместить в пробирку, содержащую антикоагулянт.
    4. С помощью первого шприца, замените крови, взятой перед отбором проб, чтобы уменьшить ненужные потери крови. Перед инъекцией, Флик шприца, удерживая его в вертикальном положении для того, чтобы пузырьки воздуха не ввести канюлю.
    5. С помощью шприца, заменить объем крови удалена от крыс с анти-коагулянта раствора. Убедитесь, что нет остатков крови не видно в канюле как оставшаяся может свернутьсяи блок канюли.
    6. Bend канюли примерно 2 см от негерметичной конце блокировать приток крови и удалить шприц. Использование пламя зажигалки или канюли вилку, запечатать канюли.
  3. По завершении крови и лимфы из коллекции крысы, эвтаназии крысу с помощью внутрибрюшинного введения> 100 мг / кг пентобарбитона натри.
  4. Определить скорость потока лимфы путем измерения массы лимфы, собранной в течение каждого периода времени.
  5. Измерение концентрации лекарственного средства и липида в крови, лимфы и с использованием, например, ВЭЖХ, ВЭЖХ-МС или с использованием коммерческих наборов, чтобы оценить липидов и эффективность абсорбции лекарственного средства.
  6. Рассчитать массоперенос препарата и липидов в лимфу из продукта измеренных концентраций и объема лимфы, собранных.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

Результаты типичного эксперимента для количественного определения совокупный объем и скорость липидов и транспорта лекарства через лимфатическую систему кишечника следующей поставки с использованием брыжеечных лимфатических модель катетеризации показаны на рисунке 4 и на фиг.5. В этом эксперименте, 200 мкг модели липофильных Препарат Галофантрин вводили в двенадцатиперстную кишку крыс в течение 2 ч в композиции, содержащей 40 мг олеиновой кислоты (в том числе 2 - 5 мкКи 14 C-...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

Крыса брыжеечной лимфатических катетеризация модель позволяет прямое количественное определение концентрации и скорости переноса различных клеток и молекул (таких как липиды и наркотиков) из кишечника в лимфу и изменений в них, которые происходят в ответ на вызов различных веществ (диета , антиген, лекарственные средства, составы и т.п.) 10,27 и болезнь (рак, вирусы, колит, резистентность к инсулину, и т.д.) 5-7. Компоненты собраны в лимфе и могут быть дополнительно использованы в...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

Авторам нечего раскрывать.

Благодарности

Выражаем благодарность за финансирование от Австралийского исследовательского совета (ARC) и Национального совета по здравоохранению и медицинским исследованиям (NHMRC).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
Стерильный физиологический растворBaxter для медицинского обслуживанияAHB 1307Можно использовать любую марку. Пример здесь Baxter 100 мл солевые пакетики, коробка 50
70 % этанола в водеЛюбаямарка может быть использована
Раствор хлоргексидина глюконата (Microshield 4)Livingstone InternationalJJ60243LМожно использовать любую марку. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search
=JJ60243L
Раствор бетадинаLivingstone InternationalBU0510Можно использовать любую марку. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search<чел/> BU0510
Подвздошная кость Кетамил (Кетамин 100 мг/мл)ПРОВЕТ ВИКТОРИЯ КЕТА I 1http://www.provet.com.au/
Подвздошный ксилазил (Ксилазин 100 мг/мл)ПРОВЕТ ВИКТОРИЯ TRO-3828http://www.provet.com.au/
ACP 10 для инъекций (Ацепромазин 10 мг/мл)PROVET VICTORIA ВТГ-DACP010020http://www.provet.com.au/
Пентобарбитал натрияПРОВЕТ ВИКТОРИЯ 24529Можно использовать любую марку. Пример здесь - Lethabarb® 325 мг/мл пентобарбитала натрия, Virbac Animal Health. http://www.provet.com.au
Гепарин (35000I.U. в 35 мл)Sigma Pharmaceuticals337220http://sigmaco.com.au/
Этилендиаминтетрауксусная кислота (ЭДТА) дигидрат солинатрия Sigma-AldrichE1644Можно использовать любую марку. В качестве примера можно привести динатриевую соль ЭДТА от Sigma.
Полиэтиленовая (ПЭ) канюля наружный диаметр 0,96 мм x внутренний диаметр 0,58 ммУдлинители микротрубокPE8050Можно использовать любую марку. Примером здесь является полиэтиленовая трубка 0,96 х 0,58 мм, 30 м
Полиэтиленовая (ПЭ) канюля наружный диаметр 0,8 мм x внутренний диаметр 0,5 ммУдлинители микротрубкиPE9658Можно использовать любую марку. Пример здесь - полиэтиленовая трубка 0,8 x0,5 мм, 30 м
ЛинейкаЛюбаяМожно использовать любую марку
МаркерыЛюбаяЛюбая марка может быть использована
ЗажигалкаЛюбаяЛюбая марка может быть использована
Ветеринарный клейЛюбаяЛюбая марка может быть использована
игла 23 калибраLivingstone InternationalDN23GX0.75LVМожно использовать любую марку. Примером здесь является одноразовая игла Livingstone, стерильная, 23GX0.75 дюйма, 100 / КОРОБКА. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=
6& search=DN23GX0.75LV
Иглы 25 калибраLivingstone InternationalDN25GX1.0LVМожно использовать любую марку. Примером здесь является одноразовая игла Livingstone, стерильная, 25GX1.0 дюйма, 100/BOX. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search=
DN25GX1.0LV
1 мл шприцLivingstone InternationalT3SS01TAможно использовать любую марку. Примером здесь является шприц Terumo 1 мл Slip Tuberculin 100/Box. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search<чел/> =T3SS01TA
Шприц 10 млLivingstone InternationalT3SS10SAМожно использовать любую марку. Примером здесь является шприц Terumo 10 мл Slip 100/Box. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search<чел/> =T3SS10SA
Марлевые тампоныLivingstone InternationalGSC075Можно использовать любую марку и нарезать до нужного размера. Пример здесь – марлевые тампоны с ватным наполнителем 7,5х7,5 см, 8 слоев. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search<чел/> =GSC075
Ватные палочкиLivingstone InternationalCTAST075DPможно использовать любую марку. В качестве примера можно привести хлопчатобумажный аппликатор Livingstone пластиковый с двойным наконечником. 75ММ. 100/ШТ. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search<бр/> =CTAST075DP
ГрелкаRatekWT1Можно использовать любую марку, которая поддерживает температуру 37C. В качестве примера здесь можно привести поднос для подогрева Ratek.
Хирургический светHarvard Apparatus72-0215 с 72-0267Можно использовать любую марку. В качестве примера можно привести Гарвардский аппарат V-Lux 1000 Cold Light Source with Bifurcated Gooseneck Light Guide, черный, диаметр волокна 4,7 мм (каждый рычаг). http://www.harvardapparatus.com/webapp/wcs/stores/servlet/product_11051_10001_50601_<чел/> -1_HAI_ProductDetail и  http://www.harvardapparatus.com/webapp/wcs/stores/servlet/product_11051_10001_35487_<чел/> -1_HAI_ProductDetail___
Хирургический микроскопZeiss495005-0014-000Можно использовать любую марку. В качестве примера можно привести стереомикроскоп Zeiss Stemi 2000-C с подставкой S Double Spot и светодиодом KL 300. https://www.micro-shop.zeiss.com/?l=en&p=us&f=e&i=10143
Шелковый шовный материалLivingstone InternationalDTSK163019F4любой марки можно использовать. Пример здесь  

3/8 круга обратный разрез шелковый шовный материал 3/0 нитка 19мм. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search
=DTSK163019F4
Лезвия скальпеляFine Science Tools (FST)10020-00Можно использовать любую марку. Примером здесь является лезвие скальпеля FST #20. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=191
Рукоятка скальпеляFine Science Tools (FST)10004-13Можно использовать любую марку. Примером здесь является ручка скальпеля FST #4. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=298&CategoryId=51
1 х Малые хирургические ножницыFine Science Tools (FST)14060-09Можно использовать любую марку. Пример здесь - FST Fine Scissors, 9 см с режущей кромкой 21 мм, острые, прямые. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=40&CategoryId=17
2 х Щипцы с зазубренным изогнутым наконечникомFine Science Tools (FST)11001-13Можно использовать любую марку. Примером здесь являются щипцы стандартного шаблона FST 13 см с изогнутым наконечником 2,8x1,4 мм. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=405&CategoryId=32
1 х ножницы для иридэктомииFine Science Tools (FST)15000-08Можно использовать любую марку. Пример здесь - пружинные ножницы FST Vannas - режущая кромка 2,5 мм, прямые. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=17&CategoryId=16 
1 х Щипцы с прямым зубчатым наконечникомFine Science Tools (FST)11650-10Можно использовать любую марку. В качестве примера можно привести FST Graefe 10 см прямой с зубчатым наконечником 1 x 0,99 мм. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=390&CategoryId=32
1 х Щипцы с гладким, острым прямым тонким наконечникомFine Science Tools (FST)11251-10Можно использовать любую марку. В качестве примера можно привести щипцы FST Dumont #5 прямые 11 см с наконечником 0,08 x 0,04 мм. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=335&CategoryId=29
1 х Щипцы с гладкими тонкими изогнутыми щипцамиFine Science Tools (FST)11063-07Можно использовать любую марку. Примером здесь является FST Delicate Щипцы 9 см с гладким наконечником 0,4 х 0,3 мм. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=360
2 х гемостатикаFine Science Tools (FST)13010-12Можно использовать любую марку. Не все операторы используют гемостатики. Примером являются гемостатики FST 12 см Micro-Mosquito с зубчатым наконечником длиной 20 мм и шириной 1,3 мм. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=377&CategoryId=33
1 х шовный иглодержательFine Science Tools (FST)12001-13Можно использовать любую марку. Примером здесь является иглодержатель FST 13 см Hasley с наконечником длиной 16 мм и шириной 1,9 мм. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=254&CategoryId=70
1 х Артериальный зажимFine Science Tools (FST)18050-28Можно использовать любую марку. В качестве примера можно привести прямую конструкцию FST Bulldog Serrefines длиной 28 мм, размером губки 9x1,6 мм со средним зажимным прессом. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=270&CategoryId=82
Олеиновая кислотаSigma AldrichO1008При необходимости можно использовать любую марку. Примером здесь является 99% чистая олеиновая кислота. http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sial/o1008?lang=en®ion=AU
14С-олеиновая кислотаPerkin NEC317050UC Можно использовать любую марку. В качестве примера можно привести олеиновую кислоту, [1-14C]-, 50&микро; Ci (1,85 МБк). http://www.perkinelmer.com/Catalog/Product/ID/NEC317050UC
Таурохолат натрияSigma AldrichT4009Можно использовать любую марку. Примером здесь является таурохолевая кислота гидрат натриевой соли ≥ 95% (TLC). http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/t4009?lang=en®ion=AU
ГалофантринGlaxo Smith KlineГалофантрин был любезно предоставлен в подарок от Glaxo Smith Kline
Sodium phosphate одноосновнойSigma Aldrich71507Можно использовать любую марку. В качестве примера можно привести моноосновной моногидрат фосфата натрия, BioXtra, для молекулярной биологии, >99,5%. http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/71643?lang=en®ion=AU
Натрия фосфат двухосновнойSigma Aldrich71643Можно использовать любую марку. В качестве примера можно привести диосновной дигидрат фосфата натрия, BioUltra, для молекулярной биологии, >99%. http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/71507?lang=en®ion=AU

Ссылки

  1. Barrowman, J. A., Tso, P. Gastrointestinal lymphatics. Comprehensive Physiology. , 1733-1777 (2010).
  2. Karaman, S., Detmar, M. Mechanisms of lymphatic metastasis. J Clin Invest. 124 (3), 922-928 (2014).
  3. Mossel, E. C., Ramig, R. F. A lymphatic mechanism of rotavirus extraintestinal spread in the neonatal mouse. J Virol. 77 (22), 12352-12356 (2003).
  4. Pantaleo, G., et al. Hiv-Infection Is Active and Progressive in Lymphoid-Tissue during the Clinically Latent Stage of Disease. Nature. 362 (6418), 355-358 (1993).
  5. Chakraborty, S., Zawieja, S., Wang, W., Zawieja, D. C., Muthuchamy, M. Lymphatic system: a vital link between metabolic syndrome and inflammation. Annals of the New York Academy of Sciences. 1207, R94-R102 (2010).
  6. Dixon, J. B. Lymphatic lipid transport: sewer or subway. Trends Endocrinol Metab. 21 (8), 480-487 (2010).
  7. Weid, P. -Y., Rehal, S., Ferraz, J. G. Role of the lymphatic system in the pathogenesis of Crohn's disease. Current Opinion in Gastroenterology. 27 (4), 335-341 (2011).
  8. Wang, Y., et al. Chylomicrons promote intestinal absorption and systemic dissemination of dietary antigen (ovalbumin) in mice. PloS one. 4 (12), e8442(2009).
  9. Ji, Y., et al. Activation of rat intestinal mucosal mast cells by fat absorption. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 302 (11), G1292-G1300 (2012).
  10. Kohan, A., Yoder, S., Tso, P. Lymphatics in intestinal transport of nutrients and gastrointestinal hormones. Ann N Y Acad Sci. 1207, Suppl 1. E44-E51 (2010).
  11. Trevaskis, N. L., Charman, W. N., Porter, C. J. Targeted drug delivery to lymphocytes: a route to site-specific immunomodulation. Mol Pharm. 7 (6), 2297-2309 (2010).
  12. Rothkotter, H. J., Huber, T., Barman, N. N., Pabst, R. Lymphoid cells in afferent and efferent intestinal lymph: lymphocyte subpopulations and cell migration. Clin Exp Immunol. 92 (2), 317-322 (1993).
  13. Trevaskis, N. L., Charman, W. N., Porter, C. J. Lipid-based delivery systems and intestinal lymphatic drug transport: a mechanistic update. Adv Drug Deliv Rev. 60 (6), 702-716 (2008).
  14. Mansbach, C. M., Dowell, R. F., Pritchett, D. Portal transport of absorbed lipids in rats. Am J Physiol. 261 (3 Pt 1), G530-G538 (1991).
  15. Kohan, A. B., Howles, P. N., Tso, P. Methods for studying rodent intestinal lipoprotein production and metabolism. Curr Protoc Mouse Biol. 2, 219-230 (2012).
  16. Porter, C. J., Trevaskis, N. L., Charman, W. N. Lipids and lipid-based formulations: optimizing the oral delivery of lipophilic drugs. Nat Rev Drug Discov. 6 (3), 231-248 (2007).
  17. Trevaskis, N. L., et al. The role of the intestinal lymphatics in the absorption of two highly lipophilic cholesterol ester transfer protein inhibitors (CP524,515 and CP532,623). Pharm Res. 27 (5), 878-893 (2010).
  18. Choo, E. F., et al. The Role of Lymphatic Transport on the. Systemic Bioavailability of the Bcl-2 Protein Family Inhibitors Navitoclax (ABT-263) and ABT-199. Drug Metabolism and Disposition. 42 (2), 207-212 (2014).
  19. Han, S., et al. Targeted delivery of a model immunomodulator to the lymphatic system: comparison of alkyl ester versus triglyceride mimetic lipid prodrug strategies. J Control Release. 177, 1-10 (2014).
  20. Bollman, J. L., Cain, J. C., Grindlay, J. H. Techniques for the collection of lymph from the liver, small intestine, or thoracic duct of the rat. J Lab Clin Med. 33 (10), 1349-1352 (1948).
  21. Porter, C. J., Charman, S. A., Charman, W. N. Lymphatic transport of halofantrine in the triple-cannulated anesthetized rat model: effect of lipid vehicle dispersion. J Pharm Sci. 85 (4), 351-356 (1996).
  22. Boyd, M., Risovic, V., Jull, P., Choo, E., Wasan, K. M. A stepwise surgical procedure to investigate the lymphatic transport of lipid-based oral drug formulations: Cannulation of the mesenteric and thoracic lymph ducts within the rat. Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 49 (2), 115-120 (2004).
  23. Porter, C. J., Charman, S. A., Humberstone, A. J., Charman, W. N. Lymphatic transport of halofantrine in the conscious rat when administered as either the free base or the hydrochloride salt: effect of lipid class and lipid vehicle dispersion. J Pharm Sci. 85 (4), 357-361 (1996).
  24. Caliph, S. M., Charman, W. N., Porter, C. J. Effect of short-, medium-, and long-chain fatty acid-based vehicles on the absolute oral bioavailability and intestinal lymphatic transport of halofantrine and assessment of mass balance in lymph-cannulated and non-cannulated rats. J Pharm Sci. 89 (8), 1073-1084 (2000).
  25. Edwards, G. A., Porter, C. J., Caliph, S. M., Khoo, S. M., Charman, W. N. Animal models for the study of intestinal lymphatic drug transport. Adv Drug Deliv Rev. 50 (1-2), 45-60 (2001).
  26. Noguchi, T., Charman, W. N. A., Stella, V. J. Lymphatic Appearance of Ddt in Thoracic or Mesenteric Lymph Duct Cannulated Rats. International Journal of Pharmaceutics. 24 (2-3), 185-192 (1985).
  27. Trevaskis, N. L., et al. A mouse model to evaluate the impact of species, sex, and lipid load on lymphatic drug transport. Pharm Res. 30 (12), 3254-3270 (2013).
  28. Kota, J., et al. Lymphatic absorption of subcutaneously administered proteins: influence of different injection sites on the absorption of darbepoetin alfa using a sheep model. Drug Metab Dispos. 35 (12), 2211-2217 (2007).
  29. McHale, N. G., Adair, T. H. Reflex modulation of lymphatic pumping in sheep. Circ Res. 64 (6), 1165-1171 (1989).
  30. White, D. G., Story, M. J., Barnwell, S. G. An Experimental Animal-Model for Studying the Effects of a Novel Lymphatic Drug Delivery System for Propranolol. International Journal of Pharmaceutics. 69 (2), 169-174 (1991).
  31. Khoo, S. M., Edwards, G. A., Porter, C. J., Charman, W. N. A conscious dog model for assessing the absorption, enterocyte-based metabolism, and intestinal lymphatic transport of halofantrine. J Pharm Sci. 90 (10), 1599-1607 (2001).
  32. Kararli, T. T. Comparison of the gastrointestinal anatomy, physiology, and biochemistry of humans and commonly used laboratory animals. Biopharm Drug Dispos. 16 (5), 351-380 (1995).
  33. Kassis, T., et al. Dual-channel in-situ optical imaging system for quantifying lipid uptake and lymphatic pump function. J Biomed Opt. 17 (8), 086005(2012).
  34. Dahan, A., Hoffman, A. Evaluation of a chylomicron flow blocking approach to investigate the intestinal lymphatic transport of lipophilic drugs. Eur J Pharm Sci. 24 (4), 381-388 (2005).
  35. Xiao, C., Lewis, G. F. Regulation of chylomicron production in humans. Biochim Biophys Acta. 1821 (5), 736-746 (2012).
  36. Seeballuck, F., Ashford, M., O'Driscoll, C. The Effects of Pluronic® Block Copolymers and Cremophor EL on Intestinal Lipoprotein Processing and the Potential Link with P-Glycoprotein in Caco-2 Cells. Pharmaceutical Research. 20 (7), 1085-1092 (2003).
  37. Levy, E., Mehran, M., Seidman, E. Caco-2 cells as a model for intestinal lipoprotein synthesis and secretion. The FASEB Journal. 9 (8), 626-635 (1995).
  38. Cartwright, I. J., Higgins, J. A. Isolated rabbit enterocytes as a model cell system for investigations of chylomicron assembly and secretion. Journal of Lipid Research. 40 (7), 1357-1365 (1999).
  39. Dixon, J. B., Raghunathan, S., Swartz, M. A. A Tissue-Engineered Model of the Intestinal Lacteal for Evaluating Lipid Transport by Lymphatics. Biotechnology and Bioengineering. 103 (6), 1224-1235 (2009).
  40. Gershkovich, P., et al. The role of molecular physicochemical properties and apolipoproteins in association of drugs with triglyceride-rich lipoproteins: in-silico prediction of uptake by chylomicrons. Journal of Pharmacy and Pharmacology. 61 (1), 31-39 (2009).
  41. Gershkovich, P., Hoffman, A. Uptake of lipophilic drugs by plasma derived isolated chylomicrons: Linear correlation with intestinal lymphatic bioavailability. European Journal of Pharmaceutical Sciences. 26 (5), 394-404 (2005).
  42. Holm, R., Hoest, J. Successful in silico predicting of intestinal lymphatic transfer. International Journal of Pharmaceutics. 272 (1-2), 189-193 (2004).
  43. Trevaskis, N. L., Porter, C. J., Charman, W. N. Bile increases intestinal lymphatic drug transport in the fasted rat. Pharm Res. 22 (11), 1863-1870 (2005).
  44. Miura, S., et al. Increased proliferative response of lymphocytes from intestinal lymph during long chain fatty acid absorption. Immunology. 78 (1), 142-146 (1993).
  45. Caliph, S. M., et al. The impact of lymphatic transport on the systemic disposition of lipophilic drugs. J Pharm Sci. 102 (7), 2395-2408 (2013).
  46. Caliph, S. M., Trevaskis, N. L., Charman, W. N., Porter, C. J. Intravenous dosing conditions may affect systemic clearance for highly lipophilic drugs: implications for lymphatic transport and absolute bioavailability studies. J Pharm Sci. 101 (9), 3540-3546 (2012).
  47. Trevaskis, N. L., et al. Tissue uptake of DDT is independent of chylomicron metabolism. Arch Toxicol. 80 (4), 196-200 (2006).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Похожие статьи