Методическая статья

ЖХ-МС анализ тромбоцитами человека как платформа для изучения метаболизма митохондрий

DOI:

10.3791/53941

⸱

4 апреля 2016 г.

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Center for Cancer Pharmacology, University of Pennsylvania, 2Center for Excellence in Environmental Toxicology, University of Pennsylvania, 3Penn SRP and Department of Systems Pharmacology and Translational Therapeutics, University of Pennsylvania, 4Division of Traumatology, Department of Surgery, Critical Care and Acute Care Surgery, University of Pennsylvania, 5A.J. Drexel Autism Institute, Drexel University

* These authors contributed equally

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Здесь мы показываем , изолированные человеческие тромбоциты могут быть использованы в качестве доступной ех естественных условиях модель для изучения метаболических адаптации в ответ на комплекс I ингибитор ротенон. Этот подход использует изотопный отслеживанию и относительную количественную оценку с помощью жидкостной хроматографии-масс-спектрометрии, и может быть применен к различным дизайнов исследований.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Нарушенный митохондриальный метаболизм вновь вызвал интерес как играющий причинную роль в ряде заболеваний. Исследование изменений в метаболических путях требует модели, в которой внешние факторы могут быть хорошо контролируемы, что позволяет получить воспроизводимые и значимые результаты. Во многих исследованиях для этих целей используются трансформированные клеточные модели; Тем не менее, метаболическое перепрограммирование, которое происходит во многих линиях раковых клеток, может привести к смешанным переменным. По этой причине первичные клетки являются желательными, хотя достижение достаточной биомассы для метаболических исследований может быть сложной задачей. В данной работе мы показываем, что тромбоциты человека могут быть использованы в качестве платформы для проведения метаболических исследований в сочетании с жидкостной хроматографией и тандемным масс-спектрометрическим анализом. Этот подход поддается относительному количественному определению и изотопному мечению для исследования активности конкретных метаболических путей. Доступность тромбоцитов от отдельных доноров или из банков крови делает эту модельную систему применимой к клиническим исследованиям и возможной для масштабирования. Здесь мы используем изолированные тромбоциты для подтверждения ранее выявленных компенсаторных метаболических сдвигов в ответ на ингибитор комплекса I ротенон. В частности, снижение гликолиза сопровождается увеличением окисления жирных кислот для поддержания уровня ацетил-КоА. Наши результаты показывают, что тромбоциты могут быть использованы в качестве легкодоступной и приемлемой с медицинской точки зрения модели для изучения влияния ксенобиотиков на клеточный метаболизм.

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Дисфункциональное митохондриальный метаболизм участвует в широком диапазоне заболеваний , в том числе нейродегенерации, рак и сердечно - сосудистые заболевания 30. Таким образом, большое усилие было помещено на характеризующие метаболические дефекты, которые вносят вклад в патогенез заболевания. Жидкостной хроматографии-тандемной масс - спектрометрии (LC-MS / MS) считается золотым стандартом для количественного определения аналитов из сложных биологических матриц и часто используется для метаболических исследований 8. Однако, как это часто бывает с медико-биологических исследований, достижения доступной и четко определенной модели, имеющей отношение к болезни человека является непростой задачей.

Во многих исследованиях на работу трансформировали клеточных моделей для исследования влияния ксенобиотиков или генетических аномалий на клеточный метаболизм 7,9. Метаболический перепрограммирование , что происходит в раковых клетках , можно ввести смешивающих факторов 21 и, следовательно , не идеальны. Эти вопросы могут быть circumvented с моделями первичных клеток, хотя получение достаточной биомассы для метаболических анализов может быть сложной задачей. Кроме того, воздействие высоких количеств антибиотиков , используемых в культуре был выделен как потенциально вмешивающихся митохондриальных исследований 16.

Тромбоциты человека получают возможность использовать модель первичной ячейки с достаточным содержанием митохондриальной для исследования метаболических 5,22,27,32. Во-первых, тромбоциты могут быть легко усваиваются, через кровь рисует от индивидуальных доноров, или в больших объемах из банков крови, и, следовательно, обеспечить модель, в которой внешние факторы, можно легко регулировать. Во- вторых, из - за их небольшого размера, тромбоциты могут быть легко изолированы от других компонентов крови с минимальной подготовительной работы в минимально даже оборудованных лабораториях 5. Следует отметить, что тромбоциты не содержат ядра и, следовательно, могут быть использованы для изучения изменений в обмене веществ независимо от транскрипционной регуляции. Здесь мы покажем, чтов дополнение к относительной квантификации ацил-коэнзим А (CoA) тиоэфиры, изолированная система тромбоцитов может быть использован для изучения метаболизма углерода. В частности, мы сообщили об использовании метаболического мечения с стабильного изотопа (нерадиоактивного) меченого [13 C 6] -глюкозы и [13] C 16 -пальмитат зонд инкорпорации [13 C] -label в важный метаболит ацетил- КоА с помощью гликолиза или окисления жирных кислот. Это обеспечивает мощный, обобщению и универсальную платформу в связи с широким вовлечением видов ацил-CoA в биохимических путей 13,24 и сговорчивости этой системы для тестирования других переменных, таких как ингибирование комплекса I с ротенону 3,33. В дополнение к информации , представленной ниже протокола, обширное описание методов , используемых для маркировки изотопов и для LC-MS на основе анализа можно найти в Басу и Блэр 4.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Этика Заявление: Все протоколы, касающиеся обращения образцов человека следовать рекомендациям Университета Пенсильвании комитета по этике человека.

1. Подготовка буферами и 100x маточные растворы

  1. Готовят 1 л буфера базового Тирода. Комбинат 8,123 г NaCl, 1,428 г NaHCO 3, 0,466 г CaCl 2 ∙ 2 H 2 O, 0,224 г KCl и 0,095 г MgCl 2. Отрегулируйте общий объем до 1 л с DDH 2 O. Фильтр стерилизовать буфера базового Тирода.
  2. Подготовка 100X исходные растворы глюкозы и пальмитиновой кислоты. Для 100x растворов глюкозы, растворяют 100 мг глюкозы или [13 C 6] -глюкозы в 1 мл DDH 2 O. Для 100x пальмитата растворов, растворяют 2,56 мг пальмитиновой кислоты или 2,72 мг [13] С 16 -palmitic кислоты в 1 мл этанола. Фильтр стерилизовать 100X растворы.
  3. Подготовьте Буферы соответствующие обогащается Тирода
    1. Для исследований, не обозначая, прибавляют 1 мл 100x глюкозы исходного раствора и 1 мл 100x кислоты исходного раствора пальмитиновой до 98 мл буфера базового Тирода.
    2. Для глюкозы исследований маркировки, добавить 1 мл 100х [13 C 6] -глюкозы исходного раствора и 1 мл 100x кислоты исходного раствора пальмитиновой до 98 мл буфера базового Тирода.
    3. Для исследований пальмитиновой кислоты маркировки, добавляют 1 мл 100x глюкозы маточного раствора и 1 мл [13] С 16 кислоты маточного раствора -palmitic до 98 мл буфера базовой Тирода.
  4. Подготовка решения для лечения Ротенон
    1. Готовят 10 мМ исходного раствора ротенону в диметилсульфоксиде (ДМСО).
    2. Для исследований доза-реакция без маркировки, переходите к 1.4.3. Для изучения маркировки в виде разовой дозы, переходите к 1.4.5.
    3. Произвести серийное разведение в 10 мМ ротеноном запаса в ДМСО, чтобы получить растворы с концентрацией Ротенон в пределах от 1 нМ до 100 мкМ. Это 100x запасs.
    4. Добавьте 50 мкл каждого запаса по 5 мл буфера базовой Тирода + глюкоза + пальмитиновой кислоты от версии 1.3.1 для приготовления растворов с концентрацией Ротенон в пределах от 10 пМ до 1 мкМ. В качестве альтернативы, добавить 50 мкл ДМСО, чтобы служить в качестве управления транспортным средством. Перейдите к разделу 2.1.
    5. Развести 10 мМ маточного раствора в 1000 раз в ДМСО с получением 10 мкМ рабочего раствора.
    6. Добавьте 50 мкл этого концентрата до 5 мл каждого из буфера базовой Тироде + [13 C 6] -глюкозы + пальмитиновую кислоту из 1.3.2 и базовый буфер Тирода + глюкоза + [13 C 16] -palmitic кислоты из 1.3.3. Конечная концентрация составляет 100 нМ ротенон. В качестве альтернативы, добавить 50 мкл ДМСО для каждого буфера, чтобы служить в качестве управления автомобилем.

2. Изоляция тромбоцитами

Примечание: Этот метод поддается тромбоцитов, полученных из любой цельной крови или из тромбоцитов мешков. Примерные данные, содержащиеся в настоящем документе был подготовлениспользуя тромбоциты, полученные из мешков тромбоцитов. Пожалуйста , смотрите Басу и др. 5 для получения более подробной информации об использовании функции тромбоцитов , выделенных из цельной крови.

  1. Тромбоциты Выделение из цельной крови
    ПРИМЕЧАНИЕ: Если выделения тромбоцитов из мешка тромбоцитов, переходите к 2.2.1.
    1. Центрифуга цельной крови при 175 х г в течение 15 мин без тормозов.
    2. Передача 1 мл верхней обогащенной тромбоцитами плазмы (PRP) слой в 1,5 мл трубки микроцентрифужных.
    3. Центрифуга PRP при 400 х г в течение 5 мин.
    4. Отберите супернатант и перейдите к шагу 3.1 или 3.2.
  2. Тромбоциты Изоляция от тромбоцитами Bag
    1. Передача 1 мл суспензии тромбоцитов в 1,5 мл трубки микроцентрифужных.
    2. Центрифуга суспензии при 400 мкг в течение 5 мин.
    3. Отберите супернатант и перейти к шагу 3.1. или 3.2.

3. Выполнение эксперимента

  1. Для определения влияния ксенобиотиковлечение (например, ротенон) на уровнях метаболита интерес (например, ацетил-КоА), переходите к 3.1.1. Для определения влияния ксенобиотика (например., Ротенон) на включение метаболического предшественника в нижней по потоку метаболита интерес, перейти к 3.2.1.
    1. используя не менее трех биологических повторяет для каждого состояния, ресуспендирования тромбоцитов осадок со стадии 2.1.4 или 2.2.3 в 1 мл каждого раствора со стадии 1.4.4.
    2. Инкубируйте ресуспендировали тромбоциты в водяной рубашкой СО 2 инкубатор на 95% влажности, 5% CO 2 и 37 ° С в течение 1 часа. Перейдите к шагу 4.1
      Примечание: Здесь мы опишем эксперимент ответа от дозы. В качестве альтернативы, эксперимент конечно время может быть сделано, в котором доза была установлена ​​и продолжительность инкубации варьировалось вместо.
  2. Для определения влияния ксенобиотиков лечения на введении метаболического предшественника в нижней по потоку метаболита интерес.
    1. Uпоют не менее трех биологических повторностях для каждого условия, ресуспендирования тромбоцитов осадок со стадии 2.1.4 или 2.2.3 в 1мл каждой композиции меченого буфера Тирода со стадии 1.4.6.
    2. Инкубируйте ресуспендировали тромбоциты в водяной рубашкой СО 2 инкубатор на 95% влажности, 5% CO 2 и 37 ° С в течение 1 часа. Перейдите к шагу 4.1.

4. Тушение и КоА Добыча

  1. Гранул тромбоциты центрифугированием при 3000 мкг в течение 3 мин.
  2. Отберите супернатант.
  3. Ресуспендируют тромбоциты в 750 мкл охлажденного на льду 10% -ной трихлоруксусной кислоты (вес / объем).
  4. Добавить соответствующий стабильный изотоп-меченых внутренний стандарт. Например, если цель состоит в том, чтобы сравнить уровни видов КоА -редуктазы по образцам, используют 100 мкл смеси стабильных изотопов , меченные CoA тиоэфиров , полученные из дрожжей , как описано ранее (техника Silec) 29.
  5. Пульс-гомогенат каждый образец в 30 раз с 0,5 сек импульсов.
  6. Центрифуга образцов при 16000 х г в течение 10 мин при 4 ° С.
  7. Наклейте С18 твердофазная экстракция (SPE) столбцы вакуумного коллектора.
  8. Выдержать колонки с 1 мл метанола.
  9. Равновесие столбцы с 1 мл DDH 2 O.
  10. Запуск примера полученный из надосадочной жидкости (приблизительно 850 мкл в данном случае) через колонны.
  11. Вымойте колонки с 1 мл воды.
  12. Нагрузка 10 мл стеклянные центрифужные пробирки в вакуумный коллектор для сбора элюции фракции.
  13. Промывки колонки с 1 мл 25 мМ ацетата аммония в метаноле.
  14. Сухой элюата под газообразным азотом.
  15. Ресуспендируют высушенных остатков в 50 мкл 5% (вес / объем) 5-сульфосалициловой кислоты и переносят в ВЭЖХ-флаконах.

Настройка 5. ВЭЖХ

  1. С помощью программного обеспечения управления для системы ВЭЖХ, создать метод с ВЭЖХ - услови х, оптимизированных для целевых аналитов и используемой колонки, как указано в Таблице 1.
    Примечание: В столбце TEMPERATЮр используется для генерации этих данных была 25 ° C, но конкретные параметры будут изменяться в зависимости от инструмента и в отношении соединений, представляющих интерес. Для ацил-СоА - количественному, было зарегистрировано несколько методов анализа LC-MS, и утверждена для различных аналитов в различных условиях LC 14,19,20.
  2. Дайте ВЭЖХ Адекватно Равновесие.
    Примечание: Это должно включать в себя как грунтование растворителей перед прикреплением колонку и уравновешивание колонки при исходным растворителем условий для применения метода. Объем уравновешивания должен следовать инструкциям производителя, и в результате чего сточные воды должны быть направлены в отходы.
    Примечание: Обратитесь к Басу и Блэра 5 для более подробной информации о параметрах ВЭЖХ.

Установка 6. Масс-спектрометр

  1. С помощью программного обеспечения управления для масс-спектрометра, создать целевой метод обнаружения ионизированных форм соединений, представляющих интерес. Параметры представленыв таблице 2.
    Примечание: Стабильные аналоги изотопов этих соединений следует использовать, чтобы определить, дает ли положительный или отрицательный режим высокую чувствительность и оптимизировать источник и состояние оптики для их обнаружения. Общее время обнаружения метода масс-спектрометр должен соответствовать времени компоненту соответствующего метода ВЭЖХ.
    Примечание: Как упоминалось ранее, было зарегистрировано несколько методов анализа ацил-CoA -редуктазы , в том числе положительных 14 и отрицательной ионизации 15 режимов и использованием масс - спектрометра 17 с высокой разрешающей способностью, а не Тройной квадрупольный прибор 28.
  2. Чистый и калибровки прибора, установить прочный аэрозоль в спектрометр, и дать время для калибровочного раствора, чтобы адекватно рассеивать от источника и оптики в соответствии с инструкциями изготовителя.
  3. Установите последовательность для всех образцов с программным обеспечением управления масс-спектрометр. Incluде имя или числовые идентификаторы и указать соответствующий объем впрыска и инструмента метода. Запуск пробел перед первой выборки, а также запускать другие заготовки и промывные между образцами по мере необходимости для смягчения переходящие или матричные эффекты.
    Примечание: Способ обработки для достижения максимальной интеграции жидких хроматограммах выбранных анализируемых веществ "часто может быть установлен в пределах этой последовательности или впоследствии применяются при обработке данных.
  4. Начните последовательность и контролировать масс-спектрометра и ВЭЖХ системы периодически проблем, включая колебания давления или системных сбоев и потери интенсивности сигнала во время бега.
    Примечание: Серьезные проблемы или постоянные сбои Запуск может потребовать остановки прогона и продувка и повторно уравновешивая систему ВЭЖХ, а также очистки и калибровки масс-спектрометра. Consult Басу и Блэр 5 для более подробной информации относительно настроек и обработки данных MS.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Чтобы продемонстрировать полезность этой методики мы воспроизвели обобщаемость ранее описанного компенсаторной метаболической адаптации в результате воздействия ротенону. Этот вывод был ранее идентифицирован в моделях клеточных культур, и это исследование было направлено, чтобы проверить, если этот метаболический сдвиг происходит также в тромбоцитах, которые безьядерный и не склонны к тем же экспериментальных артефактов, как культуре клеток. Эта работа была выполнена с 6-дневных тромбоци...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Здесь мы показали полезность изолированных тромбоцитов в качестве платформы для изучения возмущенную митохондриальный метаболизм. В частности, мы охарактеризовали метаболические адаптации в ответ на комплексном I ингибирования ротенону.

Настоящее исследование продлила сообщалось ранее выводы о роли комплексного ингибирования I по ротенону в клеточных линий на тромбоцитах человека. Важно отметить, что это показало, что формирование ротенон также ингибирует тромбоцитов сукцинил-КоА, стимулиров...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы заявляют нет конкурирующих финансовых интересов.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Мы признаем поддержку NIH грантов P30ES013508 и T32ES019851.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
<сильно>реагент
хлорид натрия (NaCl)Сигма-Олдрич746398
бикарбонат натрия (NaHCO<суб>3)Сигма-ОлдричS5761
Дигидрат хлорида кальция (CaCl<суб>2 * H<суб>2O)Сигма-Олдрич223506
Хлорид калия (KCl)Sigma-AldrichP9541
Магния хлорид (MgCl2)Sigma-Aldrich208337
глюкозаSigma-AldrichG8270
13C6-глюкозаSigma-Aldrich389374
Пальмитиновая кислотаCayman10006627
13C16-пальмитиновая кислотаSigma-Aldrich605573
RotenoneSigma-AldrichR8875
Трихлоруксусная кислотаSigma-AldrichT6399
5-сульфосалициловая кислотаSigma-Aldrich390275
ацетонитирлеFischer ScientificA996-4(optima)
Вода (H2O)Fischer ScientificW7-4(optima)
Муравьиная кислотаFischer Scientific85171(optima)
ДиметилсульфоксидSigma-Aldrich472301
этанолFischer Scientific04-355-222
МетанолFischer ScientificA454-4(optima)
Ацетат аммонияFischer ScientificA639-500
2 мл Пробирки Eppendorf BioExpressC-3229-1
LC флаконы (пластик)Вода186002640
10 мл Стеклянные центрифужные пробиркиKimble Chase73785-10
Oasis Твердофазная экстракстрия (SPE) КолонкиВодыWAT094225
пипетки PastuerFischer Scientific13-678-200<
strong>Название<strong>CompanyНомер в каталогеКомментарии
Equipment
CO2 Инкубатор с водяной рубашкойNuaireAutoFlow NU-8500
Тройной квадропольный масс-спектрометрThermoScientific Finnigan TSQ Quantum
HPLCThermo ScientificDionex Ultimate 3000
SourceThermoScientific HESI II
HPLC ColumnPhenomenexLuna C183 μ размер частиц m, 200 мм x 2 мм

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Ault, K. A. The clinical utility of flow cytometry in the study of platelets. Semin. Hematol. 38 (2), 160-168 (2001).
  2. Avila, C., et al. Platelet mitochondrial dysfunction is evident in type 2 diabetes in association with modifications of mitochondrial anti-oxidant stress proteins. Exp. Clin. Endocrinol. Diabetes. 120 (4), 248-251 (2012).
  3. Basu, S. S., Blair, I. A. Rotenone-mediated changes in intracellular coenzyme A thioester levels: implications for mitochondrial dysfunction. Chem. Res. Toxicol. 24 (10), 1630-1632 (2011).
  4. Basu, S. S., Blair, I. A. SILEC: a protocol for generating and using isotopically labeled coenzyme A mass spectrometry standards. Nat. Protoc. 7 (1), 1-12 (2012).
  5. Basu, S. S., Deutsch, E. C., Schmaier, A. A., Lynch, D. R., Blair, I. A. Human platelets as a platform to monitor metabolic biomarkers using stable isotopes and LC-MS. Bioanalysis. 5 (24), 3009-3021 (2013).
  6. Berson, A., et al. Mechanisms for experimental buprenorphine hepatotoxicity: major role of mitochondrial dysfunction versus metabolic activation. J. Hepatol. 34 (2), 261-269 (2001).
  7. Castell, J. V., Jover, R., Martinez-Jimenez, C. P., Gomez-Lechon, M. J. Hepatocyte cell lines: their use, scope and limitations in drug metabolism studies. Expert. Opin. Drug Metab Toxicol. 2 (2), 183-212 (2006).
  8. Ciccimaro, E., Blair, I. A. Stable-isotope dilution LC-MS for quantitative biomarker analysis. Bioanalysis. 2 (2), 311-341 (2010).
  9. Dang, C. V. Links between metabolism and cancer. Genes Dev. 26 (9), 877-890 (2012).
  10. Darnell, M., Weidolf, L. Metabolism of xenobiotic carboxylic acids: focus on coenzyme A conjugation, reactivity, and interference with lipid metabolism. Chem. Res. Toxicol. 26 (8), 1139-1155 (2013).
  11. Des Rosiers, C., Fernandez, C. A., David, F., Brunengraber, H. Reversibility of the mitochondrial isocitrate dehydrogenase reaction in the perfused rat liver. Evidence from isotopomer analysis of citric acid cycle intermediates. J. Biol. Chem. 269 (44), 27179-27182 (1994).
  12. Ellis, J. K., et al. Metabolic profiling detects early effects of environmental and lifestyle exposure to cadmium in a human population. BMC. Med. 10, 61(2012).
  13. Grevengoed, T. J., Klett, E. L., Coleman, R. A. Acyl-CoA metabolism and partitioning. Annu. Rev. Nutr. 34, 1-30 (2014).
  14. Haynes, C. A., et al. Quantitation of fatty acyl-coenzyme As in mammalian cells by liquid chromatography-electrospray ionization tandem mass spectrometry. J. Lipid Res. 49 (5), 1113-1125 (2008).
  15. Ikegawa, S., et al. Characterization of cholyl-adenylate in rat liver microsomes by liquid chromatography/electrospray ionization-mass spectrometry. Anal. Biochem. 266 (1), 125-132 (1999).
  16. Kalghatgi, S., et al. Bactericidal antibiotics induce mitochondrial dysfunction and oxidative damage in Mammalian cells. Sci. Transl. Med. 5 (192), 192ra85(2013).
  17. Liu, X., et al. High-Resolution Metabolomics with Acyl-CoA Profiling Reveals Widespread Remodeling in Response to Diet. Mol. Cell Proteomics. 14 (6), 1489-1500 (2015).
  18. Lopez-Gallardo, E., Iceta, R., Iglesias, E., Montoya, J., Ruiz-Pesini, E. OXPHOS toxicogenomics and Parkinson's disease. Mutat. Res. 728 (3), 98-106 (2011).
  19. Magnes, C., Sinner, F. M., Regittnig, W., Pieber, T. R. LC/MS/MS method for quantitative determination of long-chain fatty acyl-CoAs. Anal. Chem. 77 (9), 2889-2894 (2005).
  20. Mauriala, T., Herzig, K. H., Heinonen, M., Idziak, J., Auriola, S. Determination of long-chain fatty acid acyl-coenzyme A compounds using liquid chromatography-electrospray ionization tandem mass spectrometry. J. Chromatogr. B Analyt. Technol. Biomed. Life Sci. 808 (2), 263-268 (2004).
  21. Murphy, T. A., Dang, C. V., Young, J. D. Isotopically nonstationary 13C flux analysis of Myc-induced metabolic reprogramming in B-cells. Metab Eng. 15, 206-217 (2013).
  22. Paglia, G., et al. Metabolomic analysis of platelets during storage: a comparison between apheresis- and buffy coat-derived platelet concentrates. Transfusion. 55 (2), 301-313 (2015).
  23. Patti, G. J. Separation strategies for untargeted metabolomics. J. Sep. Sci. 34 (24), 3460-3469 (2011).
  24. Robishaw, J. D., Neely, J. R. Coenzyme A metabolism. Am. J. Physiol. 248 (1 Pt 1), E1-E9 (1985).
  25. Rodgers, G. M. Overview of platelet physiology and laboratory evaluation of platelet function. Clin. Obstet. Gynecol. 42 (2), 349-359 (1999).
  26. Salles, I., et al. Development of a high-throughput ELISA assay for platelet function testing using platelet-rich plasma or whole blood. Thromb. Haemost. 104 (2), 392-401 (2010).
  27. Snyder, N. W., Basu, S. S., Worth, A. J., Mesaros, C., Blair, I. A. Metabolism of propionic acid to a novel acyl-coenzyme A thioester by mammalian cell lines and platelets. J. Lipid Res. 56 (1), 142-150 (2015).
  28. Snyder, N. W., Basu, S. S., Zhou, Z., Worth, A. J., Blair, I. A. Stable isotope dilution liquid chromatography/mass spectrometry analysis of cellular and tissue medium- and long-chain acyl-coenzyme A thioesters. Rapid Commun. Mass Spectrom. 28 (16), 1840-1848 (2014).
  29. Snyder, N. W., et al. Production of stable isotope-labeled acyl-coenzyme A thioesters by yeast stable isotope labeling by essential nutrients in cell culture. Anal. Biochem. 474, 59-65 (2015).
  30. Wallace, D. C. Mitochondrial diseases in man and mouse. Science. 283 (5407), 1482-1488 (1999).
  31. Wojtovich, A. P., Brookes, P. S. The complex II inhibitor atpenin A5 protects against cardiac ischemia-reperfusion injury via activation of mitochondrial KATP channels. Basic Res. Cardiol. 104 (2), 121-129 (2009).
  32. Worth, A. J., et al. Stable isotopes and LC-MS for monitoring metabolic disturbances in Friedreich's ataxia platelets. Bioanalysis. 7 (15), 1843-1855 (2015).
  33. Worth, A. J., Basu, S. S., Snyder, N. W., Mesaros, C., Blair, I. A. Inhibition of neuronal cell mitochondrial complex I with rotenone increases lipid beta-oxidation, supporting acetyl-coenzyme A levels. J. Biol. Chem. 289 (39), 26895-26903 (2014).
  34. Zhou, L., Schmaier, A. H. Platelet aggregation testing in platelet-rich plasma: description of procedures with the aim to develop standards in the field. Am. J. Clin. Pathol. 123 (2), 172-183 (2005).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

I

Похожие статьи