Проволока myograph техника используется для изучения функций сосудистой гладкой мускулатуры и экран новых лекарств. Мы доклад подробный протокол для измерения Изометрические сократительную способность мыши верхней брыжеечной артерии и скрининга новых миорелаксанты гладких мышц сосудов.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Изометрические сократимости измерение верхней брыжеечной артерии мыши, с помощью проволоки миография
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Проволока myograph техника используется для оценки сократимости сосудистой гладкой мускулатуры в ответ на depolarization, GPCR агонисты/ингибиторы и наркотики. Он широко используется во многих исследованиях на физиологические функции сосудистой гладкой мускулатуры, патогенеза сосудистых заболеваний, как гипертония и разработки лекарств релаксант гладких мышц. Мышь является широко используется модель животных с большим бассейном модели заболеванием и генетически модифицированных штаммов. Мы ввели этот метод измерения изометрического сокращения мыши верхней брыжеечной артерии в деталях. 1.4-мм сегмент мыши сопротивление верхней брыжеечной артерии был изолирован и установлен на камеру myograph, передав две стальные провода через ее просвета. После уравновешивания и нормализации шаги судно сегмент был потенцированные high-K+ раствором дважды перед сужением assay. В качестве примера применения этого метода в разработке лекарств мы измерили релаксант эффект Роман природное вещество, neoliensinine, изолированных от китайских трав, эмбрионы семян Лотос (Nelumbo nucifera (Gaertn.) на мыши брыжеечных артерии. Сегменты судна, установлен в myograph камере были стимулировали раствором high-K+ . Когда силы натяжения этап стабильного поступательного, накопленных доз neoliensinine были добавлены к камере. Мы обнаружили, что neoliensinine был эффект миорелаксантов дозозависимый на гладких мышц, таким образом, о том, что он несет потенциальной деятельности против гипертонии. Кроме того как судно сегмент может выжить по крайней мере 4 часа после монтажа и поддерживать сократимости, вызванных high-K+ решения для много раз, мы предполагаем, что провода myograph система может использоваться для трудоемкий процесс скрининга наркотиков.
Введение
Система myograph небольшой сосуд, используемый здесь был для измерения Изометрические сужением сосудов малого сопротивления с внутренним диаметром от 100 до 400 мкм. изолированных малых судов (около 2 мм длиной) были вставлены два провода диаметром 40 мкм и затем были монтируется на челюсти микрометр стороне датчика и последовательно. Этот метод myograph был впервые предложил в 19721 и затем разработан прежде всего Mulvany и его коллеги2,3,4,5,6. Это теперь зрелый техника стабильной ....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Животных манипуляции были утверждены институциональный уход животных и использование Комитет (IACUC) модель животных исследовательский центр Нанкин университета.
1. решение подготовка
- Приготовляют раствор HEPES-Tyrode (H-T), используя 137.0 мм NaCl, 2,7 мм KCl, 1.8 мм CaCl2, 1 мм MgCl2∙6H2O, 5,6 мм D-глюкозы и 10 мм HEPES, рН 7,3-7,4.
- Приготовляют раствор HEPES-Tyrode без кальция (Ca2 +-свободной H-T) с помощью 140.6 мм NaCl, 2,7 мм KCl, 1 мм MgCl2∙6H2O, 5,6 мм D-глюкозы и 10 мм HEPES, рН 7,3-7,4.
- Приготовляют раствор HEPES-Tyrode, с помощью 124 ....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Мы измеряется Изометрические сократимости верхней брыжеечной артерии мыши с помощью многопроволочной myograph системы и оценку релаксант эффект neoliensinine, очищенного от эмбрионов семян Лотос (Nelumbo nucifera Gaertn.) 14. мыши сопротивление верхней брыжеечной артерии был изолирован, очищены от соединительной ткани и нарезать сегменты 1.4-мм. В сегменте артерии был вставлен на два стальных проволок в Ca2 +-бесплатное решение H-T в чашке Петри.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Гипертония является задачей широкого общественного здравоохранения из-за тяжелых осложнений, в том числе сердечно-сосудистых и почечных заболеваний16. Понимания патогенеза гипертензии и изучения более антигипертензивные препараты стало насущной задачей в этой области. Артериальное давление создается и поддерживается периферическое сопротивление циркуляции. Согласно закону Пуазейля, которое в относительно малых артерий генерировать значительную долю кровообращения сопротивления и служить доминирующ.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы не имеют ничего сообщать.
Благодарности
Мы благодарим д-р Вэй ци он (Soochow университета, Сучжоу, Китай) и д-р Ян Ning Qiao (Шэньси педагогический университет, г. Сиань, Китай) для оказания технической помощи. Эта работа была поддержана Фонд национального естественных наук Китая (Грант 31272311, 81373295 и 81473420) и проекта, финансируемых приоритетных академические программы развития Цзянсу высших учебных заведений (Грант № ysxk-2016).
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| Многопроводная система миографа | DMT | 610-M | |
| Проволока из нержавеющей стали | DMT | 400447 | |
| Ножницы для рассечения Гейдера | DMT | 400431 | |
| щипцы Dumont | DMT | 300413 | |
| PowerLab/8SP | Программное | ||
| NaCl | SigmaAldrich | S5886 | |
| KCl | SigmaAldrich | P5405 | |
| CaCl2 | SigmaAldrich | C4901 | |
| MgCl2· 6H2O | SigmaAldrich | M2393 | |
| D-глюкоза | SigmaAldrich | G6152 | |
| HEPES | Sangon Biotech | A100511-0250 | |
| NaOH | SigmaAldrich | S8045 | |
| DMSO | SigmaAldrich | D2650 |
Ссылки
- Bevan, J. A., Osher, J. V. A direct method for recording tension changes in the wall of small blood vessels in vitro. Agents and Actions. 2 (5), 257-260 (1972).
- Mulvany, M. J., Halpern, W. Mechanical properties of vascular smooth muscle cells in situ. Nature<....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
