Этот протокол обеспечивает пошаговую процедуру анализа атеросклеротической нагрузки у мышей. Исследователи могут использовать этот протокол для сравнения обилия, местоположения и размера атеросклеротических поражений у разных животных.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Визуализация и анализ поражений всей аорты с масляным красным O-окрашиванием в мышиной модели гиперлипидемии аневризмы
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Аполипопротеин Е (Apoe) - или низкоплотные липопротеиновые рецепторы (Ldlr) - гиперлипидемические мыши являются двумя наиболее часто используемыми моделями для исследований атеросклероза. Они используются для изучения влияния различных генетических факторов и различных типов клеток на формирование атеросклеротического поражения, а также для проверки разработки новых методов лечения. Выделение, иссечение всей аорты и количественная оценка атеросклеротических поражений, окрашенных Oil Red O, являются основными морфометрическими методами, используемыми для оценки атеросклеротической нагрузки. Целью этого протокола является описание оптимизированного, пошагового хирургического метода рассечения, перфьюзирования-фиксации, выделения, окрашивания, изображения и анализа атеросклеротических поражений у аорты мышей с Oil Red O. Поскольку атеросклеротические поражения могут образовываться в любом месте всего дерева аорты, этот метод окрашивания всей аорты Oil Red O имеет преимущество оценки липидных бляшек во всей аорте и всех ветвях у одной мыши. В дополнение к окрашиванию Oil Red O, свежеизолированная цельная аорта может быть использована для различных экспериментов in vitro и in vivo и изоляции клеток.
Введение
Ишемическая болезнь сердца, ведущая причина смертности в США, обычно вызвана атеросклерозом, процессом, который приводит к накоплению бляшек внутри артериальных стенок1. Склонные к гиперлипидемии мыши с дефицитом apoe- и Ldlr занимают центральное место в исследованиях атеросклероза и его осложнений и разработке методов лечения2,3,4,5. Количественная оценка атеросклеротических поражений от аорты лица является важным анализом конечных точек для оценки влияния генетических манипуляций на различные типы клеток. Это также помогает изучать новые методы лечения, предназначенные для воздействия на инициацию, прогрессирование и регрессию атеросклеротического заболевания. Атеросклеротические поражения могут образовываться в любом месте аорты и ее ветвей (т.е. брахиоцефальных, сонных и подключичных артерий в грудной клетке, а также почечных, общих подвздошных и бедренных артерий ниже диафрагмы)6. Всесторонняя оценка бремени атеросклероза и соответствующая терапия требуют оценки бремени болезней в разных местах, что часто упускается из виду.
Этот протокол описывает, как выполнить комплексный анализ атеросклеротических поражений, начиная с нераскрытой всей аорты и заканчивая подготовкой лица, на одной мыши. Неоткрытое окрашивание всей аорты Oil Red O позволяет быстро и качественно оценить липидные бляшки во всей аорте и ее ветвях, а подготовка лица обеспечивает количественную оценку распространения атеросклеротического поражения в аорте мыши.
Метод использует 8-недельных мышей с гладкомышечной клеточной специфической делецией TGFβR2 на гиперлипидемическом фоне Apoe-/- (MYH11-CreERT2; Tgfbr2f/f;mT/mGf/f; Апоэ-/-; далее именуемые TGFβR2iSMC-Apoe mice) и пометные apoe-/- контрольные элементы (MYH11-CreERT2;mT/mGf/f; Апоэ-/-; далее именуемые обезьянами Apoe-/-mice). Животные содержатся в течение 16 недель на диете с высоким содержанием холестерина и высоким содержанием жиров (ГХГФД) в качестве материалов исследования7. В конце исследования неоткрытые целые аорты окрашиваются и визуализируются (включая все основные ветви) Oil Red O для качественной оценки липидных бляшек. Аорта разрезается с помощью препарата для лица, и все атеросклеротические поражения визуализируются и количественно оцениваются. Этот протокол может быть использован для изучения развития атеросклеротического поражения в моделях мышей с гиперлипидемией Apoe-/- или Ldlr-/- и распространен на общие приложения сосудистой биологии, связанные с аортой.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Мыши mT/mG (инвентарный No 007676) и Apoe-/- (stock No 002052) были приобретены в лаборатории Джексона. Мыши Myh11-CreERT2 были подарком от Стефана Офферманнса (доступны в лаборатории Джексона в качестве запаса No 019079). Tgfbr2fl/fl мышей были получены от Гарольда Л. Мозеса (Университет Вандербильта). Все процедуры для животных выполнялись с использованием протоколов, одобренных Комитетом по уходу и использованию животных Йельского университета.
1. Мыши
- Производят MYH11-CreERT2;mT/mGf/f; Apoe-/- и MYH11-CreERT2; Tgfbr2f/f;mT/mGf/f; Мыши Apoe-/- как описано ранее7. Размножайте мутантные штаммы на фоне C57BL/6J на протяжении более десяти поколений.
ПРИМЕЧАНИЕ: Линия мышей Myh11-CreERT2 Cre предоставляет мощный инструмент для изучения роли гладкомышечных клеток в сосудистом гомеостазе и сосудистой патологии. Аллель Cre вставляется в Y-хромосому; таким образом, самки мышей не выражают эту конструкцию.
2. Мышечное генотипирование, индукция тамоксифена и диета с высоким содержанием холестерина и высоким содержанием жиров
- Выполните генотипирование мыши с использованием ДНК уха мыши и ПЦР-анализа. ДНК уха мыши должна быть выделена с помощью набора для изоляции ДНК крови и тканей (Таблица материалов) в соответствии с инструкциями производителя. Праймеры ПЦР перечислены в таблице 1.
- Индуцировать рекомбинацию Cre-Lox путем инъекции тамоксифена при 1 мг/сут в/п. в течение 5 дней у 6-недельного MYH11-CreERT2;mT/мГф/ф; Apoe-/- и MYH11-CreERT2; Tgfbr2f/f;mT/mGf/f; Apoe-/- самцы мышей.
- Индуцировать атеросклероз, помещая 8-недельных самцов мышей (через 2 недели после лечения тамоксифеном) на диету ГХГФ (40% ккал жира, 1,25% холестерина, 0% холевой кислоты) в течение 16 недель.
3. Подготовка реагентов и инструмента для рассечения
- Приготовление раствора Масло Красное О: растворить 1 г Масла Красного О в 100 мл изопропилового спирта.
- Приготовление рабочего раствора Oil Red O: смешайте 24 мл раствора Oil Red O с 16 мл dH2O. Фильтруйте разбавленное масло Red O стерильными шприцевыми фильтрами 0,45 мкм (раствор хорош только в течение 1–2 ч).
- Приготовление 60% изопропилового спирта: смешайте 60 мл изопропилового спирта с 40 мл dH2O.
- 4% формальдегид в 1x препарате DPBS: развести 10 мл 16% формальдегида в 30 мл 1x DPBS.
- Очистите все инструменты для рассечения 70% этанолом (рисунок 1).
4. Эвтаназия (рисунок 2А)
- Измерьте вес мыши перед эвтаназией.
- Эвтаназить мышь путем внутрибрюшинной инъекции кетамина и ксилазина (каждый миллилитр содержит 10 мг/мл кетамина и 2 мг/мл ксилазина).
- Поместите мышь в положение лежа на спине (брюшкой лицевой стороной вверх).
5. Вскрытие грудной и брюшной полости и перфузия сердца (рисунок 2В)
- Приготовьте шприц объемом 10 мл с 10 мл 1x DPBS. Колпачок с иглой 25 г. Шприц будет использоваться для промывания сердца.
- Поднимите кожу пинцетом (стиль 5) и вырежьте тонкими ножницами от основания живота до верхней части шеи.
- Откройте брюшную стенку ниже грудной клетки.
- Поднимите брюшину пинцетом (стиль 5) и отрежьте диафрагму, затем отрежьте грудную клетку, чтобы обнажить грудную полость.
- Сделайте небольшой разрез в правом предсердии сердца.
- Перфьюзировать через апикальную пункцию левого желудочка путем медленного введения 10 мл 1x DPBS. После тщательной перфузии печень и почки приобретают светло-коричневый цвет.
- Очистите грудную полость от посторонней крови и жидкости с помощью нетканой губки для впитывания материала.
6. Выделение аорты и ветвей (рисунок 2С)
- Удалите органы (например, легкие, печень, селезенку, желудочно-кишечные и репродуктивные органы) и разрежьте ключицу с помощью пинцета (стиль 5) и тонких ножниц, оставив сердце, почки и аорту нетронутыми in situ.
ПРИМЕЧАНИЕ: Убедитесь, что вы не разрываете сердце или какие-либо крупные кровеносные сосуды. - Поместите мышь под стереомикроскоп.
- Рассекать ветви аорты и аорты, включая брахиоцефальную артерию, сонные артерии, подключичные артерии, почечные артерии, общие подвздошные артерии и бедренные артерии с помощью пинцета (стиль 4) и пружинных ножниц.
ПРИМЕЧАНИЕ: Накройте аорту влажной нетканой губкой, чтобы избежать обезвоживания при рассечении ветвей аорты. - Тщательно рассекните и удалите адвентитную жировую и соединительную ткань вокруг аорты и ветвей аорты с помощью пинцета (стиль 4) и пружинных ножниц.
ПРИМЕЧАНИЕ: Поскольку воспаление заметно у мыши с гиперлипидемией аневризмы, трудно удалить адвентицию. Будьте осторожны, чтобы не порвать и не повредить аорту и ветви аорты. Этот шаг требует практики и терпения.
7. Фиксация сердца и аорты (рисунок 2D,E)
- Приготовьте шприц объемом 10 мл с 10 мл 4% формальдегида в 1x DPBS. Колпачок с иглой 25 г.
ВНИМАНИЕ: Формальдегид опасен. Прочитайте MSDS перед работой с этим химическим веществом. Надевайте перчатки и защитные очки и производите растворы для разбавления внутри вытяжного капюшона.
ПРИМЕЧАНИЕ: 4% раствор формальдегида со временем разлагается. Важно использовать свежеприготовленный 4% формальдегид для фиксации. - Зафиксируйте сосудистое дерево через апикальную пункцию левого желудочка путем медленного введения 10 мл 4% формальдегида.
ПРИМЕЧАНИЕ: Фиксация формальдегида препятствует нескольким последующим приложениям, таким как клеточная культура, анализ FACS и анализ секвенирования одноклеточной РНК. Пропустите этот шаг, если аорта будет использоваться для любого из этих приложений. - Очистите грудную полость от любой посторонней жидкости нетканой губкой для впитывания материала.
- Отделите сердце от аорты, удерживая сердце пинцетом (стиль 4) и используя пружинные ножницы для микропарирования.
ПРИМЕЧАНИЕ: Чтобы выполнить окрашивание лица маслом Red O после этого этапа, рекомендуется разрезать аорту открытой in situ вместо ex vivo и перейти к разделу 8. Это позволяет легко укладывать анальную аорту. - Изолируйте и иссечь аорту и ее большую часть от 1 мм над сонной артерией до конца бедренной артерии с помощью пинцета (стиль 4) и пружинных ножниц.
- Переложите сосуд в восковую чашку Петри или микроцентрифужную трубку объемом 1,5 мл и заполните 1x DPBS до тех пор, пока она не покроет аорту.
ПРИМЕЧАНИЕ: Здесь протокол можно приостановить.
8. Окрашивание маслом Red O и визуализация нераскрытой всей аорты (рисунок 3)
- Прикрепите сосуд к восковой чашке Петри с помощью миниатюрных булавок (рисунок 3А).
- Промойте сосуд один раз с помощью 1x DPBS.
- Налейте 25 мл свежего раствора Oil Red O в чашку Петри (рисунок 3B).
ПРИМЕЧАНИЕ: (1) Изопропанол опасен и является легковоспламеняющейся жидкостью. Используйте надлежащие средства индивидуальной защиты. (2) Раствор Oil Red O может легко выпадать в осадок. Осажденные частицы могут мешать последующему окрашиванию. Важно удалить осадок, отфильтровав раствор Oil Red O через фильтр 0,45 мкм перед использованием. (3) Лучше всего приготовить свежий раствор Oil Red O и отказаться от любого неиспользованного раствора. (4) В дополнение к Oil Red O, Судан IV является еще одним химическим соединением, используемым для окрашивания липидов, триглицеридов и липопротеинов. Тем не менее, Oil Red O постепенно заменил Судан IV, потому что красный цвет, производимый Oil Red O, более интенсивный и, таким образом, может сделать жир намного легче увидеть. - Окрашивают аорту в течение 60 мин при комнатной температуре (RT). Масло Red O окрашивает богатый липидами налет в красный цвет, оставляя другие области, не содержащие бляшек, бледными по цвету.
- Промыть один раз в течение 20 мин с 60% изопропанолом на RT.
ПРИМЕЧАНИЕ: Чрезмерное ополаскивание может ослабить зубной налет. - Промыть аорту 3x dH2O в течение 5 мин, чтобы удалить изопропанол.
- Под стереомикроскопом аккуратно очистите всю периваскулярную жировую ткань вокруг аорты с помощью пинцета (стиль 4) и пружинных ножниц (рисунок 3C, D).
ПРИМЕЧАНИЕ: Важно очистить всю периваскулярную жировую ткань вокруг аорты и ее ветвей после окрашивания, потому что периваскулярная жировая ткань, окрашенная Oil Red O, может давать ложный фон и мешать морфометрии бляшек и количественной оценке области бляшек. Убедитесь, что не удаляется часть стенки аорты. Наполните восковую посуду dH2O до тех пор, пока она не покроет окрашенную аорту во время очистки. Этот шаг требует практики и терпения. - Перенесите сосуд на чистый стеклянный слайд микроскопа.
- Получайте цифровые микроснимки с помощью камеры, подключенной к световому микроскопу. Сохраняйте изображения с высоким разрешением, предпочтительно в формате файла изображения с тегами (TIFF) (рисунок 3E).
ПРИМЕЧАНИЕ: Здесь протокол можно приостановить. Чтобы предотвратить высыхание аорты, перенесите сосуд в микроцентрифужную трубку объемом 1,5 мл и заполните 1x DPBS, пока она не покроет аорту. Хранить при температуре 4 °C.
9. Крепление аорты на лицевой стороне (рисунок 4, рисунок 5)
- Переложите сосуд в восковую чашку Петри и наполните 1x DPBS, пока он не покроет аорту.
- Разорвать сонные, подключичные артерии дуги аорты и подвздошные артерии в брюшной аорте на 1–2 мм после бифуркации. Разрыв почечных артерий. (Рисунок 4А)
- Продольно разрезают препарат аорты по внутренней кривизне (рис. 4В1) и отдельно подвздошные артерии (рис. 4В2) микрорассеченными пружинными ножницами.
- Разрежьте три ветви дуги аорты (т.е. безымянную, левую общую сонную, левую подключичную артерию) вдоль большей кривизны до базового уровня внутренней кривизны (x-mark) (рисунок 4B3–B8) микропарирующими пружинными ножницами.
- Закрепите плоскую аорту (просвет стороной вверх) в восковой посуде с помощью миниатюрных булавок и нанесите 1x DPBS до тех пор, пока она не покроет аорту, чтобы предотвратить ее высыхание (рисунок 4C).
ПРИМЕЧАНИЕ: (1) Важно сделать свернутую аорту плоской и закрепить ее по лицу без растяжения. Этот шаг займет несколько дней в зависимости от тяжести атеросклероза. (2) Для аорт от животных Apoe-/- или Ldlr-/- рекомендуется закрепить плоскую аорту на 24 ч. (3) Здесь протокол может быть приостановлен. - Очистите стекла микроскопа 70% этанолом и деликатными стеклоочистителями (рисунок 5А).
- Переместите аорту в прозрачный стеклянный микроскоп и поместите 15 капель соединения оптимальной температуры резания (OCT) на другой прозрачный стеклянный микроскоп (рисунок 5B).
- Осторожно поместите стеклянный микроскоп с соединением OCT над аортой и избегайте захвата пузырьков воздуха на слайде (рисунок 5C).
- Пометьте слайды именами образцов (рисунок 5D).
ПРИМЕЧАНИЕ: Установленные на поверхности аорты слайды могут храниться во влагооб камере при температуре 4 °C в течение нескольких месяцев.
10. Визуализация и количественная оценка поражения аорты лица (рисунок 6)
- Получайте цифровые микроснимки с помощью камеры, подключенной к световому микроскопу. Сохраняйте изображения с высоким разрешением, предпочтительно в формате файла изображения с тегами (TIFF) (рисунок 6A).
- Перенесите изображения всей аорты, окрашенной в лицо, на компьютер, оснащенный программным обеспечением ImageJ.
- В ImageJ выберите инструмент «Выделение от руки» и вручную обведите все масляные красные O-окрашенные налеты (интенсивные красные пятна) при нажатии клавиши «Alt» (для ПК с Windows) или «Shift» (для Mac). Затем нажмите «Измерить» в меню «Анализ», чтобы отобразить области поражения в окне результатов (рисунок 6B слева).
ПРИМЕЧАНИЕ: Существует несколько подводных камней количественной оценки атеросклеротических поражений: (1) любые небольшие кусочки окрашенного адвентициального жира, которые остались прикрепленными к аорте со стадии 8.7, могут давать ложный фон и мешать количественной оценке бляшек; (2) удаление части стенки аорты или повреждение аорты со стадий 6.4 и 8.7 может препятствовать количественной оценке зубного налета; (3) пузырьки и складки, образующиеся в аорте после монтажа (этап 9.8), могут препятствовать количественной оценке зубного налета; и (4) атеросклеротическая бляшка является 3D-явлением, и измерения, выполненные в 2D-плоскости, могут не отражать истинную степень бляшки. Помимо анализа области бляшек аорты на лице, рекомендуется отдельно анализировать размер бляшек в корне аорты, брахиоцефальной артерии, восходящей аорте и брюшной аорте8. - Обведите внешнюю линию границы аорты и нажмите «Измерить» в меню «Анализ», чтобы отобразить область аорты в окне результатов (рисунок 6B справа).
- Экспортируйте все измерения в файл Excel.
- Рассчитайте отношение площади бляшек от общей площади аорты и нормализуйте значение в процентах от общей площади поверхности Oil Red O.
- Рассчитайте соотношение площади бляшек у 8–10 apoe-/- и 8–10 TGFβR2iSMC-Apoe мышей. Представьте данные в среднем ± SEM (рисунок 6C).
- Выполните непарный t-тест Student для статистического анализа соотношения данных о площади бляшек по сравнению с другой группой мышей. Рассмотрим различия в средних значениях как значимые при p < 0,05.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
В этом протоколе атеросклеротические поражения у мышей TGFβR2iSMC-Apoe анализировали через 4 месяца на диете ГХГФ7. В дополнение к обширному атеросклерозу, у этих мышей развились как грудные, так и брюшные аневризмы аорты, как сообщалось ранее. По сравнению с мышами Apoe-/-, tGFβR2iSMC-Apoe мыши с стенками аорты показали тяжелый атеросклероз, что затрудняло рассечение поражений (рисунок 2C, D, E). Кроме того, аневризмы...
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Мыши с дефицитом аполипопротеина Е (Apoe) и рецептора липопротеинов низкой плотности (Ldlr) полезны для изучения развития и лечения атеросклероза. Исследователи могут оценить влияние генетики и терапевтических манипуляций на начало, прогрессирование и регрессию заболеваний, связанных с атеросклерозом, с помощью окрашивания Oil Red O всей аорты9. Окрашивание и количественная оценка поражения Aorta Oil Red O является конечной точкой золотого стандарта для исследований атеросклероза...
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы заявляют об отсутствии конкурирующих финансовых интересов.
Благодарности
Эта работа была поддержана, в частности, микрогрантом Объединенного биологического консорциума, предоставленным в рамках гранта NIH P30AR070253 (P.-Y.C.) и HL135582 (M.S.). Мы благодарны Р. Уэбберу и Л. Куну за содержание мышей, использованных в этом исследовании.
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| 1,5 мл Eppendorf tube | DENVILLE | C2170 | |
| 10 мл шприц | BD | 302995 | |
| 16% формальдегид | Polysciences | 18814-10 | |
| 70% этанол | VWR | RC2546.70-5 | Для очистки инструментов для вскрытия |
| черный воск для препарирования | CR Scientific | C3541 | |
| Кукурузное масло | Sigma | C8267 | Растворитель для тамоксифена |
| DNeasy Blood & Набор салфеток | QIAGEN | 69506 | Для выделения ДНК из уха |
| мыши Dulbecco' s Фосфатно-солевой буфер (1X DPBS), pH 7,4 | Gibco | 14190-144 | |
| Тонкие ножницы | Fine Science Tools | 14059-11 | Для разрезания кожи мыши и вскрытия грудной клетки |
| Fisherbrand Economy Простой стеклянный микроскоп Слайды Fisher Scientific | 12-550-A3 | ||
| Диета с высоким содержанием холестерина и высоким содержанием жиров | Исследования диет | D12108 | Для индуцирования атеросклероза |
| Визуализация программное обеспечение | Национальный институт здравоохранения | Имидж J | Количественная оценка поражения аорты |
| Изопропанол | VWR | JT9079-5 | |
| Кимвайпс | Фишер Научный | 06-666A | Для очистки стекла микроскопа предметные стекла Микродиссекционные |
| пружинные ножницы McPherson-Vannas | ROBOZ | RS-5602 | Для разделения сердца и аорты и разрезания аорты и ветвей |
| аортыПрограммное обеспечение для управления микроскопом | Olympus | DP Controller | Для визуализации аорты |
| Миниатюрные булавки | Fine Science Tools | 26002-10 | |
| Игла-25G | BD | 305124 | |
| Губка из нетканого | McKesson | 94442000 | |
| Масло красное O Sigma | O-0625 | Для окрашивания поражений атеросклероза | |
| Pall Acrodisc Стерильный шприц Фильтры с Супер Мембраной | VWR | 28143-312 | Для фильтрации рабочего Масло Красный О раствор |
| Пружинные ножницы | Fine Science Tools | 15021-15 | Для препарирования и очистки аорты |
| Статистическое программное обеспечение | GraphPad | Prism 8 | Статический анализ |
| Стереомикроскоп | Nikon | SMZ1000 | Для рассечения аорты |
| Стереомикроскоп | Olympus | SZX16 | Для визуализации аорты |
| Tamoxifen | Sigma | T5648 | Для индукции рекомбинации Cre-loxP |
| Fabric-Tek O.C.T Compound, Sakura Finetek | VWR | 25608-930 | |
| Пинцет Style 4 | Электронная микроскопия Sciences | 0302-4-PO | Для разрезания кожи мыши и вскрытия грудной клетки |
| Пинцет Style 5 | Электронная микроскопия Sciences | 0302-5-PO | Для препарирования и очистки Аорта |
Ссылки
- Lusis, A. J. Atherosclerosis. Nature. 407, 233-241 (2000).
- Emini Veseli, B., et al. Animal models of atherosclerosis. European Journal of Pharmacology. 816, 3-13 (2017).
- Plump, A. S., et al. Severe hypercholesterolemia and atherosclerosis in apolipoprotein E-deficient mice created by homologous recombination in ES cells. Cell. 71, 343-353 (1992).
- Zhang, S. H., Reddick, R. L., Piedrahita, J. A., Maeda, N. Spontaneous hypercholesterolemia and arterial lesions in mice lacking apolipoprotein E. Science. 258, 468-471 (1992).
- Ishibashi, S., et al. Hypercholesterolemia in low density lipoprotein receptor knockout mice and its reversal by adenovirus-mediated gene delivery. Journal of Clinical Investigation. 92, 883-893 (1993).
- Nakashima, Y., Plump, A. S., Raines, E. W., Breslow, J. L., Ross, R. ApoE-deficient mice develop lesions of all phases of atherosclerosis throughout the arterial tree. Arteriosclerosis Thrombosis. 14, 133-140 (1994).
- Chen, P. Y., et al. Smooth muscle cell reprogramming in aortic aneurysms. Cell Stem Cell. 26, 542-557 (2020).
- Andres-Manzano, M. J., Andres, V., Dorado, B. Oil Red O and Hematoxylin and Eosin Staining for Quantification of Atherosclerosis Burden in Mouse Aorta and Aortic Root. Methods in Molecular Biology. 1339, 85-99 (2015).
- Chen, P. Y., et al. Endothelial TGF-beta signalling drives vascular inflammation and atherosclerosis. Nature Metabolism. 1, 912-926 (2019).
- Mehlem, A., Hagberg, C. E., Muhl, L., Eriksson, U., Falkevall, A. Imaging of neutral lipids by oil red O for analyzing the metabolic status in health and disease. Nature Protocols. 8, 1149-1154 (2013).
- Ferruzzi, J., Madziva, D., Caulk, A. W., Tellides, G., Humphrey, J. D. Compromised mechanical homeostasis in arterial aging and associated cardiovascular consequences. Biomechanics and Modeling Mechanobiology. 17, 1281-1295 (2018).
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
