Все исследования проводились в соответствии с институциональными рекомендациями по уходу за животными.
1. Соображения и подготовка к эксперименту
- Используйте подходящий дубликатор импульсов (PD) для моделирования сердечного выброса через AV. ДР должны быть в состоянии вместить биологические материалы и быть очищенными.
- Используйте настройки PD, подходящие для тестирования AV: объем смещения 70 мл и 70 ударов в минуту (сердечный выброс 5 л/мин), 35% сердечного цикла в систоле, средний градиент трансклапанного давления 100 мм рт.ст., максимальный градиент давления 120 и минимальный градиент давления 80.
- В качестве жидкой среды используйте физиологический раствор комнатной температуры (0,9% NaCl).
- Найдите или создайте (с помощью 3D-печати или аналогичного метода) подходящие приспособления для установки AV свиньи для тестирования на PD.
- Используйте приспособления, смоделированные на основе приспособлений, поставляемых с дубликатором импульсов, со следующими характеристиками: убедитесь, что внутренний диаметр приспособления аналогичен диаметру исследуемого AV, длина крепления составляет не менее 2 см, а полезная ширина крепления составляет не менее 4 см (Рисунок 1).
- Используйте резиновые уплотнительные кольца в качестве прокладок на концах приспособлений.
- Получите образец сердца после кардиоэктомии (Рисунок 2A).
- Используйте образцы свиных сердец со скотобойни или отходы тканей животных, которые в остальном здоровы и не были частью каких-либо экспериментальных протоколов, влияющих на их сердце.
- Получение образца после кардиэктомии или посмертной кардиэктомии, включая рассечение верхней полой вены, нижней полой вены, главной легочной артерии (ПА), всех легочных вен и аорты в дистальной части дуги аорты.
ПРИМЕЧАНИЕ: Для этого эксперимента следует использовать свежие образцы, хранящиеся менее чем через 6 ч после вскрытия или хранящиеся в стерильном физиологическом растворе с 1% раствором антибиотика (пенициллина и стрептомицина) в холодильнике 4 °C до 7 дней. Ткани, зафиксированные формалином или глутаровым альдегидом, будут давать измененные гидродинамические результаты из-за повышенной жесткости.

Рисунок 1: Изготовленные на 3D-принтере приспособления для монтажа аортальных клапанов свиней на дубликаторе импульсов. Как отмечено в протоколе, длина крепления должна быть не менее 2 см, а полезная ширина крепления должна быть не менее 4 см. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.
2. Резекция правосторонних конструкций
- Рассеките ПА от аорты ножницами Метценбаума до тех пор, пока не станет видна ткань желудочка (рис. 2B).
- Рассекают и перевязывают шелковыми завязками обе коронарные артерии в месте их начала от пазух аорты, стараясь не сужать пазухи.
- Пересекают коронарные артерии дистальнее шелковых связей.
- Сделайте разрез правого желудочка (ПЖ) между аортой и ПА у основания клапана легочной артерии ножницами Метценбаума (рис. 2C).
- Начиная спереди, продолжайте разрез по окружности вдоль межжелудочковой перегородки, чтобы удалить свободную стенку ПЖ (рис. 2D, E).
- Продолжайте разрез кзади через кольцо трехстворчатого клапана вдоль межпредсердной перегородки, чтобы удалить всю ткань правого предсердия (Рисунок 2F).

Рисунок 2: Образец для кардиэктомии и резекции правосторонних структур. (А) Образец для кардиоэктомии. (B) Магистральная легочная артерия рассечена от аорты до тех пор, пока не будет видна ткань желудочков. (C) Разрез правого желудочка (ПЖ) у основания клапана легочной артерии. (D) Продолжение разреза вдоль межжелудочковой перегородки спереди. (E) Удаление стенки, свободной от ПЖ, путем продолжения разреза по окружности вдоль межжелудочковой перегородки. (F) Образец с удаленной правосторонней структурой. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы увидеть увеличенную версию этого рисунка.
3. Подготовка выходного тракта левого желудочка (ЛВОТ) к канюляции фиксатором ПД
- Разрез левого предсердия (ЛП) через устье правой легочной вены параллельно аорте ножницами Метценбаума (рис. 3А).
ПРИМЕЧАНИЕ: Несмотря на ограниченную вариабельность, анатомия легочной вены свиньи обычно заканчивается двумя устьями легочной вены, входящими в LA8.
- Продолжайте разрез по направлению к переднебоковой спайке митрального клапана (МВ), оставляя на стороне аорты манжету размером не менее 3 мм ткани предсердий.
- Обрежьте лишнюю ткань LA, сохраняя 3-миллиметровую манжету ткани предсердий на аорте и кольцо MV по окружности (рис. 3B).
- Расширьте разрез на левый желудочек (ЛЖ) через переднебоковую спайку МВ, стараясь сохранить переднебоковую сосочковую мышцу (рис. 3C).
- Отделяют сухожильные хорды от переднелатеральной папиллярной мышцы до заднего створка МВ, сохраняя прикрепления к передней створке МВ.
- Продолжайте разрез до верхушки сердца.
- Обрежьте лишнюю ткань ЛЖ ниже папиллярных мышц, сохранив обе сосочковые мышцы (рис. 3D).

Рисунок 3: Подготовка выходного тракта левого желудочка к канюляции с помощью дубликатора импульсов. (А) Разрез левого предсердия (ЛП) через устье правой легочной вены. (B) Обрезка избыточной ткани LA, сохранение манжеты предсердной ткани на аорте толщиной не менее 3 мм и поддержание кольца митрального клапана по окружности. (В) Расширение разреза на левый желудочек (ЛЖ) через переднебоковую спайку митрального клапана. (D) Удаление избыточной ткани ЛЖ ниже папиллярных мышц. Ножницы видны в правом верхнем углу изображения. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы увидеть увеличенную версию этого рисунка.
4. Подготовка аорты к канюляции с помощью фиксатора ПД
- Удалите лишнюю ткань лимфатической, соединительной или легочной артерии с аорты (рис. 4A).
- Разрез верхней части дуги аорты от нисходящей аорты до левой подключичной артерии ножницами Метценбаума (рис. 4Б).
- Продолжайте разрез на верхней стороне дуги аорты от левой подключичной артерии до брахиоцефального ствола (рис. 4C, D).
ПРИМЕЧАНИЕ: Ветви дуги аорты свиньи от дистального к проксимальному включают левую подключичную артерию и брахиоцефальный ствол, который дает начало правой подключичной артерии, правой сонной артерии и левой сонной артерии9.

Рисунок 4: Подготовка аорты к канюляции с помощью дубликатора импульсов. (А) Дуга аорты с удалением лишней ткани. Обратите внимание на два дугообразных сосуда в дуге аорты свиньи, брахиоцефальный ствол и левую подключичную артерию. (Б) Начало разреза по верхней части дуги аорты от нисходящей аорты до левой подключичной артерии. (C) Продолжение разреза вдоль верхней стороны дуги аорты от левой подключичной артерии до брахиоцефального ствола. (D) Завершенный разрез дуги аорты. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы увидеть увеличенную версию этого рисунка.
5. Канюляция ЛВОТ с приспособлением ПД
- Проверьте положение приспособления в LVOT и обрежьте лишнюю ткань ЛЖ.
- Вставьте приспособление в ЛВОТ под переднюю створку МВ.
- Оберните стену без LV вокруг прибора.
- Обрежьте лишнюю ткань LV, чтобы плотно обернуть приспособление.
- Удаляют половину толщины свободной стенки ЛЖ, начиная с межжелудочковой перегородки, сохраняя не менее 1 см эпикарда у свободного края для сохранения целостности линии шва (рис. 5А).
- Отрежьте 1 см ткани от верхнего угла пленки LV free (Рисунок 5А).
- Расположите приспособление в LVOT так, чтобы отверстие для крепления опорного стержня находилось на расстоянии 1 см позади разреза НН (Рисунок 5B).
- Следите за тем, чтобы приспособление не вставлялось слишком глубоко в LVOT так, чтобы оно расширяло затрубное пространство AV.
- Прикрепите переднюю створку MV к приспособлению с помощью одной или двух 6-дюймовых стяжек-молний, расположенных между сухожилиями хорды створки (Рисунок 5C).
- Зашить свободную стенку LV вокруг приспособления (Рисунок 5D).
- Начните с пришивания манжеты ткани LA на аорте к кольцу MV с помощью простого ходового шва иглой с коническим концом.
- Продолжайте выполнение стежка на ЛЖ, не разрывая ткань ЛЖ.

Рисунок 5: Канюляция выходного тракта левого желудочка с помощью дубликатора импульсов. (А) Удаляется половина толщины свободной стенки ЛЖ с сохранением 1 см эпикарда по свободному краю. Пунктирной линией обозначена область 1 см, которую необходимо удалить от верхнего угла свободной стеновой пленки LV. (B) Отверстие для крепления опорного стержня расположено на расстоянии 1 см позади разреза свободной стенки LV. (C) Стяжка-молния, прикрепляющая переднюю створку MV к проксимальному креплению. (D) Свободная стенка LV, зашитая вокруг прибора. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы увидеть увеличенную версию этого рисунка.
6. Канюляция аорты с фиксатором ЧР и окончательная подготовка к тестированию ЧР
- Измерьте диаметр AV с помощью расширителей Хегара, чтобы помочь в интерпретации результатов тестирования частичных разрядов.
- Определите нейтральное положение аорты, сняв образец со стола, взявшись за аорту (Рисунок 6А).
- Вставьте приспособление PD в аорту, следя за тем, чтобы отверстия для крепления стержня совпадали в нейтральном положении аорты.
- Проверьте длину образца, вставив опорные стержни.
- Закрепите фиксатор PD на аорте с помощью одной или двух 6-дюймовых стяжек (Рисунок 6B).
- Закрепите LVOT вокруг приспособления PD с помощью одной или двух 8-дюймовых стяжек-молний.
- Закрепите опорные стержни на месте с помощью винтов, входящих в комплект PD.
- Поместите образец в PD и начните испытание (Рисунок 6C, Видео 1 и Видео 2).
- При необходимости зашивайте все протечки.

Рисунок 6: Канюляция аорты и тестирование в дубликаторе импульсов. (А) Подъем образца со стола за аорту для определения нейтрального положения аорты. (B) Дистальное крепление в аорте с помощью застежек-молний. (C) Образец, установленный в дубликаторе импульсов для гидродинамических испытаний. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы увидеть увеличенную версию этого рисунка.
7. Проведите экспериментальную процедуру
ПРИМЕЧАНИЕ: Выполните экспериментальные процедуры, такие как процедура Одзаки,как описано ранее 5,6,7, и повторите тестирование ЧР.
- Если ткань пересохла во время процедуры, затяните стяжки и укрепите линию шва по мере необходимости.
8. Длительное хранение образца (при желании)
- Поместить образец в формалин 10% на 168 ч (1 неделя)10,11.
- После фиксации ткани образец промывают деионизированной водой и помещают в этиловый спирт 70% для длительного хранения.