Методическая статья

Разделение и дифференциальная характеристика кишечных микробных внеклеточных везикул у чувствительных к соли крыс в условиях диеты с высоким содержанием соли

DOI:

10.3791/68279

⸱

6 июня 2025 г.

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1School of Medical Technology, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 2Pathology Department, Suining Central Hospital, 3School of Health Preservation and Rehabilitation, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 4Department of Pharmacy, Affiliated Sport Hospital of CDSU, 5Department of Neck, Shoulder, Waist, and Leg Pain, Sichuan Province Orthopedic Hospital, 6Neijiang Hospital of Traditional Chinese Medicine Affiliated to Chengdu University of Traditional Chinese Medicine

* These authors contributed equally

В этой статье

Краткое содержание

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Протокол описывает выделение кишечных микробных EV от чувствительных к соли крыс, которых кормили HSD с использованием центрифугирования градиента плотности. ВВ характеризовали с помощью отслеживания наночастиц, анализов TEM, LPS/BCA и секвенирования 16S рРНК для анализа размера, морфологии, состава и происхождения микробиоты.

Аннотация

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Высокое потребление соли является основным фактором риска развития гипертонии, и ее основной механизм может быть тесно связан с внеклеточными везикулами (ВВ), секретируемыми микробиотой кишечника. Эти ВВ, вырабатываемые микробиотой кишечника, содержат различные биологически активные компоненты, которые могут играть решающую роль в развитии гипертонии, вызванной диетой с высоким содержанием соли (HSD). Чтобы исследовать этот механизм, мы разработали эффективный метод экстракции, основанный на центрифугировании с градиентом плотности, для выделения ВВ из микробиоты кишечника чувствительных к соли крыс, которых кормили HSD. С помощью анализа размера частиц, просвечивающей электронной микроскопии (ПЭМ) и обнаружения липополисахаридов (ЛПС) мы определили градиентное распределение ВВ кишечной микробиоты и добились точной экстракции. Кроме того, секвенирование гена 16S рРНК было использовано для анализа происхождения и различий в составе ВВ между нормальной группой и группой HSD, что выявило влияние высокого потребления соли на генетические характеристики ВВ кишечной микробиоты. Это исследование предоставляет ценные инструменты и научные знания о механизмах микробиоты кишечника, лежащих в основе солевой гипертензии, и предлагает новые перспективы для профилактики и лечения связанных с ней заболеваний.

Введение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Микробиота кишечника, также известная как микрофлора микробиоты кишечника или микроэкология кишечника, представляет собой комплекс из десятков тысяч микроорганизмов, расположенных в биологическом желудочно-кишечном тракте и играющих важнейшую роль в поддержании здоровья человека1. В последние годы в ходе дальнейших исследований было установлено, что микробиота кишечника может продуцировать внеклеточные везикулы (ВВ)2. ВВ представляют собой небольшие везикулы, выделяемые клетками, которые переносят различные молекулы в клетке, такие как белки, нуклеиновые кислоты и липиды 3,4. Они могут взаимодействовать с другими микробами5, эпителиальными клетками кишечника и даже отдаленными тканями и органами6, тем самым влияя на здоровье человеческого организма 7,8. Существует тесная связь между ВВ, вырабатываемыми этой кишечной микробиотой, и рационом питания9.

ВВ, вырабатываемые кишечной микробиотой, могут быть важными факторами, с помощью которых диета с высоким содержанием соли (HSD) влияет на здоровье организма. HSD не только напрямую нарушает баланс кишечноймикробиоты10, что приводит к значительному сокращению количества полезных бактерий (таких как Lactobacillus)11, но и способствует размножению вредных бактерий (таких как Bacteroides и т. д.)12. Этот дисбаланс снижает барьерную функцию кишечника и увеличивает риск воспаления кишечника. Кроме того, HSD также влияет на кислотно-щелочной баланс и всасывание питательных веществ в кишечнике, изменяя метаболическую активность13 кишечной микробиоты, например, снижая выработку короткоцепочечных жирных кислот14,15 с множественными физиологическими функциями.

Эти изменения не только влияют на здоровье кишечника, но и могут косвенно регулировать производство и высвобождение ВВ и изменять состав и функцию ВВ. Среда с высоким содержанием соли может влиять на нормальные физиологические функции кишечных клеток, включая высвобождение и транспорт ВВ, тем самым нарушая роль ВВ в передаче межклеточной информации и иммунной регуляции. В то же время воспаление кишечника может способствовать развитию различных ВВ с особыми функциями16 и распространяться по всему организму через ось кишечник-орган и другими путями 17,18, что тесно связано с возникновением и развитием гипертонической болезни19,20, сердечно-сосудистых21 и цереброваскулярных заболеваний22,23, ожирения24,25, сахарного диабета26 и другие хронические заболевания.

Таким образом, общая цель данного исследования заключалась в разработке эффективного и надежного метода извлечения ВВ из микробиоты кишечника чувствительных к соли крыс, которых кормили HSD, и систематическом изучении их физических свойств, состава и функций. В связи с особенностями значительного повышения артериального давления после диеты с высоким содержанием соли, были отобраны чувствительные к соли крысы и выявлено влияние HSD на микробиоту кишечника EV путем построения эффективного метода экстракции. Метод был основан на центрифугировании с градиентом плотности и сочетал в себе различные методы динамической идентификации, такие как определение размера частиц, измерение LPS/BCA, просвечивающая электронная микроскопия и протеомный анализ. Протокол направлен на выявление влияния HSD на микробиоту кишечника EV и его механизмы при сердечно-сосудистых заболеваниях. Обладая высокой эффективностью, воспроизводимостью и широкой применимостью, этот подход не только является важным инструментом для изучения механизма ВВ кишечной микробиоты при солевой гипертензии, но и закладывает теоретическую основу для разработки стратегий вмешательства в заболевания на основе ВВ. Благодаря этому исследованию мы надеемся открыть новые возможности для профилактики и лечения сердечно-сосудистых заболеваний, таких как гипертония27,28.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Протокол

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Это экспериментальное исследование на животных соответствует соответствующим этическим принципам и международным стандартам. Исследования с участием животных были одобрены Комитетом по благополучию и этике лабораторных животных Университета китайской медицины в Чэнду (учреждение: Университет китайской медицины в Чэнду; номер протокола: 2018-21).

1. Подготовка животных и режим питания

  1. Акклиматизировать 6-недельных самцов чувствительных к соли крыс Dahl, масса тела 180-200 г, выращивая при влажности 50% ± 10%; световой цикл 12 ч / 12 ч; 20,0 ± 2,0 °C в течение 1 недели в определенных условиях, свободных от патогенов.
  2. Впоследствии разделите крыс поровну на две группы (n = 6). Обеспечьте каждой группе различную диету в течение 6 недель: нормальную солевую диету (NSD) с 0,5% хлорида натрия и HSD с 8% хлорида натрия, которая обычно используется в опубликованных исследованиях 29,30,31. Мыши имели неограниченный доступ к пище и воде на протяжении всего исследования.

2. Мониторинг артериального давления

ПРИМЕЧАНИЕ: Плетизмография хвостовой манжеты использовалась в качестве неинвазивного метода измерения артериального давления, а измерение объемного давления (VPR) использовалось при измерении артериального давления по объему хвостовой крови.

  1. Поместите крыс по отдельности в небольшие клетки с опилками, нагретые в течение 10 минут примерно до 37 °C и поместите в специальное ограничительное устройство для грызунов с регулируемым носом и дверцей для входа животных. Поместите крыс на грелку в положение лежа, чтобы поддерживать температуру их тела на уровне 37 °C.
  2. Подключите датчик VPR к нижней части хвостового оперения и установите не менее 10 циклов адаптации для стабилизации BP28.
    1. Набейте надувную манжету на корень хвоста и поместите плетизмографический датчик (или фотоэлектрический датчик) внизу. Медленно надувайте до выше систолического давления (обычно 200 мм рт.ст.), а затем медленно отпускайте. Прибор автоматически определяет значение давления исчезновения пульсовой волны (систолическое артериальное давление) и восстановления (диастолическое артериальное давление). Отмерьте 3-5 раз подряд и возьмите среднее значение.
  3. Обучите всех крыс приспособиться к процедуре ограничения и проведите это исследование в тихой лаборатории около 9 утра, чтобы свести к минимуму влияние циркадных вариаций.
  4. Измеряйте систолическое артериальное давление (САД) и диастолическое артериальное давление (ДАД) через день перед жертвой. Оценка среднего артериального давления (MAP) по САД и ДАД
    MAP = (SBP + 2 DBP)/3

3. Извлечение электромобилей

  1. Забор образцов
    1. Смочите стерильный ватный тампон в 75% спирте и с его помощью стимулируйте анальное отверстие крысы. Стимуляция была предназначена для стимуляции перистальтики кишечника и расслабления анального сфинктера, тем самым способствуя дефекации. После того, как кал будет выведен, соберите его с помощью стерильных щипцов в стерильные контейнеры соответствующего размера и немедленно храните при температуре -80 °C.
  2. Подготовка образцов
    1. С помощью ложки переложите 5 г кала в предварительно взвешенную центрифужную пробирку объемом 50 мл. Добавьте в пробирку 50 мл предварительно нагретого PBS без эндотоксинов 37 °C (максимальная концентрация образца 10%) и вращайте в течение 30 минут. Охладите высокоскоростную центрифугу до 4 °C.
    2. Центрифугируйте при давлении 8 000 x g в течение 15 минут после симметричного размещения образцов, чтобы центрифуга могла сбалансироваться. После центрифугирования аспирируйте надосадочную жидкость и перенесите ее в новую стерильную центрифужную пробирку.
    3. Снова центрифугируйте при 8 000 x g в течение 15 минут. Аспирируйте надосадочную жидкость и используйте ее для дальнейшего анализа.
  3. Приготовление сырого экстракта
    1. Используйте стерильный фильтрующий блок 0,22 мкм. Поместите фильтрующий блок на лед и крепко удерживайте вакуумный насос. Полученную надосадочную жидкость перенесите в верхнюю часть фильтра. Включите вакуумный насос для сбора отфильтрованных образцов.
    2. Переведите фильтрат в центробежный фильтр (10 кДа, 15 мл), центрифугируйте при 4 °C, 3 000 x g в течение 30 мин и сконцентрируйте образец не менее чем до 1400 μл.
    3. Соберите концентрированный образец и, при необходимости, разбавьте его до 1400 мкл с помощью предварительно охлажденного PBS, не содержащего эндотоксинов. Держите образец на льду сразу после разведения.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Сырой экстракт можно использовать сразу или хранить при температуре -80 °C в течение нескольких месяцев.
  4. Разделение электромобилей
    1. Подготовьте градиентный буфер A и градиентный буфер B, как описано ниже. Подготовьте буфер за один день, так как для полного растворения соединения требуется несколько часов. Приготовленный буфер можно хранить при температуре 4 °C в течение 6 месяцев.
      1. Приготовление градиентного буфера А: Растворить 0,25 М сахарозы, 6 мМ ЭДТА и 60 мМ Трис в 800 мл воды, не содержащей эндотоксинов, путем перемешивания магнитным миксером с помощью соляной кислоты, скорректированного до 7,4. Разбавьте до 1 л водой, не содержащей эндотоксинов. Используйте бутылочный фильтр 0,22 мкм для фильтрации буфера.
      2. Приготовление градиентного буфера В: Растворить 0,25 М сахарозы, 1 мМ ЭДТА и 10 мМ Трис в 800 мл воды, не содержащей эндотоксинов, путем перемешивания магнитным миксером с pH до 7,4 с помощью соляной кислоты. Разбавляют до 1 л водой, не содержащей эндотоксинов. Используйте бутылочный фильтр длиной 0,22 мкм для фильтрации буфера.
    2. Смешайте 1 объем градиентного буфера А и 5 объемов градиентной среды плотности (среда представляет собой 60% раствор йодиксанола) для приготовления рабочего раствора.
    3. Приготовление раствора йодиксанола (10%, 20%, 40%): Для приготовления 10% раствора йодиксанола смешать 1 единицу рабочего раствора и 4 единицы буфера В; для 20% раствора йодиксанола смешать 2 единицы рабочего раствора и 3 единицы буфера Б; для 40% раствора йодиксанола смешайте 4 единицы рабочего раствора и 1 единицу буфера В. Приготовьте каждый раствор в свежем виде и храните на льду.
      Примечание: Для каждого эксперимента должны быть подготовлены свежие рабочие растворы, и может быть подготовлен дополнительный объем растворов на 10% с учетом экспериментальной ошибки.
    4. Раствор, приготовленный на шаге 3.3.3, смешать с 7 мл градиентной среды плотности до получения 50% раствора йодиксанола.
    5. Чтобы приготовить градиент плотности, добавьте раствор трипанового синего к 40% раствору и 10% (масс./об.) раствору йодиксанола, чтобы обеспечить четкую границу между отдельными слоями.
    6. Перенесите 8 мл 50% раствора йодиксанола на дно тонкостенной полипропиленовой центрифужной пробирки. Наклоните пробирку на 70° и перенесите 8 мл 40% раствора йодиксанола на поверхность жидкости. Добавьте 8 мл 20% раствора йодиксанола, затем 7 мл 10% раствора йодиксанола и, наконец, 2 мл PBS, не содержащего эндотоксинов.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Подготовка градиента плотности требует практики. Качество градиента плотности оказывает большое влияние на результаты экспериментов. Не ставьте трубку вертикально между различными этапами процесса добавления, так как это отрицательно влияет на качество градиента плотности.
    7. Предварительно охладите центрифугу и поместите подготовленный градиент плотности в ультрацентрифугу. Входные параметры для начала, значения параметров: 100 000 x g, 20 ч, 10 °C.
    8. Для ручного разделения по градиентной плотности медленно набирайте 2 мл раствора из центра поверхности системы, содержащей в общей сложности 34 мл жидкости. Каждые 2 мл являются градиентом, таким образом, решение градиента плотности делится на 17 градиентов.
    9. Переложите фракции плотности в стерильную пробирку с образцом с помощью пипетки и сразу же поместите их на лед. Зажмите трубку центрифуги между большим и указательным пальцами, чтобы она оставалась в вертикальном положении.
  5. Утилизация электромобилей
    1. Используя полностью автоматизированную систему экстракции EVs, которая применяет колебания отрицательного давления через систему ультразвуковых колебаний с двойной связью на чипе ультрафильтрации, удаляет примеси нуклеиновых кислот и белков в образце через нанопоры и перехватывает EV, что приводит к обогащению и очистке EVs.
      1. Удалите фильтрат на шаге 3.4.7 и добавьте его в чип ультрафильтрации.
      2. Работайте с прибором в соответствии с инструкциями по прибору и соберите отфильтрованный фильтрат, а именно раствор, обогащенный экзосомами. Основной процесс показан на рисунке 1.

4. Идентификация электромобилей

  1. Определение размера и концентрации частиц
    1. Оцените распределение по размерам и дзета-потенциал с помощью счетчика нанокулонометра на основе резистивного импульсного зондирования (RPS). Для этого эксперимента выберите нанопористые чипы с диапазоном измерения 60-200 нм. Кроме того, оцените распределение частиц по размерам и дзета-потенциал EV с помощью счетчика нанобиблиотек.
      1. Возьмите соответствующее количество раствора EVs и разведите его в (1/10, 1/100, 1/10000, 1/10000).
      2. Для тестирования на прибор были нанесены различные разбавления растворов электромобилей.
      3. Для получения более точных данных был выбран мультипликатор разрежения с лучшей стабильностью и повторно протестирован.
  2. Анализ ЛПС и ВСА
    1. Анализ BCA: Лизируйте EV с помощью буфера RIPA, а затем разделите белки. Определите содержание белка в EV с помощью набора для определения концентрации белка BCA.
    2. Анализ ЛПС: Используя набор для обнаружения эндотоксинов, добавьте образцы, детектор эндотоксинов и хромогенные в соответствии с инструкциями набора. Измерьте абсорбцию на длине волны 545 нм и рассчитайте экспрессию LPS наружных везикул в соответствии со стандартной кривой.
  3. Оценка ПЭМ: Для отрицательного окрашивания и анализа ПЭМ нанесите образцы на люминесцентную медную решетку, покрытую непрерывной углеродной пленкой, и окрасьте 0,75% уранилформиата. Для крио-ЭМ электромобили поглощают в 300-мешную углеродную сетку EM с гидрофильной поверхностью и замораживают в жидком азоте. Наблюдайте и анализируйте сетки с помощью Cryo-TEM и записывайте изображения с увеличением 22 00032.
  4. Характеристика белков: Лизируйте EV с помощью буфера RIPA и затем разделите белки. Определите концентрацию белка с помощью набора для анализа белка BCA, отделите равное количество белка от каждого образца с помощью SDS-PAGE и окрасьте раствором синего красителя Кумасси после электрофореза для визуализации белковых профилей33,34.
  5. Секвенирование и анализ S: Извлеките геномную ДНК из образцов кала с помощью набора для экстракции фекальной ДНК. Оценка целостности и концентрации ДНК с помощью электрофореза в агарозном геле и спектрофотометра. Амплифицируйте V3 - V4 гена 16S рРНК с помощью универсальных праймеров, очистите продукты ПЦР, количественно определите их и секвенируйте на платформе Illumina. Выполнение анализа данных с помощью конвейера QIIME235.
    1. Классификация вариантов ампликонных последовательностей (ASV) с помощью DADA2 и сопоставление с базой данных Silva с помощью алгоритма VSEARCH. Используйте анализ α-разнообразия для оценки видового богатства и разнообразия в выборках, в основном с использованием таких индексов, как индекс Шеннона и индекс Chao1. Анализ β-разнообразия сравнивает состав микробного сообщества между образцами и обычно визуализируется с помощью анализа главных координат (PCoA). Используйте методы дифференциального анализа, такие как линейный дискриминантный анализ величины эффекта (LEfSe) и анализ вулканических графиков, для идентификации микробных таксонов со значительно различающимися условиями или между группами.

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Результаты

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Концентрации ВВ определяли в различных фракциях (рис. 2А). Экспериментальные результаты показали, что концентрация EV демонстрирует типичную нормальную картину распределения в серии решений градиента плотности (рис. 2B). В частности, во фракции 9 концентрация EV достигла наивысшей точки (3,85 x 109), что позволяет предположить, что основная доля распределения EV может составлять 936.

Для определения ...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Обсуждение

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

В этом исследовании мы сосредоточились на ВВ микробиоты кишечника у чувствительных к соли крыс на HSD и добились ряда ключевых достижений. Во-первых, был успешно разработан эффективный метод экстракции, основанный на центрифугировании с градиентом плотности, для выделения ВВ из чувствительной к соли микробиоты кишечника крыс на HSD, и большинство компонентов, не относящихся к ВВ, были выделены с помощью тщательного, стандартизированного экспериментального процесса на животных и обработки...

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Раскрытие информации

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Авторы заявляют, что у них нет известных конкурирующих финансовых интересов или личных отношений, которые могли бы повлиять на работу, описанную в этой статье.

Благодарности

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Эта работа была поддержана Национальным фондом естественных наук Китая (82205240), Фондом естественных наук провинции Сычуань (2025ZNSFSC1836) и Клиническим базовым проектом Ортопедической больницы провинции Сычуань (PY202414).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Материалы

Список материалов, использованных в этой статье
ИмяКомпанияКаталожный номерКомментарии
<сильный>Основные расходные материалы
центробежный фильтр (10 нДа 2 мл)миллипорUFC903096
50 мл)BKMAN20220404
центрифугаBECKMAN COULTERZ30815SCA
система вакуумной фильтрацииBiosharp24902581
Reagents
Chromogenic LAL Endotoxin Analysis KitBeyotime022124240705
Coomassie Blue Fast Staining SolutionBeyotimeZ972241010
EDTADamas-betaP3117308
Enhanced BCA Protein Analysis KitBeyotimeA006241112
этанолKESH
HCl
OptiPrep (60% масс./об., йодиксанол)Serumwerk00124
PBSLabshark130114005
фосфовольфрамовой кислотойRUIXIN
СахарозаDamas-betaP1917057
Tris (VWR)Damas-betaP3061764
Раствор для окрашивания трипана в синий цвет (0,4%)BeyotimeBD07242904
Equipment
БиомикроскопMoticBA210Цифровая настольная
центрифугаCenceCHT210R
Настольная высокоскоростная микроцентрифугаDLABD3024
Алюминиевый ротор с фиксированным углом наклона + центробежная чашка 500 млCence
Высокоточные электронные весыSKRBN-200
Ламинарный проточный шкафNantong Hunan Scientific Instrument Co., Ltd.SW-CJ-2FDS
SW 32.1 Ti Поворотное ведро + SW 32.1 Ti Роторное ведроBECKMAN COULTER
Просвечивающий электронный микроскопJEOLJEM-1400FLASH
Вращатель
УльтрацентрифугаBECKMAN COULTEROptima XE-100
Система сверхчистой водыULPHWUPR-II-15TNZ
Водо-цикуляционный многофункциональный вакуумный насосQiang QiangSHZ-D(III)
Центрифуга для (Absorbance Microplate Reader SpectraMax ABP01690 трубки

Ссылки

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Thursby, E., Juge, N. Introduction to the human gut microbiota. Biochem J. 474 (11), 1823-1836 (2017).
  2. Aschtgen, M. S., et al. Rotation of Vibrio fischeri Flagella Produces Outer Membrane Vesicles That Induce Host Development. J Bacteriol. 198 (16), 2156-2165 (2016).
  3. Gurung, S., Perocheau, D., Touramanidou, L., Baruteau, J. The exosome journey: from biogenesis to uptake and intracellular signalling. Cell Comm Signal. 19 (1), 47(2021).
  4. Avila-Calderón, E. D., et al. Outer Membrane Vesicles of Gram-Negative Bacteria: An Outlook on Biogenesis. Front Microbiol. 12, 557902(2021).
  5. Melo-Marques, I., Cardoso, S. M., Empadinhas, N. Bacterial extracellular vesicles at the interface of gut microbiota and immunity. Gut Microbes. 16 (1), 2396494(2024).
  6. Kim, N. Y., et al. Effect of gut microbiota-derived metabolites and extracellular vesicles on neurodegenerative disease in a gut-brain axis chip. Nano Converg. 11 (1), 7(2024).
  7. Ahmadi Badi, S., et al. Microbiota-Derived Extracellular Vesicles as New Systemic Regulators. Front Microbiol. 8, 1610(2017).
  8. Barathan, M., Ng, S. L., Lokanathan, Y., Ng, M. H., Law, J. X. The Profound Influence of Gut Microbiome and Extracellular Vesicles on Animal Health and Disease. Int J Mol Sci. 25 (7), 4024(2024).
  9. Maukonen, J., Saarela, M. Human gut microbiota: does diet matter. Proc Nutri Soc. 74 (1), 23-36 (2015).
  10. Bier, A., et al. A High Salt Diet Modulates the Gut Microbiota and Short Chain Fatty Acids Production in a Salt-Sensitive Hypertension Rat Model. Nutrients. 10 (9), 1154(2018).
  11. Aghamohammad, S., et al. Anti-inflammatory and immunomodulatory effects of Lactobacillus spp. as a preservative and therapeutic agent for IBD control. Immun Inflamm Dis. 10 (6), e635(2022).
  12. Dong, Z., et al. The Effects of High-Salt Gastric Intake on the Composition of the Intestinal Microbiota in Wistar Rats. Med Sci Monit. 26, e922160(2020).
  13. Yan, X., et al. Intestinal Flora Modulates Blood Pressure by Regulating the Synthesis of Intestinal-Derived Corticosterone in High Salt-Induced Hypertension. Circ Res. 126 (7), 839-853 (2020).
  14. Wang, X., Lang, F., Liu, D. High-Salt Diet and Intestinal Microbiota: Influence on Cardiovascular Disease and Inflammatory Bowel Disease. Biology. 13 (9), 674(2024).
  15. Qi, L., et al. Microbiome-metabolome analysis insight into the effects of high-salt diet on hemorheological functions in SD rats. Front Nutri. 11, 1408778(2024).
  16. Wu, Q., et al. Insights into the unique roles of extracellular vesicles for gut health modulation: Mechanisms, challenges, and perspectives. Curr Res Microb Sci. 7, 100301(2024).
  17. Zhang, H., et al. Effects of bacterial extracellular vesicles derived from oral and gastrointestinal pathogens on systemic diseases. Microbiol Res. 285, 127788(2024).
  18. Wang, H. X., Wang, Y. P. Gut Microbiota-brain Axis. Chinese Med J. 129 (19), 2373-2380 (2016).
  19. Huang, S., et al. A cross-tissue transcriptome association study identifies key genes in essential hypertension. Front Genet. 14, 1114174(2023).
  20. Gao, H., et al. Microbial DNA Enrichment Promotes Adrenomedullary Inflammation, Catecholamine Secretion, and Hypertension in Obese Mice. J Am Heart Assoc. 11 (4), e024561(2022).
  21. Chen, P. Gut Microbiota and Pathogenesis of Organ Injury. , Springer. Singapore. (2020).
  22. Xie, N., et al. hPSCs-derived brain organoids for disease modeling, toxicity testing and drug evaluation. Exp Neurol. 385, 115110(2024).
  23. Liu, N., et al. The underlying mechanisms of DNA methylation in high salt memory in hypertensive vascular disease. Sci Rep. 14 (1), 925(2024).
  24. Li, M., et al. Wheat β-glucan reduces obesity and hyperlipidemia in mice with high-fat and high-salt diet by regulating intestinal flora. Int J Biol Macromol. 288, 138754(2024).
  25. Kerem, G., et al. Small intestinal microbiota composition altered in obesity-T2DM mice with high salt fed. Sci Rep. 13 (1), 8256(2023).
  26. Díez-Sainz, E., Milagro, F. I., Riezu-Boj, J. I., Lorente-Cebrián, S. Effects of gut microbiota-derived extracellular vesicles on obesity and diabetes and their potential modulation through diet. J Physiol Biochem. 78 (2), 485-499 (2022).
  27. Wu, S., et al. Liuzijue training improves hypertension and modulates gut microbiota profile. Front Cardiovasc Med. 10, 1075084(2023).
  28. Qi, L. M., et al. Salvia miltiorrhiza bunge extract improves the Th17/Treg imbalance and modulates gut microbiota of hypertensive rats induced by high-salt diet. J Funct Foods. 117, 106211(2024).
  29. Wilck, N., et al. Salt-responsive gut commensal modulates T(H)17 axis and disease. Nature. 551 (7682), 585-589 (2017).
  30. Jiang, X., et al. Intestinal Gastrin/CCKBR (Cholecystokinin B Receptor) Ameliorates Salt-Sensitive Hypertension by Inhibiting Intestinal Na(+)/H(+) Exchanger 3 Activity Through a PKC (Protein Kinase C)-Mediated NHERF1 and NHERF2 Pathway. Hypertension. 79 (8), 1668-1679 (2022).
  31. Zheng, T., et al. Hypertension of liver-yang hyperactivity syndrome induced by a high salt diet by altering components of the gut microbiota associated with the glutamate/GABA-glutamine cycle. Front Nutr. 9, 964273(2022).
  32. Mulligan, S. K., et al. Multiplexed TEM Specimen Preparation and Analysis of Plasmonic Nanoparticles. Microsc Microanal. 21 (4), 1017-1025 (2015).
  33. Olson, B. Assays for Determination of Protein Concentration. Curr Protoc Pharmacol. 73, A.3a.1-a.3a.32 (2016).
  34. Matsumoto, H., Haniu, H., Komori, N. Determination of Protein Molecular Weights on SDS-PAGE. Methods Mol Biol. 1855, 101-105 (2019).
  35. Sanschagrin, S., Yergeau, E. Next-generation Sequencing of 16S Ribosomal RNA Gene Amplicons. J Vis Exp. (90), e51709(2014).
  36. Tulkens, J., De Wever, O., Hendrix, A. Analyzing bacterial extracellular vesicles in human body fluids by orthogonal biophysical separation and biochemical characterization. Nat Protoc. 15 (1), 40-67 (2020).
  37. Ruhal, R., Kataria, R. Biofilm patterns in gram-positive and gram-negative bacteria. Microbiol Res. 251, 126829(2021).
  38. Maldonado, R. F., Sá-Correia, I., Valvano, M. A. Lipopolysaccharide modification in Gram-negative bacteria during chronic infection. FEMS Microbio Rev. 40 (4), 480-493 (2016).
  39. Honda, K., Littman, D. R. The microbiota in adaptive immune homeostasis and disease. Nature. 535 (7610), 75-84 (2016).
  40. Guzik, T. J., et al. Role of the T cell in the genesis of angiotensin II induced hypertension and vascular dysfunction. J Exp Med. 204 (10), 2449-2460 (2007).
  41. Huang, J., et al. Extracellular vesicles as a novel mediator of interkingdom communication. Cytokine Growth Factor Rev. 73, 173-184 (2023).
  42. Li, W., et al. Alleviation of colitis by honeysuckle MIR2911 via direct regulation of gut microbiota. J Control Release. 376, 123-137 (2024).

Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на повторное использование текста или иллюстраций этой статьи JoVE

Запросить разрешение

Теги

Gut Microbial VesiclesExtracellular VesiclesDensity Gradient CentrifugationHigh Salt DietSalt Sensitive RatsTransmission Electron MicroscopyNanoparticle TrackingLipopolysaccharide Detection16S rRNA SequencingHypertension Mechanism

Похожие статьи