MALDI пробоподготовки: ультра тонкий слой Метод

Добро пожаловать в учебное пособие CHI Lab по методу ультратонких слоев, который особенно полезен для точного определения массы белков. Из-за чувствительного характера масс-спектрометрии мы используем только реагенты класса ВЭЖХ, а также неопудренные латексные или нитриловые перчатки для очистки пластины. Смойте поочередно метаноловой водой, а затем снова метанолом.

В перерывах между каждым полосканием аккуратно вытирайте излишки растворителя салфеткой для линз. Вы можете повторять эти шаги промывки столько раз, сколько необходимо, чтобы получить чистую тарелку. А после очистки и высыхания, тарелку следует использовать немедленно.

Нанесите и распределите от 20 до 30 микролитров тонкого слоя раствора подложки по чистой пластине MALDI. Здесь мы используем наконечник для пипетки P two 50 для равномерного распределения раствора, избегая при этом царапин на пластине. Когда тонкий слой высохнет, удалите все оставшиеся капли воды, если они есть, аккуратно промокнув салфеткой.

Затем аккуратно протрите тарелку одним плавным движением салфеткой Кима, чтобы правильно сформировать тонкий слой. Наконец, очистите края пластины, чтобы не загрязнить масс-спектрометр. Очень важно протестировать тонкий слой перед нанесением образца.

Если тестовое пятно слишком долго сохнет и кристаллы не однородны, проблема может заключаться в самом тонком слое или матричном растворе, очистите пластину, повторно нанесите тонкий слой и повторите тест. При нанесении пятен на тонкий слой вы не хотите, чтобы ваши пятна испарились до сухости. Вместо этого, как только кристаллизация замедлится и прекратится, удалите избыток растворителя.

При использовании вакуумного аспиратора присутствие загрязняющих веществ, таких как соли и моющие средства, а также высокая концентрация аналита могут препятствовать кристаллизации. Дальнейшее разбавление образца может улучшить кристаллизацию Найдите муравьев в непосредственной близости от образца. Это позволит провести псевдовнутреннюю калибровку, при которой пластина перемещается из точки отбора образца в точку калибровки.

При сборе образцов, добавляя в спектр несколько лазерных снимков CAS, такой подход гарантирует более высокую точность калибровки массы, чем только внешняя калибровка. Очень важно смыть любые загрязнения, такие как соль или моющее средство, которые могут помешать анализируемому веществу. Ионизация. Для этого капните ледяной холод, 0,1% Tri Fluor уксусной кислоты в ВЭЖХ, отсортируйте воду прямо на пятна.

Удалите моющий раствор с помощью вакуумного аспиратора, как показано здесь. Этот метод позволяет получить превосходные спектры как мембранных, так и растворимых белков.