Нильское красное окрашивание C. elegans: метод визуализации липидных капель у неподвижных животных

0 просмотров3:34 мин • April 30th, 2023

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

- При визуализации липидных капель, внутриклеточных органелл, хранящих нейтральные липиды, начинают с добавления в образец раствора детергента, например, содержащего Triton X-100. Это пропитает клетки червя. Далее фиксируют пробу в соответствующей концентрации изопропанола, например 40%.

Затем добавьте в образец красную нил и беречь его от света, так как краситель светочувствительный. Фиксация позволяет красителю получить доступ к липидным каплям по всему животному. Нильский красный — липофильный краситель, спектр излучения флуоресценции которого зависит от полярности локальной липидной среды.

При воздействии полярных липидов, таких как фосфолипиды, спектр излучения Nile Red находится в более высоких, красных длинах волн. При воздействии нейтральных липидов, таких как триацилглицерины и сложные эфиры стеринов в нейтральном ядре липидных капель, спектр излучения Nile Red смещается в сторону более низких, желто-золотых длин волн.

Поэтому используйте зеленый канал флуоресцентного микроскопа, который будет собирать излучения желто-золотой длины волны, чтобы визуализировать окрашивание липидных капель в красный цвет Нила по всему животному. В примере протокола мы увидим процедуру окрашивания в красный цвет Нила и визуализацию липидных капель в фиксированных образцах.

- Для проведения окрашивания липидов Nile Red пластинчатые черви на среде роста нематоды (NGM), засеянной поздней log OP50 E. coli, и выращивание червей при температуре 20 градусов Цельсия до ранней стадии L4. Промойте червей 1 миллилитром раствора PBST и переложите суспензию червя в микропробирку объемом 1,5 миллилитров.

Центрифугируйте червей при 560-кратном давлении в течение одной минуты, затем удалите надосадочную жидкость и повторяйте промывку PBST до тех пор, пока кишечная палочка не будет очищена от суспензии. Далее к грануле червя добавьте 100 микролитров 40% изопропанола, или 60% для окрашивания ОРО, и инкубируйте образец при комнатной температуре в течение трех минут.

- Добавление изопропанола имеет решающее значение для правильной пеабилизации червей перед окрашиванием.

- Центрифугируйте черви при гравитации, в 560 раз превышающей силуэт, в течение одной минуты и удалите надосадочную жидкость, не нарушая гранулу червя.

- Важно свести к минимуму воздействие света на этапах центрифугирования.

- Теперь, находясь в темноте, добавьте в каждый образец по 600 микролитров предварительно приготовленного рабочего раствора NR. Переверните трубки три раза и полностью перемешайте червей и раствор. Затем выдержите образец в темноте при комнатной температуре в течение двух часов.

После инкубации центрифугируйте червей и удалите надосадочную жидкость. Затем добавьте 600 микролитров PBST и инкубируйте образцы в темноте в течение 30 минут, чтобы удалить излишки NR пятна. После повторного вращения образцов, как и раньше, удалите все надсадочную жидкость, кроме примерно 50 микролитров.

16:07

Биохимические и высокая пропускная способность Микроскопическая оценка жировой массы в Caenorhabditis Элеганс

Похожие видео

0 Просмотры

11:08

Выращивание зеленых микроводорослей в фотобиореакторах колонки пузыря и Assay для нейтральные липиды

Похожие видео

0 Просмотры

10:12

Флуоресценция основе анализа для характеристики и количественной оценки образования липидных капель в кишечных органоидов человека

Похожие видео

0 Просмотры

08:22

Визуализация Caenorhabditis Elegans Кутикулы структур с помощью липофильных Vital краска, DII

Похожие видео

0 Просмотры

03:32

Окрашивание нильским красным: метод обнаружения и количественного определения внутриклеточных нейтральных липидов в водорослях

Похожие видео

0 Просмотры

12:15

C. elegans кишечника как модель для межклеточных люмен морфогенеза и In Vivo поляризованной мембраны биогенеза на уровне одной ячейки: маркировка Пятнать антитела, RNAi потери функции анализа и обработки изображений

Похожие видео

0 Просмотры

07:46

Количественное определение липидного изобилия и оценки распределения липидов в Caenorhabditis elegans Нила красный и нефти красный O пятнать

Похожие видео

0 Просмотры

05:37

Рассечение и Липид капли пятно Эноцитов в Drosophila Larvae

Похожие видео

0 Просмотры

10:59

Безметчная визуализация динамики накопления липидов у caenorhabditis elegans с использованием стимулированной рамановской рассеянной микроскопии

Похожие видео

0 Просмотры

07:12

Анализ флуоресцентно окрашенных липидных капель с 3D-реконструкцией для оценки стеатоза печени

Похожие видео

0 Просмотры

Последнее обновление: 1 августа 2026