Нильское красное окрашивание C. elegans: метод визуализации липидных капель у неподвижных животных

- При визуализации липидных капель, внутриклеточных органелл, хранящих нейтральные липиды, начинают с добавления в образец раствора детергента, например, содержащего Triton X-100. Это пропитает клетки червя. Далее фиксируют пробу в соответствующей концентрации изопропанола, например 40%.

Затем добавьте в образец красную нил и беречь его от света, так как краситель светочувствительный. Фиксация позволяет красителю получить доступ к липидным каплям по всему животному. Нильский красный — липофильный краситель, спектр излучения флуоресценции которого зависит от полярности локальной липидной среды.

При воздействии полярных липидов, таких как фосфолипиды, спектр излучения Nile Red находится в более высоких, красных длинах волн. При воздействии нейтральных липидов, таких как триацилглицерины и сложные эфиры стеринов в нейтральном ядре липидных капель, спектр излучения Nile Red смещается в сторону более низких, желто-золотых длин волн.

Поэтому используйте зеленый канал флуоресцентного микроскопа, который будет собирать излучения желто-золотой длины волны, чтобы визуализировать окрашивание липидных капель в красный цвет Нила по всему животному. В примере протокола мы увидим процедуру окраши