Отслеживание динамики бактериальной инфекции у мыши с помощью биолюминесценции

Начинают с суспензии ослабленного штамма патогенной бактерии.

Аттенуированный штамм демонстрирует сниженную патогенность из-за целевых делеций в генах вирулентности.

Бактерии хромосомно помечены биолюминесцентным опероном, который обеспечивает автономное производство света.

Бактерии экспрессируют биолюминесцентный оперон, продуцируя фермент люциферазу и ферментный комплекс, синтезирующий субстрат люциферазы.

Люцифераза окисляет подложку с образованием видимого света.

Центрифугируйте суспензию и выбросьте надосадочную жидкость.

Промойте клетки буфером, снова центрифугируйте и выбросьте надосадочную жидкость, чтобы удалить остаточные неклеточные компоненты.

Повторно суспендируйте клетки в буфере для достижения оптимальной бактериальной концентрации и наберите суспензию в шприц.

Введите суспензию внутрибрюшинно мыши, затем перенесите ее в клетку.

Визуализируйте биолюминесцентный сигнал через равные промежутки времени.

Ослабленный штамм остается локализованным, а биолюминесценция постепенно снижается, что свидетельствует о клиренсе инфекции.

Утром в день инъекции разморозьте криовиальные бактериальные клетки при температуре четыре градуса Цельсия в течение трех-четырех часов. После размораживания