Количественное определение бактериального альгината с помощью анализа карбазола уроновой кислоты

Возьмите культуру бактерии Pseudomonas aeruginosa в отвар.

Поместите культуру на изоляционный агар и инкубируйте, чтобы стимулировать рост бактерий и выработку альгината, экзополисахарида, состоящего из уроновых кислот.

Добавьте изотонический раствор в бактериальный газон и соскребите, чтобы собрать бактериальные клетки вместе с альгинатом.

Переложите суспензию в пробирку, сделайте вихрь, чтобы диспергировать содержимое, и поместите ее на лед, чтобы предотвратить ферментативную деградацию.

Измерьте оптическую плотность, или OD, чтобы определить бактериальную плотность.

Добавьте бактериальную суспензию в кислотно-боратный раствор и перемешайте для гидролиза альгината в мономеры уроновой кислоты.

Добавьте карбазол, хромогенный реагент, и инкубируйте. В кислых условиях реагент вступает в реакцию с уроновыми кислотами с образованием цветных комплексов.

Измерьте абсорбцию для количественной оценки уровней уроновой кислоты, которые отражают концентрацию альгината.

Используя стандартную кривую, определите концентрацию альгината, а затем разделите ее на измеренную плотность бактериальных клеток, чтобы рассчитать производство альгината на единицу биомассы.

Чтобы начать анализ на карбазол уроновой ки