Энциклопедия экспериментов JoVE
Микробиология
0 просмотров • 3:20 мин. • September 26th, 2025
Возьмите микропланшет с образцом, содержащим альгинат, защитный экзополисахарид, вырабатываемый бактерией Pseudomonas aeruginosa.
Подготовьте серийное разведение стандарта, полученного из альгината, для количественного определения концентрации альгината в образце.
Добавьте буфер для покрытия и инкубируйте, чтобы облегчить сцепление молекул с поверхностью лунки.
Промойте, чтобы удалить несвязанные молекулы.
Инкубируйте с блокирующим агентом для маскировки неспецифических сайтов связывания.
Промойте, затем инкубируйте с первичными антителами, специфичными для альгината.
Промойте еще раз, затем инкубируйте с конъюгированными ферментами вторичными антителами, которые нацелены на первичные антитела.
Вымыть, а затем инкубировать с хромогенным субстратом, который фермент окисляет для получения цветного продукта.
Добавьте кислотный раствор, который останавливает реакцию и усиливает цвет, чтобы обеспечить колориметрическое обнаружение.
С помощью считывателя микропланшетов измерьте интенсивность цвета.
Создайте стандартную кривую на основе интенсивностей стандартных разведений и постройте график интенсивности образца для определения концентрации альгината.
С помощью микропипетки добавьте 50 микролитров
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео