Оценка проницаемости кишечника у C. elegans после воздействия бактерий

Возьмём C. Червеи elegans , культивируемые на питательными веществами агарных пластинах, содержащих E. coli — контрольное состояние, а Pseudomonas aeruginosa — для патогенного заболевания.

Во время инкубации черви питаются бактериями, которые заселяют просвет кишечника.

В контрольной стадии кишечный эпителий остаётся целым, а токсины, выделяемые патогенами, вызывают повреждение эпителия.

Промыйте червей буфером и перенесите на тарелки с флуоресцентными трассерами и термоинактивируемыми бактериями в качестве пищи.

В контроле поглощённые флуоресцентные индикаторы остаются в кишечнике, а у зараженных патогенами червей проходят через повреждённый эпителий и попадают в полость тела.

Снова помойте червей и положите их на свежие тарелки. Затем перенесите их на многоколодящую анализную пластину с фиксатором для сохранения клеточной структуры.

Удалите фиксатор. Затем добавьте монтажную среду для визуализации.

Наблюдайте с помощью флуоресцентной визуализации.

Повышенная флуоресценция в полости тела P. Глисты, воздействующие воздействию аэрогинозы, указывают на проницаемость кишечника, вызванную патогеном.

Промыйте личинки L4, синхронизированные по возрасту, S-буфером и перенесите примерно 500 червей