Визуализация и оценка размера Faustovirus с помощью электронной микроскопии

Возьмите культуру амеб, инфицированных гигантским вирусом, известным как Faustovirus.

Соберите супернатант культуры, содержащий Faustovirus.

Нанесите супернатант на 글로у-разряженную сетку для электронной микроскопии.

Проведите инкубацию для обеспечения адсорбции вирусных частиц на сетке.

Промокните сетку фильтровальной бумагой, чтобы удалить несвязавшиеся вирусные частицы.

Нанесите каплю молибдата аммония.

Молибдат аммония выступает в роли негативного контрастирующего агента, связываясь с сеткой вокруг вируса и затемняя фон для повышения контрастности при визуализации.

Удалите излишки молибдата аммония, промокнув сетку фильтровальной бумагой.

Поместите сетку в чашку Петри и дайте ей высохнуть.

Затем поместите сетку в держатель для образцов.

Введите держатель в электронный микроскоп.

Сделайте снимок Faustovirus и измерьте его размер для последующего анализа.

Для проведения электронной микроскопии нанесите 5 µl положительного образца на свежеактивированную (glow-discharged) сетку и инкубируйте при комнатной температуре примерно 20 минут. Осторожно высушите сетку, затем добавьте небольшое количество 1% молибдата аммония и инкубируйте в течение 10 секунд. После осторожного удаления капли дайте сетке высохнуть в течение пяти минут. Далее установите ускоряющее напряжение электронного микроскопа на 200 keV. Затем поместите сетку в держатель и введите держатель в микроскоп. Нажмите на иконку обзора вакуума и проверьте состояние вакуума. Затем закройте клапаны, установите размер пятна (spot size) 5 и увеличение 25,000, после чего приступите к наблюдению. Обнаружив гигантский вирус на экране сбора данных, измерьте размер вируса с помощью инструмента измерения.

Выполните молекулярно-биологический анализ и секвенирование вирусного генома в соответствии с текстовым протоколом.