Энциклопедия экспериментов JoVE
Исследования рака
0 просмотров • 3:30 мин. • February 22nd, 2023
Децеллюляризованные каркасы всего органа состоят из трехмерного внеклеточного матрикса с интактной сосудистой сетью. Эти каркасы сохраняют определенный состав тканей и функциональную целостность и играют важную роль в биоинженерии органов.
Чтобы подготовить децеллюляризованную почку крысы, сначала получают свежесобранную почку крысы вместе с ее главной артериальной и венозной сосудистой сетью - брюшной аортой и нижней полой веной. Перевязать мочеточник, малые артериальные и венозные бифуркации для предотвращения утечки жидкости во время последующего процесса перфузии.
Поместите почку в подходящий буфер, чтобы обеспечить увлажнение органа. Вставьте катетеры соответствующего размера в основные сосудистые сосуды и закрепите их. Подсоедините катетер к перистальтическому насосу. Перфузируйте почку антикоагулянтным буфером с соответствующей скоростью потока и давлением в течение желаемого времени.
Этот этап помогает эффективно выводить кровь из органа через венозный отток. Замените перфузат на неионогенное поверхностно-активное вещество для проникновения в клеточные мембраны. После этого перфузируйте орган анионным сурфактантом для эффективной солюбилизации клеточных и ядерных мембран, что приводит к лизису клеток и высвобождению внутриклеточного содержимого.
Освобожденные клеточные компоненты и мусор вытекают из почки, постепенно делая ее полупрозрачной. Введите в децеллюляризованную почку подходящий буфер, содержащий антибиотики и антикоагулянты, чтобы удалить остаточный сурфактант и любой оставшийся мусор из органа. Антибиотики предотвращают вероятность роста бактерий внутри децеллюляризованного органа.
Извлекают левую почку с брюшной аортой и нижней полой веной. Переложите мочеточник, грудную аорту, верхнюю полую вену и ветви брюшной аорты. Храните орган увлажненным в DPBS в 10-сантиметровой чашке Петри. Канюляция брюшной аорты и нижней полой вены с помощью катетера 23-го калибра.
Чтобы удалить остаточную кровь, подключите канюлю к перистальтическому насосу и промойте орган 500 миллилитрами DPBS и 16 единицами на миллилитр гепарином в течение 90 минут при 5 оборотах в минуту и 37 градусах Цельсия. Для децеллюляризации почки необходимо перфузировать ее 1% Triton X-100 в течение 3 часов, а затем 0,75% раствором SDS в течение 6 часов при постоянном давлении 40 миллилитров ртутного столба.
Для удаления остаточных ПДС необходимо перфузировать образец 1% пенициллином в дистиллированной воде в течение 18 часов, а затем стерильным ДПБС и гепарином 16 ЕД на миллилитр в течение 90 минут.