Интерференционно-отражательная микроскопия для безметочной визуализации динамики микротрубочек
Энциклопедия экспериментов JoVE
Биологические методы
0 просмотров • 6:36 мин. • July 8th, 2025
Микроскопия интерференционного отражения позволяет визуализировать микротрубочки, которые динамически растут и уменьшаются.
Закрепите парафиновые полоски на одном покровном листе, а сверху положите покровное стекло чуть меньшего размера. Нагревайте, чтобы парафин расплавился, образуя герметичный канал. Пипеткой проведите через канал раствор, содержащий антитела. Антитела прикрепляются к поверхности покровного стекла. Добавьте блокирующий раствор, блокирующий несвязанные антителами участки и предотвращающий связывание неспецифических белков.
Поместите покровное стекло на предметный столик микроскопа. Установите нагреватель образцов на температуру, способствующую росту микротрубочек.
Семена микротрубочек пипетки стабилизированы негидролизуемым гуанозинтрифосфатом, ГТФ, аналогом. Семена связываются с покровным стеклом, покрытым антителами. Добавьте буфер, содержащий немеченый тубулин, ГТФ и восстановители.
При оптимальных температурных и буферных условиях семена действуют как центры зародышеобразования, обеспечивая связывание немеченых тубулинов и рост микротрубочек.
Начните визуализацию. Падающий свет фокусируется через апертурную диафрагму на светоделитель, который частично отражает
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео