Идентификация субпопуляций регуляторных Т-клеток из дренирующих лимфатических узлов поджелудочной железы мышей

Регуляторные Т-клетки, или Tregs, представляют собой специализированную субпопуляцию Т-клеток, которая оказывает иммуносупрессивное действие, опосредуя гомеостаз иммунной системы. Tregs экспрессируют маркеры клеточной поверхности CD4, CD25 и Neuropilin 1, Nrp1, а также ядерные факторы транскрипции forkhead box P3, Foxp3 и Helios.

Чтобы изолировать Tregs от дренирующих лимфатических узлов поджелудочной железы мыши, или PDLN, поместите металлическую сетку на коническую трубку. Поместите PDLN на сетку и измельчите ткань, чтобы механически диссоциировать ее. Добавьте подходящую среду поверх сетки, промыв ячейки в трубку.

Центрифуга, удаляющая мертвые клетки и клеточный мусор. Ресуспендируйте жизнеспособные клетки в среде. Пропустите клетки через крышку клеточного фильтра, прикрепленную к трубке с круглым дном, чтобы получить однородную одноклеточную суспензию, удаляя любые оставшиеся клеточные комки.

Добавьте фторохром-конъюгированные анти-CD4, анти-CD25 и анти-Nrp1 антитела. Анти-CD4 и анти-CD25 антитела связываются с соответствующими антигенами клеточной поверхности на Tregs. В то же время анти-Nrp1 связывается с рецепторами Nrp1.

Обработайте клетки подходящим буфером для фиксации пе