Индукция некротизирующего энтероколита в эпителиальной энтероидной модели человека

Получить крипты, полученные из ткани тонкого кишечника человека — канальцевые инвагинации, содержащие стволовые клетки и различные типы эпителиальных клеток.

Добавьте кишечные крипты в охлажденную матрицу фундамента.

Переложите эту смесь в многолуночную пластину, создав трехмерный купол.

Добавьте питательную среду и инкубируйте.

Стволовые клетки самоорганизуются, размножаются и дифференцируются в различные типы кишечных клеток, образуя энтеросферы.

Со временем энтеросферы созревают в энтероиды – трехмерные самообновляющиеся структуры, напоминающие кишечные крипты.

Добавьте липополисахариды, или ЛПС, бактериальный эндотоксин, в лунку, содержащую энтероиды, и инкубируйте.

Молекулы ЛПС связываются с толл-подобным рецептором в энтероиде, инициируя провоспалительную реакцию, приводящую к накоплению активных форм кислорода. Это запускает каскад событий, ведущих к апоптозу.

Следовательно, целостность энтероида нарушается, что приводит к проникновению ЛПС в просвет, что еще больше усиливает воспалительную реакцию.

Это имитирует развитие некротизирующего энтероколита, тяжелого воспаления в кишечнике недоношенных детей.

Во время сбора в операционном блоке поместите образец ткани тонкой кишки