Энциклопедия экспериментов JoVE
Нейронауки
0 просмотров • 4:45 мин. • July 8th, 2025
Возьмем первичные корковые нейроны крысы в чашке со стеклянным дном с полимерным покрытием.
Зафиксируйте нейроны с помощью параформальдегида для сохранения клеточных структур.
Смойте излишки параформальдегида.
Добавьте неионогенное моющее средство, чтобы проникнуть в клетки.
Обработайте клетки зеленым флуоресцентным красителем, нацеленным на структурный белок филаментный актин, или F-актин.
Удалите лишнее пятно.
Нанесите блокирующий агент для предотвращения связывания неспецифических антител.
Инкубируйте с первичными антителами, нацеленными на дендритные белки.
Удалите несвязанные антитела.
Добавьте красные флуорконъюгированные вторичные антитела для связывания с первичными антителами. Смойте излишки антител.
Нанесите флуоресцентный краситель для окрашивания ядер. Удалите несвязанный краситель.
Добавьте реагент против выцветания, чтобы предотвратить фотообесцвечивание флуорофора.
С помощью флуоресцентной микроскопии можно получить изображения нейронов.
Определите богатую F-актином область внутри меченого дендрита.
С помощью программного обеспечения подсчитайте точки или пятна F-актина и вручную проведите по длине дендрита, чтобы рассчитать плотность F-актина.
Зафиксируйте ячейки 4%
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео