Хронический Сужение седалищного нерва и боль Гиперчувствительность тестирования у крыс

Общая цель этой процедуры состоит в том, чтобы выполнить хроническое сужение, повреждение седалищного нерва, широко используемую модель нейропатической боли у грызунов, и количественно измерить результирующее болевое поведение. Это достигается путем размещения четырех хромированных кишечных лигатур вокруг обнаженного седалищного нерва на уровне середины бедра, чтобы создать сужающее повреждение седалищного нерва. Затем отслеживайте болевое поведение в задней лапе в желаемые моменты времени, количественно измеряя порог оттягивания лапы к механическому раздражителю с помощью фон фрай антеса и латентность оттягивания лапы до теплового стимула с помощью подошвенного анальгезиометра.

В конечном итоге могут быть получены результаты, которые показывают существование механической и тепловой боли, гиперчувствительности поврежденной задней лапы путем измерения вызванных реакций отмены как на механические, так и на термические стимулы. Этот метод лечения повреждений периферических нервов, впервые разработанный bene и Z, может помочь нам ответить на ключевые вопросы в области хронической боли, например, каковы периферические и центральные механизмы, с помощью которых возникает нейропатическая боль. Применение этой техники распространяется и на терапию нейропатической боли, поскольку эта модель обеспечивает основу для изучения новых стратегий снижения гиперчувствительности к боли.

Как правило, люди, не знакомые с этим методом, будут испытывать трудности, потому что наложение кишечных швов вокруг статического нерва и соответствующая плотность для причинения достаточного, но не чрезмерного повреждения нерва являются особенно сложными. Для начала этой процедуры продезинфицируйте хирургическую рабочую поверхность с 70% этанолом и подготовьте стерильные инструменты марлевыми скобами и тампонами, которые ранее были автоклавированы. Затем обезболите крысу в индукционной камере с использованием фтора 5% ISO.

Подайте в него фтор 2% ISO через специально изготовленную маску для лица во время операции. После этого побрейте левую заднюю лапу крысы, после чего положите животное на терморегулируемый нагревательный коврик при температуре 37 градусов Цельсия. Нанесите на глаза смазывающую офтальмологическую мазь.

Затем подготовьте хромовый шов для кишки, разрезав его на небольшие кусочки примерно по три сантиметра, погрузите их в стерильный физиологический раствор. Далее простерилизуйте выбритый участок с помощью трех чередующихся аппликаций спирта и раствора йода. Когда животное лежит на грудной клетке, поднимите его левую заднюю ногу и удерживайте бедренную кость под углом 90 градусов к позвоночнику с помощью малярного скотча на стопе.

Затем сделайте надрез на коже примерно на три-четыре миллиметра ниже бедренной кости. Отделите кожу от мышц, окружающих разрез, разрезав соединительную ткань. С помощью тупых ножниц разрежьте соединительную ткань между поверхностной ягодичной мышцей и двуглавой мышцей.

Затем используйте ретрактор, чтобы расширить зазор между двумя мышцами, чтобы обеспечить четкую визуализацию седалищного нерва, затем используйте щипцы и микроножницы, чтобы аккуратно освободить примерно 10 миллиметров седалищного нерва от окружающей соединительной ткани. Завяжите первую лигатуру проксимальнее трифуркации седалищного нерва для каждой лигатуры. Начните с одной свободной петли.

Затем обхватите два конца близко к петле и тяните до тех пор, пока петля не станет едва плотно прилегать и лигатура не будет скользить по нерву. Затем удерживайте петлю в правильном положении и поместите вторую петлю поверх первой петли, чтобы завершить узел. Далее разрежьте свободные концы лигатуры до круглого на один миллиметр сужение нерва должно быть минимальным.

Повторите действия для оставшихся трех лигатур, завязав каждую дополнительную лигатуру на один миллиметр ближе предыдущей. Также с минимальным сужением в конце операции используйте швы для закрытия мышечного слоя и скобы для закрепления кожи. Далее используйте раствор йода для стерилизации раны.

Внимательно наблюдайте за животным в период восстановления после анестезии и дайте ему восстановиться в отдельной клетке с плоской бумажной подстилкой. Перед началом эксперимента. Обрабатывайте животное ежедневно в течение нескольких дней.

Затем перед поведенческим тестированием приучите крысу к вольеру. Испытательная среда должна быть тихой и хорошо контролируемой с постоянным уровнем температуры и влажности, а каждая сессия тестирования должна проводиться в одно и то же время суток. Для изучения порога механического вывода в день эксперимента поместите крысу в испытательную клетку с приподнятым сетчатым полом за 15-30 минут до начала эксперимента с помощью динамического подошвенного фона Фрай расположите блок стимулятора прикосновения нитью непосредственно под средней поверхностью кашпо задней лапы и нажмите клавишу запуска.

Это приподнимает нить для механической стимуляции поверхности кашпо задней лапы с возрастающей силой. Затем запишите порог механического отрыва как от травмированных, так и от неповрежденных задних лап. Это устройство автоматически записывает и отображает максимум подаваемой реакции при выводе.

Повторите механическую стимуляцию три раза с интервалом около пяти минут между проверкой стимулов и неповрежденными задними лапами в уравновешенном порядке, а затем рассчитайте среднее значение порогов отхождения лап. Чтобы изучить латентность теплоотвода в день тестирования, поместите крысу в стеклянный пол. В испытательной клетке за 15-30 минут до начала эксперимента с помощью прибора для термообезболивания кашпо расположите инфракрасный источник непосредственно под средней поверхностью кашпо задней лапы и нажмите клавишу запуска.

При этом поверхность задних лап горшка подвергается воздействию луча лучистого тепла через прозрачную стеклянную поверхность. Затем запишите латентность абстиненции как у поврежденных, так и у неповрежденных задних лап. Это устройство автоматически фиксирует время, затраченное от начала теплового раздражителя до отведения лапы от источника тепла.

Повторите тепловую стимуляцию не менее трех раз с интервалом около пяти минут между стимулами, проверяющими поврежденные и неповрежденные задние лапы в уравновешенном порядке, а затем рассчитайте среднее значение отведения лап. Отмечается значительное снижение порога отведения лапы к механическим раздражителям у поврежденной ипсилатеральной задней лапы по сравнению с неповрежденной контралатеральной задней лапой. Здесь показана латентность термической абстиненции как в поврежденных, так и в неповрежденных лапах до и в течение 12 дней после хронического сужения седалищного нерва.

Аналогичным образом, латентность теплового вывода значительно уменьшается в поврежденной ипсилатеральной задней лапе по сравнению с неповрежденной контралатеральной задней лапой. После освоения операция CCI может быть правильно выполнена всего за 20 минут для каждого животного, что приводит к длительной болевой гиперчувствительности задней лапы. Пытаясь выполнить эту процедуру, важно помнить о том, что лигатуры должны быть слабо завязаны, так как именно самоудушение под лигатурами после отека вызывает сужение после его развития.

Эта методика лечения повреждения периферических нервов в сочетании с тестированием гиперчувствительности боли к зубцу Р для исследователей в области нейропатической боли позволяет изучить механизмы, лежащие в основе хронической боли из-за повреждения нерва.