Склонение Myointimal гиперплазия против атеросклероза у мышей: Введение двух допустимых моделей

Общая цель следующего эксперимента — представить две валидные животные модели, приводящие к сужению аорты за счет различных механизмов. Первая модель представляет собой баллонную катетеризацию аорты для индукции развития неоинтимальной гиперплазии. Сначала обнажают и пережимают инфраренальный отдел брюшной аорты.

Затем в аорте делают поперечный разрез и вводят баллонный катетер. После этого эндотелий аорты удаляют с помощью раздутого катетера, и операцию завершают. Вторая модель представляет собой диетическую манипуляцию с трансгенными мышами с нокаутом гена APOE для создания атеросклеротических бляшек.

Эти мыши содержатся в стандартных условиях и в течение четырех-шести месяцев получают высоколипидную западную диету. В конечном итоге гистологический анализ хирургически индуцированной неоинтимальной гиперплазии и модели с диетическим ограничением показывает, что они приводят к разной степени сужения просвета сосуда. Сегодня мы продемонстрируем две разные модели индуцирования сужения просвета: мышиную модель с использованием баллонного катетера для повреждения сосуда и модель артериосклероза.

Использование трансгенных мышей, находящихся на западном типе питания, в сочетании с моделью баллонного катетера позволяет ответить на ключевые вопросы в области изучения стеноза. Для исследования патофизиологии атеросклероза применяется модель гомозиготных трансгенных мышей с мутацией в верхнем сегменте E. Для создания модели интимальной гиперплазии используются мыши линии C 57 black six J массой около 25 grams.

Содержите их в обычных условиях на стандартном рационе. После наркотизации мыши 2% isof fluorine выбрейте шерсть на животе и введите карпрофен подкожно для обеспечения анальгезии. Затем поочередно продезинфицируйте кожу раствором йода Provo и 80% ethanol в два цикла.

Теперь проверьте отсутствие рефлексов, зажав пальцы ноги пинцетом. Начните операцию с разделения кожи и мышц вдоль белой линии живота. Затем оберните кишечник перчаткой, смоченной в физиологическом растворе, после чего аккуратно удалите жировую ткань, обнажая брюшную аорту.

Теперь выделите инфраренальный отдел аорты до места ее бифуркации, стараясь не повредить какие-либо ветвящиеся сосуды. Затем наложите зажим на аорту.

Сначала наложите микрохирургический зажим на проксимальный отдел инфраренальной аорты, чтобы перекрыть кровоток. Затем наложите второй дистальный зажим рядом с бифуркацией аорты. После прекращения кровотока сделайте небольшой разрез аорты рядом с проксимальным зажимом.

Введите катетер в направлении дистального зажима аорты, чтобы создать повреждение эндотелия. Проведите денудацию аорты, осторожно раздувая баллон катетера и медленно вытягивая катетер в сторону проксимального зажима. Повторите эту манипуляцию дважды, чтобы в общей сложности выполнить три раздувания в аорте.

Теперь извлеките катетер и зашейте разрез аорты с помощью непрерывного шва нитью пролен 10-0. При наложенных швах осторожно откройте дистальный зажим, чтобы проверить наличие кровотечения в месте аутотомии аорты. Снова закройте зажим, найдите источник кровотечения и остановите его с помощью дополнительных узловых швов.

При отсутствии кровотечения медленно откройте проксимальный зажим. Дистальнее разреза должен быть виден пульс аорты. Теперь расположите кишечник в C two.

Затем зашейте брюшную стенку, начиная с мышечного слоя, используя шесть непрерывных П-образных швов проленом. После этого зашейте кожу пятью П-образными швами и верните мышь в клетку. В течение первых трех послеоперационных дней добавляйте метразол в питьевую воду для купирования болевого синдрома.

Наблюдайте за животным на протяжении всего периода восстановления, который занимает около 28 дней. Для создания модели атеросклероза используйте мышей с дефицитом POE в возрасте четырех недель. Содержите этих мышей в стандартных условиях, обеспечив им западную диету с высоким содержанием липидов в течение четырех-шести месяцев.

Придерживайтесь данной диеты на протяжении всего эксперимента. За шесть часов до забора аорты ограничьте доступ к корму. Затем подготовьте мышь к операции, как описано в предыдущем разделе.

Начните операцию с вскрытия грудной клетки. Затем отсеките верхушку сердца и проведите перфузию под низким давлением тремя миллилитрами 4% параформальдегида через корень аорты для фиксации аорты. После этого освободите аорту от корня до места ее бифуркации.

Постарайтесь удалить как можно больше жировой ткани. Затем отсеките дугу аорты и поместите ее в 4% параформальдегид. Теперь перенесите сердце и систему аорт в чашку с силиконовым покрытием, содержащую PBS.

Отрежьте один конец аортального дерева и закрепите его на силиконовом слое с помощью тонких булавок. Разрежьте аорту вдоль и оставьте ткани аорты в PBS при комнатной температуре на несколько минут. Затем однократно промойте ткань 50% ethanol и погрузите ее в ванночку с Sudan.

В-третьих, выдержите в окрашивающем растворе около 15 минут. После окрашивания быстро промойте ткань 50% ethanol в течение нескольких секунд, чтобы удалить только излишки судана. Чрезмерное промывание приведет к слишком сильному вымыванию красителя; немедленно промойте ткань дистиллированной водой и приступайте к визуализации. Для модели гиперплазии интимы средней оболочки были извлечены денудированные аорты мышей, залиты в парафин и окрашены трихромом. Отношения рассчитывали по срезам, окрашенным трихромом, путем измерения толщины интимы и медии.

С помощью компьютерного анализа с последующим расчетом соотношения была определена максимальная толщина бляшки как максимальная толщина интимы в просвете сосуда с использованием программы computer morpho tree. Процент облитерации просвета рассчитывали как отношение нового внутреннего просвета к прежнему просвету. Площадь бляшки вычисляли путем вычитания площади нового внутреннего просвета из площади прежнего просвета.

Аналогичный анализ был проведен на поперечных срезах модели атеросклероза, окрашенных трихромом, на уровне аортального клапана, дуги аорты и нисходящей аорты только для модели атеросклероза. Нисходящая аорта была вскрыта продольно и окрашена суданом красным. Площадь бляшки и общая площадь аорты измерялись с помощью компьютера для анализа обеих моделей.

Для получения ответов на такие вопросы, как облитерация просвета, морфология и клеточность, можно использовать другие методы, такие как гистопатология и конфокальная иммунофлуоресцентная микроскопия. Благодарим за внимание и желаем успехов в ваших экспериментах.