Способ получения первичных клеток рака яичников от твердых образцов
4 февраля 2014 г.
Это исследование описывает подробный способ выделения и характеристики первичных клеток рака яичников от твердых клинических образцов. Рак яичников клинические образцы подвергаются ферментативного расщепления, чтобы получить жизнеспособную, фибробластов без эпителиального рака яичников (EOC) клеток высоко подходящий для последующих применений.
Общая цель этой процедуры заключается в выделении и характеристике первичных клеток рака яичников из твердых клинических образцов. Это достигается путем сбора образца опухоли яичника и помещения его в чашку Петри. Второй шаг заключается в разрезании образца на кусочки и переносе кусочков в коническую пробирку с реагентами для сбраживания для инкубации.
Затем клеточная суспензия пропускается через фильтр, где собираются только клетки Для центрифугирования последним этапом является выброс надосадочной жидкости и ресуспендирование клеток в среде для инкубации на ночь. В конечном счете, эпителиальные раковые клетки яичников будут расти в культуре в течение нескольких недель, что позволяет использовать их в дальнейшем. Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в области рака яичников, например, какой вариант лечения является лучшим для каждого отдельного пациента.
Применение этого метода распространяется и на лечение рака яичников, поскольку он позволяет нам использовать более реалистичные клеточные культуры, которые очень восприимчивы к генетическим манипуляциям и более полезны для скрининговых тестов на лекарства. Для начала добавьте 500 миллилитров delcos, модифицированных eagles, medium или DMEM с 10% фетальной бычьей сывороткой или FBS и 1% пенициллином, стрептомицином или пс. Храните среду при температуре четыре градуса Цельсия.
Соберите образец из операционной и транспортируйте его на льду в лабораторию еще внутри транспортируемого контейнера. Поместите образец в биологически безопасный колпак. Перенесите образец из конической пробирки объемом 50 миллилитров в чашку Петри размером 60 на 60 миллиметров, содержащую 10 миллилитров свежего ледяного PBS.
Далее с помощью стерильного лезвия бритвы далее разрежьте образец на кусочки размером два миллиметра или мельче. Затем обработайте DMEM дисковой пастой в тубе объемом 15 литров конической. Переложите измельченные салфетки в DMEM dispa с двумя пробирками для смешивания.
Затем инкубируйте образец при 5% углекислом газе и 37 градусах Цельсия в течение 30 минут. Вручную перемешивайте клеточную кашу каждые пять минут, чтобы обеспечить оптимальное пищеварение. После инкубации передайте клеточную суспензию через сетчатое сетчатое сетчатое ситечко размером 70 микрометров, расположенное поверх конической трубки объемом 50 миллилитров.
Осторожно надавите на сетку с помощью поршня шприца, отбросьте все остающиеся на сетке посторонние ткани и соберите полученную клеточную суспензию в стерильную коническую пробирку объемом 50 миллилитров. Далее центрифуга. Коническая трубка при 320 умноженных на G в течение семи минут при четырех градусах Цельсия.
Выбросьте надосадочную жидкость и повторно суспендируйте клеточную гранулу в 10 миллилитрах DMEM, содержащем 10% FBS и 1% ps. Затем перенесите клеточную суспензию в чашку Петри и инкубируйте суспензию при 5% углекислом газе и 37 градусах Цельсия. Смените среду через 24 часа после первоначального осаждения, чтобы удалить клеточный мусор и большую часть эритроцитов, присутствующих в культуре.
Наконец, меняйте среду каждые три дня в течение следующих двух недель, после чего культуры первичных клеток EOC готовы к последующему применению. Сразу после нанесения покрытия. Эпителиальные раковые клетки яичников или клетки EOC проявляются в виде одиночных клеточных суспензий и в скоплениях с эритроцитами и клеточным мусором.
Культура клеток EOC через три дня после нанесения показывает полуадгезивные клеточные кластеры EOC и меньшую контаминацию эритроцитов. Через неделю после первоначального осаждения клеточная культура EOC превращается в вихрь, похожий на скопление клеток, распространяющихся по пластику тканевой культуры. Типичная морфология эпителиального булыжника может быть видна в сливающемся монослое клеток EOC после 14 дней в культуре.
После просмотра этого видео у вас должно сложиться хорошее представление о том, как выделить и охарактеризовать первичные клетки рака яичников из твердых клинических образцов.
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео
Обзор
В данном исследовании представлен подробный метод выделения и характеризации первичных клеток рака яичников из твердых клинических образцов. Данная процедура позволяет выращивать эпителиальные клетки рака яичников в культуре, что облегчает их дальнейшее использование в различных приложениях.
Основные компоненты исследования
Область науки
- Онкология
- Клеточная биология
- Клинические исследования
Теоретические основы
- Рак яичников представляет собой серьезную проблему для здравоохранения со сложными вариантами лечения.
- Выделение жизнеспособных раковых клеток имеет решающее значение для персонализированной медицины.
- Современные методы могут не обеспечивать получение чистых эпителиальных клеток рака яичников.
- Данное исследование направлено на совершенствование процесса выделения для получения более точных результатов исследований.
Цель исследования
- Выделение первичных клеток рака яичника из клинических образцов.
- Характеристика выделенных клеток для последующего использования.
- Углубление понимания вариантов лечения пациентов с раком яичника.
Используемые методы
- Сбор образцов опухолей яичника.
- Ферментативное расщепление образцов ткани.
- Фильтрация для выделения жизнеспособных клеток.
- Центрифугирование и ресуспендирование в культуральной среде.
Основные результаты
- Успешная изоляция клеток эпителиального рака яичников, не содержащих фибробластов.
- Клетки могут культивироваться в течение нескольких недель, что позволяет проводить детальные исследования.
- Данный метод обеспечивает надежный источник раковых клеток для научных исследований.
- Потенциал для разработки стратегий персонализированного лечения.
Выводы
- Описанный метод эффективен для выделения клеток рака яичников.
- Он способствует дальнейшим исследованиям методов лечения рака яичников.
- Будущие исследования могут опираться на данный метод для улучшения результатов лечения пациентов.
Часто задаваемые вопросы
Практическая значимость для отрасли
Получение первичных клеток рака яичников из твердых клинических образцов позволяет создавать релевантные для конкретного пациента модели, что снижает зависимость от пассированных клеточных линий с накопленными генетическими артефактами. Этот подход способствует снижению рисков при механистической валидации мишеней за счет сохранения гетерогенности опухоли и специфической биологии первичных или метастатических очагов. Полученные культуры служат возобновляемым источником для последующего скрининга, что повышает прогностическую достоверность при принятии решений на доклиническом этапе.
Стратегическое применение в биофармацевтических исследованиях и разработках
Ранний поиск и валидация мишени
- Научная ценность: позволяет проверять терапевтические гипотезы с использованием клеток, отражающих генетический и фенотипический профиль исходного клинического образца.
- Операционная ценность: снижает неопределенность механизмов действия, позволяя избежать артефактов, связанных с использованием клеточных линий с большим числом пассажей.
- Прогностическая ценность: способствует приоритизации портфеля препаратов за счет биологического снижения рисков при валидации мишеней в системе, релевантной данной патологии.
Скрининг и разработка анализа
- Научная ценность: позволяет получать клетки эпителиального рака яичников, подходящие для скрининга лекарственных препаратов с сохранением туморогенных свойств.
- Практическая ценность: обеспечивает получение стандартизированных, воспроизводимых клеточных суспензий после ферментативного переваривания и фильтрации.
- Масштабируемость: позволяет подготавливать несколько первичных культур из различных образцов для параллельного проведения анализов.
Трансляционные и доклинические исследования
- Трансляционная преемственность: обеспечивает связь между фундаментальными исследованиями и доклинической работой за счет использования клеток, полученных непосредственно из образцов пациентов.
- Соответствие биомаркеров: позволяет оценивать мишени и биомаркеры в контексте, отражающем особенности опухоли конкретного пациента.
- Оптимизация рисков при продвижении: позволяет принимать решения о целесообразности дальнейшего продолжения исследований (go/no-go) на основе ответов первичных клеток, которые более точно предсказывают клинические результаты.
Интеграция конвейера и рабочих процессов
Данный метод вписывается в континуум открытий — от ранних биологических исследований до идентификации соединений-лидеров, обеспечивая получение первичных клеток, которые повышают релевантность последующего скрининга и этапов валидации.
- Поисковая биология: обеспечивает проверку гипотез и уточнение сигнальных путей с использованием клеток с сохранными опухолеспецифическими характеристиками.
- Скрининг: предоставляет готовые к анализу первичные эпителиальные клетки рака яичников с количественно определяемыми показателями роста и морфологии для оценки соединений.
- Аналитика: позволяет измерять ответ на лекарственные препараты, пролиферацию и фенотипические изменения в генетически стабильной системе с малым числом пассажей.
- Трансляционные исследования: сохраняют клиническую значимость благодаря прямому выделению из образцов, что способствует валидации биомаркеров и мишеней.
- Корпоративное повторное использование: создает многократно используемую платформу для получения первичных культур из различных образцов, снижая зависимость от ограниченных клеточных линий.
Операционное и корпоративное воздействие
- Научная ценность: повышает достоверность прогнозов за счет использования клеток, отражающих гетерогенность и биологию исходной опухоли.
- Операционная ценность: обеспечивает воспроизводимость благодаря стандартизированным этапам ферментативного переваривания, фильтрации и инициации культуры.
- Стратегическая ценность: повышает эффективность использования капитала за счет снижения риска неудач на поздних стадиях благодаря более качественной доклинической валидации мишеней.
- Влияние на портфель: позволяет осуществлять приоритизацию кандидатов с учетом рисков на основе их активности в первичных клетках, полученных от пациентов.
Особенности реализации
- Требуется опыт работы со стерильными тканями, проведения ферментативного расщепления и методов первичного культивирования клеток.
- Зависит от наличия свежих или правильно законсервированных образцов опухолей яичника, собранных в стерильных условиях.
- Необходимы центрифугирование, фильтрация и оборудование для культивирования, включая боксы биологической безопасности и CO2-инкубаторы.
- Требуется оптимизация времени расщепления и механической диссоциации для максимального выхода эпителиальных клеток при минимальном загрязнении фибробластами.
- Ограничено доступностью и жизнеспособностью образцов, которые могут варьироваться в зависимости от времени проведения операции и условий транспортировки.
