Способ получения первичных клеток рака яичников от твердых образцов

Общая цель этой процедуры заключается в выделении и характеристике первичных клеток рака яичников из твердых клинических образцов. Это достигается путем сбора образца опухоли яичника и помещения его в чашку Петри. Второй шаг заключается в разрезании образца на кусочки и переносе кусочков в коническую пробирку с реагентами для сбраживания для инкубации.

Затем клеточная суспензия пропускается через фильтр, где собираются только клетки Для центрифугирования последним этапом является выброс надосадочной жидкости и ресуспендирование клеток в среде для инкубации на ночь. В конечном счете, эпителиальные раковые клетки яичников будут расти в культуре в течение нескольких недель, что позволяет использовать их в дальнейшем. Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в области рака яичников, например, какой вариант лечения является лучшим для каждого отдельного пациента.

Применение этого метода распространяется и на лечение рака яичников, поскольку он позволяет нам использовать более реалистичные клеточные культуры, которые очень восприимчивы к генетическим манипуляциям и более полезны для скрининговых тестов на лекарства. Для начала добавьте 500 миллилитров delcos, модифицированных eagles, medium или DMEM с 10% фетальной бычьей сывороткой или FBS и 1% пенициллином, стрептомицином или пс. Храните среду при температуре четыре градуса Цельсия.

Соберите образец из операционной и транспортируйте его на льду в лабораторию еще внутри транспортируемого контейнера. Поместите образец в биологически безопасный колпак. Перенесите образец из конической пробирки объемом 50 миллилитров в чашку Петри размером 60 на 60 миллиметров, содержащую 10 миллилитров свежего ледяного PBS.

Далее с помощью стерильного лезвия бритвы далее разрежьте образец на кусочки размером два миллиметра или мельче. Затем обработайте DMEM дисковой пастой в тубе объемом 15 литров конической. Переложите измельченные салфетки в DMEM dispa с двумя пробирками для смешивания.

Затем инкубируйте образец при 5% углекислом газе и 37 градусах Цельсия в течение 30 минут. Вручную перемешивайте клеточную кашу каждые пять минут, чтобы обеспечить оптимальное пищеварение. После инкубации передайте клеточную суспензию через сетчатое сетчатое сетчатое ситечко размером 70 микрометров, расположенное поверх конической трубки объемом 50 миллилитров.

Осторожно надавите на сетку с помощью поршня шприца, отбросьте все остающиеся на сетке посторонние ткани и соберите полученную клеточную суспензию в стерильную коническую пробирку объемом 50 миллилитров. Далее центрифуга. Коническая трубка при 320 умноженных на G в течение семи минут при четырех градусах Цельсия.

Выбросьте надосадочную жидкость и повторно суспендируйте клеточную гранулу в 10 миллилитрах DMEM, содержащем 10% FBS и 1% ps. Затем перенесите клеточную суспензию в чашку Петри и инкубируйте суспензию при 5% углекислом газе и 37 градусах Цельсия. Смените среду через 24 часа после первоначального осаждения, чтобы удалить клеточный мусор и большую часть эритроцитов, присутствующих в культуре.

Наконец, меняйте среду каждые три дня в течение следующих двух недель, после чего культуры первичных клеток EOC готовы к последующему применению. Сразу после нанесения покрытия. Эпителиальные раковые клетки яичников или клетки EOC проявляются в виде одиночных клеточных суспензий и в скоплениях с эритроцитами и клеточным мусором.

Культура клеток EOC через три дня после нанесения показывает полуадгезивные клеточные кластеры EOC и меньшую контаминацию эритроцитов. Через неделю после первоначального осаждения клеточная культура EOC превращается в вихрь, похожий на скопление клеток, распространяющихся по пластику тканевой культуры. Типичная морфология эпителиального булыжника может быть видна в сливающемся монослое клеток EOC после 14 дней в культуре.

После просмотра этого видео у вас должно сложиться хорошее представление о том, как выделить и охарактеризовать первичные клетки рака яичников из твердых клинических образцов.