Выделение и Удаление мышиной аорты; Универсальный Техника в исследовании сердечно-сосудистых заболеваний

Общая цель этой процедуры заключается в том, чтобы стерилизовать, изолировать и иссечь мышиную аорту. Это достигается путем предварительного обнажения грудной и брюшной полости. Второй шаг – перфузирование холодным, стерильным физиологическим раствором.

Далее удаляются органы грудной и брюшной полостей, оставляя сердце прикрепленным к аорте. Заключительным этапом является иссечение периваскулярной жировой ткани и адвентной ткани из аорты. В конечном счете, препарирующий микроскоп используется для проверки того, что все окружающие ткани удалены, а аорта может быть использована для различных экспериментальных анализов.

Таким образом, этот метод полезен для ответа на ключевые вопросы в области сердечно-сосудистых исследований, такие как развитие аневризмы и образование атеросклеротических бляшек. И вы можете посмотреть на них, глядя на изменения в молекулярной биологии, такие как экспрессия генов и белков. После усыпления мыши проверьте усыпленное состояние, ущипнув палец ноги.

Далее простерилизуйте кожу, смочив брюшную шерсть с 70% этанолом. Затем закрепите мышь на хирургической доске лежа на спине с вытянутыми придатками. Начните операцию с использования щипцов для обнаружения и изоляции кожи брюшной полости, чуть ниже мечевидного отростка.

Далее поднимите кожу вверх и обрежьте ее ножницами. При этом должна быть обнажена верхняя часть брюшины и нижняя грудная полость. Затем с помощью щипцов и ножниц приподнять мечевидный отросток и сделать боковые разрезы чуть ниже его по подреберным краям.

Чтобы рассечь грудную полость, входите через диафрагму, стараясь при этом не повредить сердце или какие-либо крупные сосуды. Теперь краниально расширяются боковые разрезы по подреберным краям. Таким образом, удалите переднюю часть грудной клетки.

Для завершения этих разрезов может потребоваться тупое рассечение для удаления сердца из передней стенки грудной клетки. Теперь с помощью марли очистите грудную полость от лишней жидкости, чтобы облегчить доступ к органам. Затем удалите легкие с помощью щипцов и ножниц мочку за мочкой.

Затем сердце и аорта должны быть полностью открыты и легко доступны для сбора крови с помощью пункции сердца. Сделайте это сейчас, прежде чем приступать к перфузии для перфузии сердца, наполните шприц объемом 10 мл 10 миллилитров стерильного холодного XPBS. Затем прикрепите иглу 25 калибра.

Осторожно введите иглу в левый желудочек. Затем сделайте разрез в правом предсердии, чтобы на следующем этапе в кровеносной системе не накапливалось чрезмерное давление. Теперь, в течение следующих двух-трех минут, медленно выталкивайте PBS из шприца в сердце.

Во время выброса PBS используйте стерильную марлю для поглощения жидкости, которая будет выливаться из предсердия в месте разреза. Когда PERFUSE 8 будет полностью удален, абсорбируйте оставшуюся жидкость с помощью марли, которая закрывает чистый обзор грудной полости. Чтобы обнажить содержимое желудочно-кишечного тракта, разрежьте брюшную стенку, расширив разрез до надлобковой области.

После этого разрежьте с двух сторон по направлению к нижним конечностям сделать кожный лоскут, который можно прижать или исрезать. При дальнейшем удалении удаляются несколько органов: доли печени, поджелудочной железы, селезенки, кишечника и нижних отделов пищевода. Это открывает вид на аорту.

Будьте особенно осторожны при рассечении перренной области, так как в этой области есть поверхностные ветви от аорты до почечных артерий. Делайте это вскрытие точно и с осторожностью, потому что бактерии ЖКТ могут загрязнять другие ткани, промойте очищенный участок одним XPBS и пропитайте излишки раствора марлей, аорта должна быть легко доступна. Так с помощью ножниц и щипцов отделите аорту от позвоночника.

Целесообразно проводить тупое вскрытие, а также настоятельно рекомендуется использовать препарирующий микроскоп. Аорта может быть удалена, начиная с зубчатой или крановой. Что имеет значение, так это упорядоченный процесс очистки и разделения тканей на предприятии.

При рассечении периваскулярной жировой ткани удалите ее с помощью мелких микроножниц, чтобы избежать повреждения стенки аорты. Это сводит к минимуму вероятность загрязнения фибробластов при культивировании гладкомышечных клеток аорты. Очень важно тщательное иссечение периваскулярной, жировой ткани и адвентиции.

Любая оставшаяся ткань может привести к загрязнению клеточной культуры, а также повлиять на молекулярные анализы. С помощью этой процедуры неповрежденная аорта, берущая начало от сердца, опускается в грудную и брюшную полости. После того, как почечные артерии все еще прикреплены, аорта может быть визуализирована in situ для количественной оценки морфометрических изменений, которые являются диагностическими при изучении аневризм брюшной аорты.

Впоследствии аорта может быть удалена, зафиксирована и окрашена, чтобы посмотреть на гистологические изменения, такие как окрашивание гематом, тоином и эоином, или с окрашиванием по Вер Хоффу Ван Гину, чтобы посмотреть на эластиновые полосы и, таким образом, увидеть структурную целостность аорты. Клетки аорты также могут быть использованы для выделения первичных клеток и для исследований in vitro, таких как исследования жизнеспособности и локализации белка. После процедуры вы можете использовать другие методы, такие как выделение белка и РНК, чтобы посмотреть на экспрессию белка, активность ферментов, а также экспрессию генов.