Оптимизированного протокола для эффективного радиоактивной наночастиц золота с помощью ¹²⁵ I-меченый Azide простетической группы

Общая цель этого протокола заключается в том, чтобы обеспечить эффективный и быстрый метод синтеза меченных радиоактивным йодом наночастиц золота с использованием реакции свободного щелчка, стимулируемой штаммом меди. Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в области радиохимии, такие как синтез радиоизотопов, меченных около трех лет, а также обычные зонды для визуализации на планшетах или в специальных условиях. Основным преимуществом данной методики является то, что от одного до пяти йодов, меченных золотыми частицами, могут быть эффективно синтезированы с использованием азидной протезной группы с отличным радиохимическим выходом и радиохимической чистотой.

Визуальная демонстрация этого метода имеет решающее значение, поскольку этапы оценки радиосвязи сложны для изучения. Поскольку такие процедуры требуют соответствующего оборудования и опыта работы с радиомаркировкой. Наряду с исследованием, студентка радио Ха Ын Шим продемонстрирует процедуру.

Чтобы провести реакцию радиойодирования, добавьте раствор прекурсора в пробирку объемом 1,5 мл. Добавьте в раствор прекурсора 10 микролитров уксусной кислоты при комнатной температуре. Затем добавьте в реакционную смесь 150 мега бекарель йода 125 на 50 микролитров, 0,1 моляра гидроксида натрия.

Добавьте раствор хлорамина Т и закройте микроцентрифужную пробирку, в которой находится реакционная смесь. Инкубируйте реакционную смесь при комнатной температуре в течение пятнадцати минут до завершения реакции радиойодирования. Затем добавьте раствор метабисульфита натрия в реакционную смесь для гашения реакции радиойодирования.

Извлеките 0,2 микролитра сырого продукта, а затем разбавьте его 100 микролитрами 50% ацетонитрила в воде для высокоэффективной жидкостной хроматографии или анализа ВЭЖХ. Анализируйте разбавленный сырой продукт с помощью радиоВЭЖХ с обратной фазой. Переложите всю реакционную смесь во флакон с ВЭЖХ.

Промойте реакционную пробирку 0,5 мл ацетонитрила и добавьте промывку в тот же флакон для инъекций. Разведите собранный раствор с одним мл воды. Чтобы очистить сырой продукт с помощью репаративной ВЭЖХ, введите сырой продукт в препаративную радиоВЭЖХ.

Соберите радиоактивный пик, представляющий собой меченый йодом азид 125, в стеклянную пробирку. Измерьте радиохимический выход фракции с помощью калибратора дозы радиоактивности в соответствии с протоколом производителя. Затем очищенный продукт вводят в аналитическую радиочастотную ВЭЖХ, используя те же условия ВЭЖХ для определения радиохимической чистоты продукта.

Чтобы провести твердофазную экстракцию продукта, разбавьте фракцию, содержащую нужный продукт, 40 мл чистой воды. Добавьте разведенный раствор в предварительно подготовленный картридж TC18. Промойте картридж еще 15 мл воды.

Разбавьте продукт, попавший в картридж, 2 мл ацетона в стеклянный флакон объемом 10 мл, защищенный свинцовым экраном. Измерьте радиоактивность элюированного продукта с помощью калибратора дозы радиоактивности в соответствии с протоколом производителя. После выпаривания ацетона растворите остаток в 100-200 микролитрах ДМСО для следующего этапа радиомаркировки.

Выполните синтез модифицированных наночастиц золота группы DBCO, как описано в текстовом протоколе. Готовят концентрированный раствор модифицированных наночастиц золота группы DBCO с помощью центрифугирования. И отрегулируйте концентрацию наночастиц золота до двух микромоляров.

Добавьте 4,1 мега бекареля меченого азида йода 125 в 5 микролитрах ДМСО в суспензию 50 микролитров 2 микромолярных наночастиц золота. Полученную реакционную смесь инкубировать при температуре 40 градусов Цельсия в течение 60 минут. Извлеките аллоквот объемом 0,2 микролитра из сырого продукта и нанесите его на тонкослойную хроматографию с кодировкой диоксида кремния или планшет TLC.

Разработайте пластину TLC, используя этилацетат в качестве подвижной фазы. Поместите пластину TLC на радиосканер TLC и запустите сканер для мониторинга реакции радиомаркировки в соответствии с протоколом производителя. Очистите реакционную смесь, содержащую меченые йодом 125 наночастицы золота, путем центрифугирования.

Сцедите надосадочную жидкость и добавьте чистую воду для ресуспендирования гранул наночастиц золота. Извлеките 0,2 микролитра аллокота из очищенного продукта и нанесите его на пластину TLC, покрытую диоксидом кремния. Разработайте пластину TLC, используя этилацетат в качестве подвижной фазы.

Поместите пластину TLC на радиосканер TLC и запустите сканер, чтобы определить радиохимический выход и радиохимическую чистоту наночастиц золота, меченных йодом 125, в соответствии с протоколом производителя. Представлены репрезентативные результаты группы протезов с меченным йодом 125 азидом. Радиохимический выход 75% определяли с помощью калибратора дозы радиоактивности.

Результат аналитической радиоВЭЖХ показывает превосходную радиохимическую чистоту продукта. Здесь представлены репрезентативные результаты исследования меченой йодом 125 наночастицы золота. Радиоанализ ТСХ показывает, что как радиохимический выход, так и чистота очищенной наночастицы золота составили более 95%. После освоения этой методики ее можно выполнить за три часа, если она выполнена правильно.

Применение этого метода распространяется на получение различных молекулярных зондов для терапевтических целей ядерной визуализации, поскольку химия мечения в настоящем методе является высокоэффективной и прямолинейной. Не забывайте, что работа с радиоактивным йодом может быть чрезвычайно опасной, и при выполнении этой процедуры всегда следует соблюдать меры предосторожности, такие как более легкие кирпичи или более легкая обувь.