Прогнозирование ампутации с использованием местных циркулирующих моноядерных клеток-предшественников в ангиопластике пациентов с критической ишемией конечностей

Несмотря на то, что ангиопластика улучшает кровоток при критической ишемии конечностей, у некоторых пациентов все равно будет прогрессировать ампутация конечностей. По сравнению с прогнозом, основанным на традиционных факторах риска и внутренних сосудистых особенностях, количество локальных МПК может быть более прогностическим для клинического исхода в отношении эндотелиальной дисфункции и ампутации конечностей. Количество локальных МПК представляет собой многообещающий индикатор прогноза сосудистых событий, таких как ишемия, болезнь сердца и ишемия нижних конечностей, с потенциальным применением в стратификации риска и обеспечении профилактики.

Демонстрировать процедуры будут Эдуардо Вера-Гомес, Алехандро Эрнандес-Патрисио, Каролина Аранда-Родригес, Хуан Ариэль Гутьеррес-Буэндия, Атцин Суа Руис-Эрнандес, Марио Антонио Теллес-Гонсалес и Габриэль Александра Домингес-Перес. Докторами наук из лабораторий экспериментального метаболизма и регенерации тканей также станут Габриэль Эрнандес-Де Рубин и Оскар Антонио Ломан-Зунига. И эти из отделения сосудистой хирургии.

Для определения уровня ящура до и после ангиопластики с помощью сосудистого линейного датчика измерьте диаметр плечевой артерии пациента. Далее расположите манжету сфигмоманометра над местом измерения в области предплечья и втяните в манжету 50 миллиметров ртутного столба выше систолического артериального давления в течение пяти минут до сдувания. В течение 60 секунд после сдувания снова измерьте диаметр плечевой артерии и используйте уравнение для оценки ящура.

Чтобы оценить клиническую тяжесть ишемии конечностей, в соответствии с классификацией Резерфорда, поместите иглу 18 калибра в кровеносный сосуд в выбранном месте паха, а над иглой поместите интродьюсер. Вставьте гибкую направляющую проволоку в интродьюсер и замените направляющую на шестифранцузский интродьюсер. Используя рентгеноскопическое наведение, введите контрастное вещество для определения траектории артерии и заблокированных сосудистых участков.

Внесите в судно два французских навигационных проводника 0,014 и два французских опорных проводника 0,014 и проведите проводники к заблокированному участку. Далее введите один катетер пяти французских, а затем один трехфранцузский катетер, и соберите 10 миллилитров крови с участка, ближайшего к сосудистой обструкции. Поместите образец на лед и снова протяните направляющую проволоку.

Когда проводник будет на месте, введите баллонный катетер для ангиопластики, содержащий надувной баллон, расположенный на конце катетера, и переместите баллонный катетер для ангиопластики к месту поражения. Надуйте баллон против блокирующей бляшки, расположенной у сосудистой стенки, и проверьте восстановление кровотока. Через 30 минут после проведения ангиопластики проведите катетер к ближайшему к сосудистому блоку участку и соберите 10 миллилитров крови.

Затем снимите все проводники и обеспечьте надлежащий послеоперационный уход. Через две недели после ангиопластики оцените клиническую тяжесть ишемии конечностей, разрешающую боль в покое, более низкую ишемию и функциональное сохранение стопы в соответствии с классификацией Резерфорда, а также определите случаи, требующие значительной ампутации из-за неблагоприятного исхода. В течение одного часа после сбора перелейте шесть миллилитров каждого собранного образца крови в новые 15-миллилитровые пробирки и разбавьте образцы в соотношении один к одному в PBS.

Добавьте по два миллилитра градиентной среды плотности в каждую из трех пробирок и добавьте три равные по объему аликвоты разбавленной крови в каждую пробирку не более чем на три четверти. Разделите клетки крови с помощью центрифугирования с градиентом плотности, а с помощью пипетки соберите клетки на границе раздела полученных слоев. Вытащите клетки из каждого образца в одну 15-миллилитровую пробирку и промойте каждый образец шесть раз, используя два миллилитра PBS на одну промывку.

После последней промывки повторно суспендируйте ПДК, содержащую гранулы, в одном миллилитре PBS на образец для подсчета и добавьте один раз по 10 к шести клеткам на пробирку в соответствующее количество пробирок проточной цитометрии объемом пять миллилитров на образец. Гранулируйте клетки центрифугированием и повторно суспендируйте каждый образец клетки в 100 микролитрах интересующего коктейля антител на 10 секунд, прежде чем инкубировать клетки в течение 20 минут при температуре 4 градуса Цельсия в защищенном от света месте. В конце инкубации используйте контрольные антитела, соответствующие изотипу, чтобы установить соответствующие передние и боковые рассеивающие ворота для анализа, и используйте пробирку, содержащую большое количество CD45 и CD34-положительных клеток, для гейтирования NPC.

Для отбора двойных положительных иммунофенотипов создайте новые графики и определите KDR, CD133 и CD184 положительные, CD34 положительные, CD45 положительные клетки, а затем определите основные субпопуляции МПК. Затем количество МПК может быть соотнесено с исходным значением ящура и дельтой ящура после ангиопластики, а также с долей пациентов, нуждающихся в обширной ампутации нижней конечности. В этом репрезентативном анализе, через 30 дней после ангиопластики нижних конечностей, исходное количество CD45-положительных, CD34-положительных, KDR-положительных МПК отрицательно коррелировало с ящуром.

Принимая во внимание, что изменение CD45-положительных, CD34-положительных, CD133-положительных, CD184-положительных МПК после ангиопластики значительно коррелировало с улучшением FMD. Увеличение исходного количества CD45-положительных, CD34-положительных, KDR-положительных субпопуляций после ангиопластики, а также снижение CD45-положительных, CD33-положительных, CD133-положительных, CD184-положительных клеток после ангиопластики также наблюдались у пациентов, которые эволюционировали до ампутации конечностей.