Células adultas isolando-tronco de tecidos moles músculo-esqueléticas com base na velocidade da célula a adesão ao frasco.
Células-tronco adultas têm sido discutidas em relação à sua aplicação na medicina regenerativa. Células-tronco adultas têm gerado uma grande emoção para o tratamento de tecidos lesionados e doentes, devido à sua capacidade impressionante de se submeter multi-linhagem diferenciação celular e sua capacidade de auto-renovação. Mais importante ainda, essas qualidades fizeram-lhes vantajoso para uso em terapias de transplante autólogo de células. O protocolo atual irá introduzir os leitores à técnica preplate modificado onde os tecidos moles do sistema músculo-esquelético, por exemplo, tendão e músculo, são um<sup> St</sup> Enzimaticamente dissociada e depois colocadas em frascos de colágeno revestido com o meio. O sobrenadante, que é composto por médias e as células restantes flutuante, é em série transferidos diariamente para frascos de novo. As células-tronco são as mais lentas a aderir aos frascos que é normalmente leva 5-7 dias (transferências serial ou preplates). Usando esta técnica, células-tronco adultas presentes nesses tecidos podem ser facilmente colhidas através bastante procedimentos não invasivos.
Foi reconhecido que alguns tecidos adultos contêm células-tronco múltiplas. Ao longo dos últimos anos de estudo, células-tronco têm sido detectadas nos tecidos moles músculo-esqueléticas, incluindo o músculo esquelético e tendão. Este protocolo atual detalhes de um procedimento, conhecido como a técnica preplate modificado, que tem sido utilizado com sucesso em nosso laboratório para isolar células-tronco adultas a partir de tendões e músculo esquelético. Usando a técnica preplate modificado descrito a…
The authors have nothing to disclose.
Os autores são muito satisfeito com a Sra. Haiying Pan e Ian Mr. Bellayr por sua ajuda técnica sobre o isolamento de células para os filmes atuais e Kyle Sr. Holden eo Sr. Jonathan Lucas pela ajuda na edição de slide. Muito obrigado a seguinte lista de pessoas que estiveram envolvidas com o desenvolvimento das técnicas preplate modificado ao longo dos últimos anos: os drs. Burhan Gharaibeh, Baohong Cao, Deasy Bridget, Thomas R. Payne, Aiping Lu, Hairong Peng, Hideki Oshima, Bo Zeng, Xiaodong Mu, KIMIMASA Tobita, Ron Jankowski, Makato Ikezawa. Estamos gratos pela assistência técnica de James H. Cummins, Pruchnic Ryan, Feduska Joseph, C. Rebecca Schugar, Pan Haiying e Tebbets Jessica. O autor também gostaria de agradecer o apoio financeiro para este trabalho a partir da Muscular Dystrophy Association (MDA), o National Institutes of Health (NIH), o Departamento de Defesa (DOD), Hospital Infantil de Pittsburgh de UPMC, o Departamento de Cirurgia Ortopédica, e da Universidade de Pittsburgh.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
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DMEM | Invitrogen | #11995-073 | ||
FBS | Invitrogen | #10437-028 | ||
Heat-inactivated horse serum | Invitrogen | #26050-088 | ||
Chick embryo extract | Accurate Chemical | #CE650T-10 | ||
100U ml penicillin/streptomycin | Invitrogen | #15140-122 | ||
Dulbecco’s PBS | Invitrogen | #14190-250 | ||
Hank’s Buffered Salt Solution | Invitrogen | #24020-117 | ||
Collagenase type XI 0.2%(wt/vol) | Sigma-Aldrich | #C7657 | ||
Dispase2.4U ml | Invitrogen | #17105-041 | ||
Trypsin-EDTA0.5%(wt/vol) (10x;5g liter trypsin (1:250) | Invitrogen | #15400-054 | ||
Collagen for coating flask : Type I collagen derived from calf skin 0.1 g liter | Sigma-Aldrich | #C-9791 | ||
DMSO | Sigma | #D-2650 |