Mosquitos Anopheles stephensi são vetores da malária e da Índia que habitam em toda a Ásia. Este vídeo demonstra a técnica para a realização de microinjeções desta espécie com transgenes que conferem resistência à malária para o mosquito. Grande parte da metodologia demonstrada neste vídeo é aplicável às técnicas de microinjeção de outras espécies de mosquito.
Abstract
A introdução de genes exógenos em genomas de mosquitos exige técnicas de microinjeção sob medida para as espécies de interesse específicos. Este protocolo de vídeo demonstra um método utilizado pelo laboratório de James para microinject constrói DNA em embriões de Anopheles stephensi para a geração de mosquitos transformada. Técnicas de preparação agulhas microinjeção, coleta e preparação de embriões e na execução da microinjeção são ilustradas.
Protocol
Preparação antes da microinjeção: Mosquitos alimentam de sangue: para injeção de segunda a quarta-feira fêmeas alimentam na sexta-feira anterior. Para injetar quinta-feira e sexta-feira, as fêmeas se alimentam de segunda-feira da mesma semana. Prepare as agulhas de quartzo usando o programa 2 e tampão isotônica (veja Materiais). "Deitado tubo" para os embriões é o frasco de cultura regulares Drosophila. Algodão molhado no fundo, com um disco d…
Materials
Material Name
Type
Company
Catalogue Number
Comment
Injection Quartz needles
Sutter Instrument
O.D.- 1.0 mm, I.D.-0.70, 10 cm length, are prepared by drawing capillary tubing into a fine 3-8 um with a shaft of approximately 100-300 mm micropipette puller.
Terenius, O., Juhn, J., James, A. A. Injection of An. stephensi Embryos to Generate Malaria-resistant Mosquitoes. J. Vis. Exp. (5), e216, doi:10.3791/216 (2007).