印记是在植物和哺乳动物繁殖的现象。 DNA甲基化起着重要作用的印迹机制。隔离胚乳和确定的印记基因的甲基化状态<em>拟南芥</em>可以是困难的。在这个协议中,我们介绍了如何隔离胚乳,并确定由亚硫酸氢钠测序的甲基化。
拟南芥是一种优秀的模式生物研究表观遗传机制。其中一个原因是DNA甲基丧失功能的空突变是可行的,从而提供了一个系统来研究如何在基因组DNA甲基化的损失,影响经济增长和发展。印指母系和父系等位基因表达差,在哺乳类动物和植物再生产的发展中起着重要作用。 DNA甲基化是决定是否印迹基因的母亲或父亲的等位基因表达或沉默的关键。在开花植物中,有一个再生产的双受精事件:一个精子细胞受精的卵细胞,形成与中央细胞上升到胚乳的胚胎和精子第二保险丝。胚乳是印迹发生在植物的组织。美狄亚,一个SET域polycomb的组基因和荧光增白剂,一种转录因子调节开花,胚乳和其表达的印迹显示前两个基因是由DNA甲基化和去甲基化控制植物。为了确定印记的基因和胚乳中的甲基化模式的状态,我们需要能够先隔离胚乳。由于种子是在拟南芥中的微小的,但它仍然具有挑战性,隔离拟南芥胚乳,并检查其甲基化。在此视频协议中,我们报告如何进行遗传交叉,隔离胚乳组织,并确定由亚硫酸氢钠测序的甲基化状态。
这是比较容易分离胚胎胚乳和种皮,从种皮中分离出来的胚乳,在胚胎发育的早期或中期鱼雷阶段,特别是对种子,但它是单调乏味的。由于种皮不仅有助于某些基因,极少量的组织,例如,MEA和荧光增白剂 ,我们不从种皮中分离出来的胚乳。这意味着,我们可以从胚乳和种皮组织混合物中分离的RNA,检查一个基因的母亲和父亲的等位基因表达,比较,并确定该基因的印迹状态的表…
The authors have nothing to disclose.
作者感谢维持拟南芥女士珍妮弗M.洛梅尔和塔拉北路Rognan。这项工作是从美国圣路易斯大学和美国国立卫生赠款1R15GM086846 – 01和3R15GM086846 – 01S1 W.小的启动资金支持。
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