Basma, bitki ve memeli üreme bir olgudur. DNA metilasyon, imprinting mekanizmaları önemli bir rol oynar. Endosperm Yalıtımlı ve baskılı genlerinin metilasyon durumunun belirlenmesinde<em> Arabidopsis</em> Zor olabilir. Bu protokol, endosperm izole ve metilasyon bisülfit sıralama tarafından nasıl belirleneceği açıklanmaktadır.
Arabidopsis thaliana epigenetik mekanizmalar çalışmak için mükemmel bir model organizmadır. Nedenlerinden biri DNA methyltransferases kaybı fonksiyon-boş mutant böylece bir genom DNA metilasyon kaybı, büyüme ve gelişme nasıl etkilediğini incelemek için bir sistem sağlayarak, yaşayabilir. Basma maternal ve paternal allellerin diferansiyel ifadesi anlamına gelir ve hem de memeli hayvan ve bitkilerin üreme gelişmesinde önemli bir rol oynar. DNA metilasyon baskılı bir gen anne veya baba allel ifade ya da susturulmuş olup olmadığını belirlemek için kritik öneme sahiptir. Çiçekli bitkiler, bir çift üreme döllenme olayı var: tek bir sperm hücresi yumurta hücresi embriyo ve endosperm yol vermek için merkezi bir hücre ile ikinci bir sperm sigortalar oluşturmak için döller. Endospermi imprinting, bitkilerde meydana gelen bir dokudur. MEDEA, bir SET etki Polycomb grup gen, FWA, çiçekli düzenleyen bir transkripsiyon faktörü, endosperm ve kendi ifade baskılı gösterilen ilk iki gen, DNA metilasyon ve demetilasyon tarafından kontrol edilir bitkiler. Bir gen ve endosperm metilasyon paterni imprinting durumunu belirlemek amacıyla, ilk endosperm izole etmek gerekir. Tohum Arabidopsis ufak olduğundan, Arabidopsis endosperm izole ve metilasyon incelemek için zorlu kalır. Bu video protokolde, tohumları endosperm doku izole etmek için, genetik bir çapraz yapmak ve bisülfit sıralama metilasyon durumunu belirlemek için nasıl rapor.
Embriyo, endosperm ve tohum kabuğu ayırmak için nispeten kolaydır, ancak embriyogenez erken veya orta-torpido aşamada özellikle tohum tohum kabuğu, endosperm ayrı sıkıcı. Tohum kabuğu, sadece bazı genler için çok küçük bir miktar doku katkıda bulunmasından dolayı, örneğin, MEA ve FWA, endosperm, tohum kabuğu ayırmak zorunda değilsiniz. Endosperm ve tohum kat dokularda oluşan bir karışım RNA'lar tecrit anlamına gelir ki, bir genin anne ve baba allel ifade, embriyo ifad…
The authors have nothing to disclose.
Yazarlar Arabidopsis bitkilerin bakımı için Bayan Jennifer M. Lommel ve Tara N. Rognan teşekkür ederim. Bu çalışma, Saint Louis Üniversitesi ve Ulusal Sağlık Enstitüleri Sağlık hibe 1R15GM086846-01 ve 3R15GM086846-01S1 W. Xiao başlangıç fonu tarafından desteklenmiştir.
Supplies
Reagents